作者單位:442000 湖北 十堰，十堰市太和醫(yī)院檢驗(yàn)科

婁國平

慢性乙型肝炎肝纖維化指標(biāo)與HBV-DNA的相關(guān)性

作者單位:442000 湖北 十堰，十堰市太和醫(yī)院檢驗(yàn)科

婁國平

[摘要]目的探討慢性乙型肝炎血清肝纖維化指標(biāo)與HBV-DNA的相關(guān)性。方法收集我院2010年3月~2013年5月收治的慢性乙型肝炎患者480例，將其按HBV-DNA水平分為5組(A組HBV-CAN<103IU/L，B組103IU/L≤HBV-CAN<105IU/L，C組105IU/L≤HBV-CAN<106IU/L，D組106IU/L≤HBV-CAN<108IU/L，E組HBV-CAN≥108IU/L)，比較其血清HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN水平和肝纖維化程度，并進(jìn)行HBV-DNA與肝纖維化指標(biāo)的Spearman相關(guān)性分析。結(jié)果不同HBV-DNA水平患者肝纖維化指標(biāo)HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HBV-DNA與肝纖維化指標(biāo)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，HBV-DNA與HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN相關(guān)系數(shù)分別為0.874、0.815、0.748和0.789(均P<0.05)。結(jié)論慢性乙型肝炎病毒載量HBV-DNA與肝纖維化指標(biāo) HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN之間存在相關(guān)關(guān)系，但乙肝肝纖維化判斷應(yīng)聯(lián)合轉(zhuǎn)氨酶等綜合分析。

[關(guān)鍵詞]肝纖維化；透明質(zhì)酸；HBV-DNA

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)持續(xù)感染是導(dǎo)致肝纖維化、肝硬化的主要原因[1]。有研究報道[2]，約23%和4.4%的HBV感染者發(fā)展為肝硬化和原發(fā)性肝癌。有研究顯示[3]，肝纖維化指標(biāo)與肝硬化進(jìn)展間存在關(guān)系，早期抗病毒治療可逆轉(zhuǎn)肝纖維化。為進(jìn)一步明確肝纖維化指標(biāo)與病毒載量的關(guān)系，本研究對480例慢性乙型肝炎患者血清透明質(zhì)酸等肝纖維化指標(biāo)與HBV-DNA含量進(jìn)行探討，以期為肝硬化的早期診斷提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1病例資料 觀察對象為我院2010年3月~2013年5月收治的慢性乙型肝炎患者，共480例，均符合《慢性乙型肝炎防治指南》(2005年)診斷標(biāo)準(zhǔn)。治療前半年內(nèi)未服用抗病毒、抗纖維化藥物和免疫調(diào)節(jié)劑，并排除丙型肝炎病毒(HCV)、丁型肝炎病毒(HDV)及人類免疫缺陷病毒(HIV)感染者；排除失代償期肝硬化、合并酒精性肝炎患者和妊娠及哺乳期女性。其中男性281例，女性199例，年齡28~46(31.5±10.6)歲；輕度慢性乙型肝炎187例，中度141例，重度72例，肝硬化80例。本研究遵循赫爾辛基宣言和臨床藥理試驗(yàn)管理規(guī)范(GCP)，經(jīng)院內(nèi)倫理委員會同意，所有患者知情同意并簽署同意書。

1.2檢測指標(biāo)及方法 患者住院次日清晨，空腹、安靜狀態(tài)下抽取肘靜脈血5 ml，3000 r/min離心分離血清，-70 ℃保存待檢。HBV DNA采用實(shí)時定量PCR法(Cobas Ampliprep/Cobas Taqman)檢測；血清透明質(zhì)酸(HA)、四型膠原(Ⅳ-C)、Ⅲ型前膠原(PCⅢ)和層黏蛋白(LN)以放免法測量，ALT、AST采用連續(xù)比色法檢測，試劑均由上海生物制品研究所提供，按說明書操作。在B超定位下取肝組織活檢，根據(jù)病理檢查結(jié)果將纖維化程度分為S0、S1、S2、S3和S4五級。

1.3分組將觀察對象按HBV-DNA水平分為5組，分別為：A組HBV-CAN<103IU/L；B組103IU/L≤HBV-CAN<105IU/L；C組105IU/L≤HBV-CAN<106IU/L；D組106IU/L≤HBV-CAN<108IU/L；E組HBV-CAN≥108IU/L。

2結(jié)果

2.1不同HBV-DNA水平與肝組織纖維化程度的關(guān)系 通過Mann-Whiteny秩和檢驗(yàn)和F檢驗(yàn)，各組別間肝纖維化程度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=9.254,P<0.05)，HBV-DNA與肝纖維化程度呈正相關(guān)(r=0.187，P<0.01)。見表1。用卡方統(tǒng)計(jì)量進(jìn)行線性趨勢檢驗(yàn)，計(jì)算得擬合優(yōu)度χ2=63.16(P<0.01)，回歸斜率β=0.183(P<0.01)，進(jìn)一步說明兩變量之間存在線性變化趨勢，即隨著HBV-DNA水平升高，肝纖維化程度增大。

表1不同HBV-DNA水平與肝組織纖維化程度的關(guān)系(例)

組別nS0S1S2S3S4A組104393512711B組120412220316C組123235817205D組781618161612E組551112101111

2.2不同HBV-DNA水平組間轉(zhuǎn)氨酶水平的比較不同HBV-DNA水平組間AST和ALT水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=36.252,P<0.05)，兩兩比較發(fā)現(xiàn)，A組AST、ALT水平低于其他組(P<0.05)，但B、C、D、E組間差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

2.3不同HBV-DNA水平組間肝纖維化指標(biāo)比較 不同HBV-DNA水平組間肝纖維化指標(biāo)HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=21.523,P<0.05)，隨著HBV-DNA水平升高，四指標(biāo)均呈現(xiàn)增加趨勢。HA自B組開始即與A組有區(qū)別，隨后C、D、E各組均與前組區(qū)別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；PCⅢ、LN自D組開始與前3組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，D、E兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；Ⅳ-C自C組開始與A組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，D、E組分別與A、B、C組和A、B、C、D組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

2.4HBV-DNA與肝纖維化指標(biāo)相關(guān)性分析 HBV-DNA與肝纖維化指標(biāo)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，HBV-DNA與HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN相關(guān)系數(shù)均>0.75(P<0.05，表4)。

表2　不同HBV-DNA水平組間轉(zhuǎn)氨酶水平的比較

注：與其他組相比，①P<0.05

表4　HBV-DNA與肝纖維化指標(biāo)相關(guān)性分析結(jié)果(ng/ml)

表3　不同HBV-DNA水平組間肝纖維化指標(biāo)比較

注：與A組相比，①P<0.05；與B組相比，②P<0.05；與C組相比，③P<0.05；與D組相比，④P<0.05

3討論

研究認(rèn)為[4]，肝纖維化、肝硬化是機(jī)體對肝臟慢性損傷的主動性修復(fù)過程，以肝臟細(xì)胞外基質(zhì)(FCM)沉積和增生為主要特征，可表現(xiàn)為肝小葉和肝竇毛細(xì)血管內(nèi)纖維化。薛永杰等[5]研究認(rèn)為，慢性乙型肝炎肝硬化的主要環(huán)節(jié)為肝臟星狀細(xì)胞的激活增生，轉(zhuǎn)化為成纖維細(xì)胞，并大量合成FCM，沉積于肝內(nèi)出現(xiàn)肝硬化。也有學(xué)者認(rèn)為[6]，病毒在肝臟內(nèi)大量復(fù)制，不僅可導(dǎo)致機(jī)體正常的免疫清除，也造成機(jī)體的免疫病理反應(yīng)，出現(xiàn)肝細(xì)胞損害、肝功能異常，其病理反應(yīng)結(jié)果的直接體現(xiàn)就是肝臟組織的修復(fù)和纖維化過程。而乙肝患者血清HBV-DNA水平可直接反映病毒在肝臟的復(fù)制程度，其水平與肝臟損傷、修復(fù)間存在動態(tài)平衡。本研究通過實(shí)時定量PCR法對HBV-DNA含量進(jìn)行測量，能夠真實(shí)反映乙肝病毒的感染、復(fù)制和病程動態(tài)變化。

目前對肝硬化診斷，以肝臟穿刺病理學(xué)檢測為標(biāo)準(zhǔn)[7]。本研究也同樣證實(shí)，HBV-DNA水平在不同肝纖維化程度間存在差異。但穿刺病理法創(chuàng)傷性較大，限制了其應(yīng)用。目前越來越多學(xué)者提出利用HBV-DNA和肝纖維化指標(biāo)，可以在一定程度上達(dá)到無創(chuàng)診斷的目的。HA為肝細(xì)胞外間質(zhì)中蛋白多糖的組成部分，在肝臟受損時，HA含量發(fā)生相應(yīng)變化，是肝細(xì)胞急、慢性損傷的標(biāo)志；PCⅢ在肝纖維化早期合成活躍，是肝組織纖維化程度的指標(biāo)；Ⅳ-C是構(gòu)成組織基底膜的主要成分，可反映基質(zhì)膠原的更新變化；LN則能夠及時反映基質(zhì)膠原的更新率，與Ⅳ-C一起可綜合反映肝纖維化活動狀態(tài)。目前有研究認(rèn)為[8]，判斷肝纖維化的程度對肝硬化診治極具臨床意義，肝纖維化4項(xiàng)(HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN)可以作為肝纖維化動態(tài)發(fā)展的指標(biāo)。

本研究發(fā)現(xiàn)，隨著HBV-DNA含量的增高，透明質(zhì)酸和其他肝纖維化指標(biāo)也隨之上升，二者相關(guān)系數(shù)均>0.75(P<0.05)，存在明顯直線相關(guān)關(guān)系。說明在對乙肝患者進(jìn)行治療過程中，控制病毒載量能夠有效控制肝纖維化的進(jìn)展。相關(guān)文獻(xiàn)報道[9]，通過對慢性乙肝患者進(jìn)行抗病毒藥物治療，也發(fā)現(xiàn)治療后HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN均低于治療前。但也有學(xué)者[10]不支持此觀點(diǎn)，認(rèn)為HBV-DNA與HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN之間不存在相關(guān)關(guān)系，這可能是由于慢性乙肝肝硬化發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，除病毒復(fù)制外，機(jī)體正常或病理免疫因素對其也有影響；但也可能由于檢測的方法、設(shè)備、試劑不同所致。

研究還發(fā)現(xiàn)，不同HBV-DNA水平患者的轉(zhuǎn)氨酶水平不一致(P<0.05)。但對不同病毒載量各組進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，雖然HBV-DNA陰性組(A組)ALT、AST與陽性組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但在HBV-DNA陽性組(B、C、D、E組)內(nèi)部，差異并不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說明肝細(xì)胞損害程度與HBV復(fù)制水平間并無直接相關(guān)關(guān)系。在整個肝功能損害發(fā)生的過程中，病毒復(fù)制可能僅僅是免疫應(yīng)答的開始因子，宿主的免疫能力可能起到更為重要的作用。

綜上所述，在乙肝肝硬化發(fā)展過程中，病毒載量HBV-DNA和肝纖維化指標(biāo) HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN之間存在相關(guān)關(guān)系，臨床對乙肝患者應(yīng)重視早期抗病毒治療，除控制病情外，還可以防止肝纖維化和肝硬化的形成和發(fā)展。但臨床檢查和治療不能單純依靠某一項(xiàng)指標(biāo)，應(yīng)考慮在無創(chuàng)檢查的基礎(chǔ)上，聯(lián)合肝纖維化指標(biāo)、轉(zhuǎn)氨酶、病毒載量等全面評價，以建立客觀、合理、標(biāo)準(zhǔn)的評價系統(tǒng)，從而對臨床診斷和治療選擇起到指導(dǎo)作用。

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Correlation between fibrosis indexes and HBV-DNA in patients with chronic hepatitis B virus

Lou GuopingDepartment of Laboratory, Taihe Hospital of Shiyan City, Shiyan, Hubei, 442000, China

[Abstract]ObjectiveTo explore the correlation between serum liver fibrosis indexes and HBV-DNA of patients with hepatitis B virus (HBV). Methods 480 patients with chronic HBV to receive treatment in our hospital from March 2010 to May 2013 were collected and divided into five groups according to their HBV-DNA levels (group A: HBV-CAN<103IU/L; group B: 103IU/L ≤ HBV-CAN < 105IU/L; group C: 105IU/L ≤ HBV-CAN < 106IU/L; group D: 106IU/L ≤ HBV-CAN < 108IU/L; group E: HBV-CAN≥ 108IU/L). Their serum HA, PCⅢ, Ⅳ-C, and LN levels as well as severity of liver fibrosis were compared and Spearman correlation analysis was made between HBV-DNA and liver fibrosis indexes. ResultsThe differences in fibrosis indexes HA, PCⅢ, Ⅳ-C, and LN of patients at different HBV-DNA levels were statistically significant (P<0.05). The analysis on correlation between HBV-DNA and liver fibrosis indexes showed that the correlation coefficients of HBV-DNA with HA, PCⅢ, Ⅳ-C, and LN was 0.874, 0.815, 0.748, and 0.789, respectively (allP<0.05). Conclusion There is a correlation between the HBV-DNA load in patients with chronic HBV and the fibrosis indexes HA, PC III, IV -C and LN, but judgment of HBV fibrosis should be based on comprehensive analysis of transaminase and other factors.

[Key words]liver fibrosis; hyaluronic acid; HBV-DNA

(收稿日期:2014-12-13)

文章編號1004-0188(2015)04-0383-03

doi:10.3969/j.issn.1004-0188.2015.04.013

中圖分類號R 512.62

文獻(xiàn)標(biāo)識碼A