梁 君，張科立，張珂瑩，謝云陸，成卓敏

(寧波華廈現(xiàn)代農(nóng)業(yè)研究所，浙江寧波 315000)

鐵皮石斛又名黑節(jié)草，為蘭科石斛屬多年生草本植物，是我國傳統(tǒng)名貴中藥［1］。因其自然成苗率極低，通過植物組織培養(yǎng)大量繁育鐵皮石斛組培苗已是解決種苗不足的有效途徑。但鐵皮石斛組培苗在煉苗馴化期間常因白絹病 (Sclerotium rolfssi Sacc．)造成大量死苗，一般死亡率在30%左右，嚴(yán)重者可達(dá)70%以上［2-3］。在實(shí)驗(yàn)室和塑料鋼管大棚內(nèi)，對(duì)鐵皮石斛白絹病菌進(jìn)行室內(nèi)藥劑篩選和防治試驗(yàn)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑

50%腐霉利可濕性粉劑 (日本住友化學(xué)株社分社);250 g·L-1嘧菌酯懸浮劑 (瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司);400 g·L-1嘧霉胺懸浮劑 (德國拜耳作物科學(xué)公司);450 g·L-1咪鮮胺水乳劑(廣東東莞市瑞德豐生物科技有限公司);400 g·L-1克菌.戊唑醇懸浮劑 (以色列馬克西姆化學(xué)公司);30%甲霜·惡霉靈水劑 (中農(nóng)住商 (天津)農(nóng)用化學(xué)品有限公司);250 g·L-1吡唑醚菌酯乳油 (德國巴斯夫有限公司);500 g·L-1甲基硫菌靈懸浮劑 (江蘇龍燈化學(xué)有限公司);10%苯醚甲環(huán)唑水分散劑 (瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司);2.5%啶氧菌酯懸浮劑 (美國杜邦公司);50%異菌脲可濕性粉劑 (江西禾益化工有限公司);325 g·L-1苯甲·嘧菌酯懸浮劑 (瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司);20%腐霉利懸浮劑 (江西禾益化工有限公司)。以上藥劑均為市售。

1.2 供試菌株

鐵皮石斛白絹病病菌菌株從寧波華廈現(xiàn)代農(nóng)業(yè)研究所連棟大棚苗床分離純化獲得，并經(jīng)回接證實(shí)其具有極強(qiáng)的致病性。菌餅為白絹病菌在PDA平板上4 d培養(yǎng)物，直徑1 cm;菌核為白絹病菌在PDA平板上10 d培養(yǎng)物，粒徑約0.2 cm。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 藥劑初篩

采用管碟法［4］。將3個(gè)滅菌消毒的牛津杯均勻插入含PDA培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，接種白絹病菌餅(直徑1 cm)于培養(yǎng)皿中心。將配置的1～13號(hào)藥劑1 000倍液注入牛津杯中，每杯200μL，置25℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。每種藥劑處理重復(fù)5次，3 d后觀察藥劑對(duì)白絹病菌菌絲生長的抑制程度。

1.3.2 防治鐵皮石斛白絹病菌的最適藥劑濃度測(cè)定

采用生長速率法測(cè)定［4］。將藥劑與PDA培養(yǎng)基混勻，配制成所需濃度的藥液培養(yǎng)基混合物。處理1接種白絹病菌菌餅 (直徑1 cm)，每皿4片;處理2接種大小近似成熟白絹病菌菌核 (粒徑約0.2 cm)，每皿4粒。置于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，3 d后用游標(biāo)卡尺測(cè)量菌落直徑，記載菌落豐滿度，觀察菌核萌發(fā)情況，計(jì)算抑菌率。每處理重復(fù)3次。

1.3.3 2種藥劑對(duì)白絹病菌核抑制試驗(yàn)

將成熟的白絹病菌菌核分別置于甲霜·惡霉靈和苯甲·嘧菌酯1 000倍的藥液中，于12，24，48，72，96，120，144和168 h后取出，用無菌水清洗后置于PDA培養(yǎng)基上，置25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，3 d后觀察菌核萌發(fā)情況，計(jì)算抑制率。每處理重復(fù)5次。

1.3.4 2種藥劑防治鐵皮石斛白絹病的田間試驗(yàn)

試驗(yàn)在本公司鋼管大棚內(nèi)苗床上進(jìn)行。床上基質(zhì)為前茬石斛育苗后再利用的松樹皮碎片和小石塊，每床長42 m，寬1.5 m。移栽馴化苗每叢3株，株行距為12 cm×18 cm。將室內(nèi)篩選較好的2種藥劑分別參照廠家推薦使用濃度以甲霜·惡霉靈1 000倍液和苯甲·嘧菌酯1 500倍液配制成供試藥劑，以清水為對(duì)照，每處理20 m2(800叢)，重復(fù)3次。馴化苗移栽后先用藥劑澆根，隨后每隔7 d噴藥1次，連續(xù)3次，30 d后調(diào)查發(fā)病株數(shù)和發(fā)病級(jí)數(shù)，計(jì)算病情指數(shù)和防治效果［5］。

鐵皮石斛白絹病病情分級(jí)參照以下標(biāo)準(zhǔn):0級(jí)為植株健壯無病;1級(jí)為1叢植株中有1株感病，地上莖基部變黃;2級(jí)為1叢植株中有2株莖部感病;3級(jí)為1叢植株中3株全部感病，植株黃化;4級(jí)為整叢植株萎蔫枯死，莖根腐爛。

2 結(jié)果與分析

2.1 鐵皮石斛白絹病菌的藥劑初篩

由表1可知，腐霉利、咪鮮胺、克菌·戊唑醇、甲基硫菌靈、異菌脲和腐霉利6種藥劑在1 000倍下對(duì)鐵皮石斛白絹病無抑制作用;嘧霉胺、吡唑醚菌酯和苯醚甲環(huán)唑3種藥劑對(duì)白絹病有一定抑制作用，嘧菌酯、甲霜·惡霉靈、啶氧菌酯和苯甲·嘧菌酯4種藥劑對(duì)白絹病有較強(qiáng)的抑制作用。

2.2 防治鐵皮石斛白絹病病菌藥劑濃度測(cè)定

試驗(yàn)所用藥劑為1.3.1篩選出的4種對(duì)白絹病菌有抑制效果的藥劑。

由表2可知，嘧菌酯500倍液、啶氧菌酯500倍液抑菌率均未達(dá)到90%，甲霜·惡霉靈2 500倍液、苯甲·嘧菌酯35 000倍液抑菌率達(dá)到100%。苯甲·嘧菌酯抑制白絹病菌菌絲生長的有效濃度比甲霜·惡霉靈低14倍。選用甲霜·惡霉靈和苯甲·嘧菌酯對(duì)白絹病菌核萌發(fā)抑制效果進(jìn)行測(cè)定(表3)可以看出，雖然菌核萌發(fā)抑制率均為0，但苯甲·嘧菌酯2 500～20 000倍液對(duì)白絹病菌菌核萌發(fā)抑制效果明顯，僅菌核周邊有少量菌絲向外伸展，菌落疏松呈稀薄層。故本試驗(yàn)篩選出的苯甲·嘧菌酯為最適防治鐵皮石斛白絹病藥劑。

表1 不同藥劑對(duì)白絹病菌的抑制效果

表2 不同藥劑及濃度對(duì)白絹病菌絲伸展的抑制效果

表3 2種藥劑不同濃度對(duì)白絹病菌菌核萌發(fā)的抑制效果

注:表中0表示菌核未萌發(fā)，+表示菌核周邊菌絲稀少，++表示菌核周邊菌絲稠密豐厚，+++表示菌核周邊菌絲稠密豐厚。

2.3 2種藥劑對(duì)白絹病菌核滅殺效果測(cè)定

試驗(yàn)所用藥劑為1.3.2中抑制白絹病菌效果較好的甲霜·惡霉靈和苯甲·嘧菌酯。從表4中可以看出，白絹病菌菌核在苯甲·嘧菌酯1 000倍藥液中浸泡處理168 h，抑菌率達(dá)到90.1%，菌核萌發(fā)抑制率達(dá)到26.7%，菌核周邊僅有少量菌絲伸展，菌落疏松，菌絲畸形。該試驗(yàn)與1.3.2試驗(yàn)結(jié)果一致，再次驗(yàn)證了苯甲·嘧菌酯為最適防治鐵皮石斛白絹病藥劑。

表4 2種藥劑對(duì)白絹病菌菌核滅殺效果

2.4 2種藥劑防治鐵皮石斛白絹病田間試驗(yàn)

試驗(yàn)選用甲霜·惡霉靈1 000倍液和苯甲·嘧菌酯1 500倍液，以清水為對(duì)照。

由表5可知，苯甲·嘧菌酯病株防效和病指防效均達(dá)到90%以上，其中病株防效高出甲霜·惡霉靈29.13%，病指防效高出23.04%，苯甲·嘧菌酯明顯防效優(yōu)于甲霜·惡霉靈，與室內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果一致。

表5 2種藥劑防治鐵皮石斛白絹病田間防效

3 小結(jié)與討論

在供試的13種化學(xué)藥劑中，對(duì)鐵皮石斛白絹病菌抑制活性較強(qiáng)的化學(xué)藥劑有嘧菌酯、甲霜·惡霉靈、啶氧菌酯和苯甲·嘧菌酯。其中，甲霜·惡霉靈2 500倍液和苯甲·嘧菌酯35 000倍液對(duì)白絹病病菌就有很好的抑制效果，平均抑菌率都為100%。在2種藥劑對(duì)白絹病菌菌核抑制試驗(yàn)中，苯甲·嘧菌酯比甲霜·惡霉靈抑制菌核萌發(fā)的效果好，在2 500～20 000倍液對(duì)白絹病菌菌核的萌發(fā)抑制效果十分明顯，供試菌核僅少量長出菌絲，菌落稀薄疏松。白絹病菌菌核在苯甲·嘧菌酯1 000倍液中浸泡168 h，菌核萌發(fā)抑制率達(dá)26.7%，抑制率達(dá)90.1%，菌核周邊僅少量菌絲長出，菌絲畸形。田間防治試驗(yàn)，苯甲·嘧菌酯1 500倍液對(duì)鐵皮石斛白絹病病株防效達(dá)90.72%，病指防效達(dá)94.37%，表明苯甲·嘧菌酯是防治鐵皮石斛白絹病病菌的理想藥劑。

鐵皮石斛白絹病是土傳根部病害，其病菌以菌絲和菌核在土壤和病殘組織中存活較長時(shí)間［5］，要鏟除該病菌為害，僅依靠藥劑防治遠(yuǎn)不夠，需要結(jié)合綜合防治。在栽種鐵皮石斛前，對(duì)鐵皮石斛栽培基質(zhì)進(jìn)行滅菌處理［6］，移栽初期加強(qiáng)肥水管理才能控制鐵皮石斛白絹病的發(fā)生和危害，從而取得良好的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。

［1］ 付開聰，馮德強(qiáng)，張紹，等.鐵皮石斛集約化高產(chǎn)栽培技術(shù)研究 ［J］.中草藥，2003，34(2):177-179.

［2］ Xiao Z J，Li X X，Duag S，et al.The idengtification on patheogen of harbadosnut leaf blight ［J］.Mycosystema，2010，29(6):874-878.

［3］ 丁彩平，黃思良，陸少峰.韭菜白絹病菌的分離及其特性鑒定 ［J］.西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2005，18(3):302-305.

［4］ 方中達(dá).植病研究方法［M］.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2001:112-125.

［5］ 馬琳，銀福軍，曾緯，等.黃連白絹病生物學(xué)特性及防治藥劑的篩選 ［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37(34):16905-16908，16932.

［6］ 斯金平，諸燕，朱玉球.鐵皮石斛人工栽培技術(shù)研究與應(yīng)用進(jìn)展 ［J］.浙江林業(yè)科技，2009，29(6):66-70.