劉彩霞 ，孫 維，孫 凱，李 佳，胡國華，史寶和，居乃新，陳秋惠

家族性皮質肌陣攣震顫性癲癇(Familial cortical myoclonic tremor with epilepsy，FCMTE)又稱良性成人家族性肌陣攣性癲癇(Benigh adult familial myoclonic epilepsy，BAFME)，是一種常染色體顯性遺傳疾病。早些年，日本家系和意大利家系研究將FCTME 致病基因分別粗略的定位8q23.3-24.1、2q11.1-q12.2，國外遺傳分析顯示相關致病基因與上述兩個基因位點不連鎖。我們對該家系的基因位點分析從篩查8q23.3-24.1 開始著手。

1 資料與方法

1.1 一般資料

我們已報道的臨床擬診為家族性皮質肌陣攣震顫性癲癇一家系患者［1］。臨床特點符合以下診斷標準［2］:(1)連續(xù)3 代發(fā)病，均成年起病，男女均受累，呈常染色體顯性遺傳;(2)表現為肢體遠端震顫、癲癇發(fā)作，部分患者于光刺激、驚嚇、情緒刺激時誘發(fā)全面強直發(fā)作;(3)服β 受體阻滯劑無效，口服苯巴比妥等抗癲癇藥物有效，為非進展病程。(4)體感覺誘發(fā)電位支持震顫來源于皮質。

1.2 研究方法與試劑

1.2.1 樣品采集與DNA 提取 在獲得患者(7例)和對照者(患者的直系親屬及配偶13 例，其中1例為可疑病例)知情同意后取外周血5 ml，用家系編號，詳細標記血樣。利用血液基因組DNA 提取試劑盒(天根)提取各樣本基因組DNA 。

1.2.2 選擇與設計微衛(wèi)星引物 我們根據已報道的8q23.3-24.1 染色體位點，在NCBImapview圖譜中找到這些區(qū)域中合適遺傳距離的STR(見表1)。

1.2.3 PCR 反應、產物處理、毛細管電泳及結果收集 對選擇的STR 位點分別合成普通引物及5'標記FAM 的熒光引物，然后進行熒光引物標記的PCR 反應。在ABI PRISM 3730 DNA Analyzer 上用PE 公司的POP-4 分離膠，60 ℃、15KV 下，電泳30 min，選用ABI PRISM GeneMapper Software(Ver3.5)收集實驗數據，進行分子量內標校正和擴增片段大小分析，并讀取全部微衛(wèi)星標記物等位基因片段的大小。

1.2.4 基因型分析及連鎖分析 利用Gene-MapperV3.5 進行基因分型，確定家系中各個樣本在每個STR 標記處的分型情況。在Linkage5.1 軟件中設定疾病基因頻率、疾病外顯率及擬表型頻率，θ=0～0.5 進行連鎖分析，記錄LOD 值。

2 結果

我們在8q23.3-q24.1 染色體區(qū)段選取的5 個STR 位點，在θ=0.0 時這5 個STR 位點與致病基因的兩點LOD 值均＜-2(見表2)。

表1 已報道致病位點所選擇的STR 信息及引物序列

表2 8q23.3-q24.1 染色體區(qū)段STR 位點與該家系致病基因兩點連鎖分析

3 討論

家族性皮質肌陣攣震顫性癲癇(FCMTE)又稱良性成人家族性肌陣攣性癲癇(BAFME)、家族性成人肌陣攣癲癇(familial adult myoclonic epilepsy，FAME)等，是一種少見的遺傳性癲癇綜合征，為常染色體顯性遺傳疾病。近年來，隨著遺傳學研究工作的不斷深入，該病逐漸被人們重視起來。迄今，世界已報道了100 多個該病家系，中國、日本、荷蘭、意大利、土耳其等國家均有報道，其中主要分布于日本和意大利兩國，日本發(fā)現的家系已經超過60 例。目前，我國也陸續(xù)報道了多個該病的家系，我們對研究的這個FCMTE 家系的臨床特點也做了相應報道［1］。

早些年，日本家系和意大利家系研究將致病基因分別粗略的定位于8q23.3-24.1，2p11.1-q12.2［2，3］，近年來在法國、泰國和中國又陸續(xù)發(fā)現了5p15.31-p15、3q26.32-3q28 和10p15 等多個基因位點［4～6］。參考已報道的文獻，我們在8q23.3-q24.1染色體區(qū)段選取了5 個STR 位點，如果選擇的5 個STR 標記與致病基因的兩點連鎖參數LOD 值＜-2，否定該家系的致病基因在此區(qū)段;LOD 值＞1，那么本家系致病基因在此區(qū)段;如果LOD 值＞3 就能夠肯定該家系的致病基因在此區(qū)段。結果在θ=0.0時，我們分析的5 個STR 位點與致病基因的兩點LOD 值均＜-2。根據此數據我們推斷此家系的致病基因位點不在8q23.3-q24.1。但還存在以下可能:(1)我們研究的該家系致病基因不在8q23.3-q24.1。(2)STR 具有人種和地域性，NCBI 數據庫的STR Marks 是以歐洲人群為模板的，而雜合度受遺傳背景的影響比較大，對我國人群針對性不夠強，以致造成STR 位點的等位基因變化范圍、重復單元、雜合度等數據與數據庫報道有一定出入。另外，也可能我們的家系樣本量不足夠大，或是我們選擇的STR 位點在本家系的雜合率相對較低或由于STR 標記在染色體區(qū)段密度相對小。在以后的研究工作中我們將繼續(xù)增加本病的其他家系或在相應的區(qū)域增加樣本量，以累加LOD 值;也可嘗試使用不同的連鎖分析方法對分型結果進行分析，綜合各種計算結果判斷。總之，盡管本報道的實驗結果為陰性，但為FCMTE 的遺傳學研究提供了一份良好的研究資料。

［1］劉彩霞，陳秋惠，居乃新，等.家族性皮質肌陣攣震顫性癲癇一家系［J］.中華醫(yī)學遺傳學雜志，2014，31(6):807-808.

［2］Van Rootselaar AF，Van Schaik IN，Van den Maagdenberg AM，et al.Familial cortical myoclonic tremor with epilepsy:a single syndromic classification for a group of pedigrees bearing common features［J］.Mov Disord，2005，20(6):665-673.

［3］Striano P，Chifari R，Strino S，et al.A new benign adult familial myoclonic epilepsy(BAFME)pedigree suggesting linkage to chromosome 2p11.1-q12.2［J］.Epilepsia，2004，45:190-192.

［4］Licchetta L，Pippucci T，Bisulli F，et al.A novel pedigree with familial cortical myoclonic tremor and epilepsy (FCMTE):clinical characterization，refinement of the FCMTE2 locus，and confirmation of a founder haplotype［J］.Epilepsia，2013，54(7):1298-1306.

［5］Depienne C，Magnin E，Bouteiller D，et al.Familial cortical myoclonic tremor with epilepsy:the third locus (FCMTE3)maps to 5p［J］.Neurology，2010，74(24):2000-2003.

［6］Yeetong P，Ausavarat S，Bhidayasiri R.et al.A newly identified locus for benign adult familial myoclonic epilepsy on chromosome 3q26.32-3q28［J］.Eur J Hum Genet，2013，21(2):225-228.