陳 錦，徐紅煒，張 振，胡 波

(1.湖北省咸寧市通城縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 437400；2.湖北省武漢市婦女兒童醫(yī)療保健中心檢驗(yàn)科 430016；3.廣東省中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院，廣州 510275)

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·臨床研究·

3項(xiàng)聯(lián)合檢測對手足口病患兒腦神經(jīng)損傷的診斷價(jià)值*

陳 錦1，徐紅煒1，張 振2△，胡 波3

(1.湖北省咸寧市通城縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 437400；2.湖北省武漢市婦女兒童醫(yī)療保健中心檢驗(yàn)科 430016；3.廣東省中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院，廣州 510275)

目的 探討聯(lián)合檢測血清S100β蛋白(S100β)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)和髓鞘堿性蛋白(MBP)對手足口病(HFMD)患兒腦神經(jīng)損傷的診斷價(jià)值。方法 將246例HFMD患兒按影像學(xué)檢測結(jié)果分為重型(63例)和輕型(183例)兩組，入院后第1～7天每天上午抽靜脈血后，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測246例HFMD患兒S100β、NSE和MBP。同時(shí)選擇66例健康兒童作為健康對照組。結(jié)果 63例重型HFMD患兒S100β、NSE和MBP結(jié)果均顯著升高，其檢測值與183例輕型HFMD患兒及66例健康對照者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；輕型患兒與健康對照組相比S100β差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而NSE和MBP檢測結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 重型與輕型HFMD患兒S100β、NSE和MBP存在不同的變化趨勢，聯(lián)合檢測S100β、NSE和MBP可提高HFMD患兒腦神經(jīng)損傷的診斷率、明確療效和監(jiān)測預(yù)后。

S100β蛋白； 神經(jīng)元特異性烯醇化酶； 髓鞘堿性蛋白； 手足口病

手足口病(HFMD)是由多種腸道病毒感染引起的兒科常見傳染病，以5歲以下兒童多發(fā)，臨床主要以口腔、手掌和足趾等部位出現(xiàn)斑丘疹、皰疹為特征?；颊卟∏橐话爿^輕，預(yù)后良好，但個(gè)別患者可發(fā)展為重癥病例，出現(xiàn)腦神經(jīng)、心肌損傷等并發(fā)癥[1-2]。臨床對HFMD患兒是否有腦神經(jīng)損傷較難診斷，S100β蛋白(S100β)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)和髓鞘堿性蛋白(MBP)水平的變化可反映神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)髓鞘膜結(jié)構(gòu)損傷嚴(yán)重程度的情況[3]。本文通過檢測246例HFMD患兒S100β、NSE和MBP，旨在探討聯(lián)合檢測S100β、NSE和MBP對HFMD患兒腦神經(jīng)損傷的診斷價(jià)值和臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年1月至2014年1月通城縣人民醫(yī)院收治的HFMD患兒246例，這些患兒均符合1995年第四屆全國手足口病修訂方案腦血管診斷標(biāo)準(zhǔn)，其中男126例，女120例，年齡0.3～6.0歲。246例HFMD患兒按CT或MRI影像學(xué)檢測結(jié)果是否有病理性變化分為重型(63例)和輕型(183例)兩組,所有HFMD患兒入院后馬上進(jìn)行對癥治療。另選擇體檢健康的66例健康兒童作為健康對照組，其中男39例，女27例，年齡0.5～6.0歲，志愿兒童均無心、肝、腎及免疫系統(tǒng)疾病。兩組性別、年齡、體質(zhì)量等一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 標(biāo)本采集方法 HFMD患兒入院后第1～7天共采集7次患兒標(biāo)本，每天上午清晨空腹采集患兒外周靜脈血3～5 mL，經(jīng)1 000 g離心15 min，分離血清(溶血標(biāo)本丟棄，重新取樣)裝于密封無污染的EP試管中，分離血清后2 h內(nèi)送檢。健康對照組標(biāo)本采集和檢測方式與患兒一致。

1.3 NSE、MBP和S100β的檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)進(jìn)行NSE、MBP和S100β測定。NSE和MBP試劑盒購自上海藍(lán)基(BlueGene)生物科技有限公司，S100β試劑盒購自美國Uscnlife Science&Technology公司USCNUFETM試劑。酶標(biāo)儀為美國產(chǎn)Multiskan Fc型酶標(biāo)儀。實(shí)驗(yàn)操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒使用說明書進(jìn)行，試劑在有效期內(nèi)使用，所有檢測項(xiàng)目保證室內(nèi)與室間質(zhì)控均在控。

2 結(jié) 果

2.1 重型HFMD患兒S100β、NSE和MBP檢測結(jié)果 見表1。HFMD患兒入院第1～7天共檢測7次重型HFMD患兒S100β、NSE和MBP，與健康對照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

表1 重型HFMD患兒S100β、NSE和MBP檢測結(jié)果

注：與健康對照組比較，#P<0.01。

2.2 輕型HFMD患兒S100β、NSE和MBP檢測結(jié)果 見表2。HFMD患兒入院第1～7天，共檢測7次輕型HFMD患兒S100β，與健康對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，NSE和MBP檢測結(jié)果與健康對照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 輕型HFMD患兒S100β、NSE和MBP檢測結(jié)果

注：與健康對照組比較，#P<0.01。

2.3 重型與輕型HFMD患兒S100β、NSE和MBP檢測結(jié)果 見表3。HFMD患兒入院第1～7天，共檢測7次重型HFMD患兒S100β、NSE和MBP，與輕型HFMD患兒相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

表3 重型與輕型HFMD患兒S100β、NSE和MBP檢測結(jié)果

注：與輕型HFMD患兒比較，#P<0.01。

3 討 論

HFMD根據(jù)發(fā)病經(jīng)過、病情特點(diǎn)和病變部位，分為重型和輕型HFMD，二者臨床表現(xiàn)差異不大。對于HFMD等影像學(xué)檢測可見的腦部損傷較好判斷，而對于影像學(xué)檢測不出的HFMD神經(jīng)損傷臨床較難判斷，HFMD神經(jīng)受損后的預(yù)后較差，因此監(jiān)測HFMD患兒的神經(jīng)受損情況非常重要[4-5]。

S100β是一類鈣離子結(jié)合蛋白，相對分子質(zhì)量較小，但具有廣泛生物學(xué)活性，主要存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和星形細(xì)胞中[6]。中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞損傷后，S100β蛋白首先從胞液進(jìn)入腦脊液，再經(jīng)被破壞的血-腦脊液屏障進(jìn)入血液[7-8]。S100β在正常情況下發(fā)揮重要的生理作用，但分泌過高具有神經(jīng)毒性。因此，S100β蛋白被認(rèn)為是中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷較特異和靈敏的標(biāo)志物，其含量的高低可反映患兒神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞損害的嚴(yán)重程度。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞外高濃度S100β可刺激炎癥因子表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。在影像學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)異常前，腦損傷患兒血清S100β已有明顯升高，S100β是早期評價(jià)亞臨床腦損傷的有效標(biāo)志物[9]。本研究結(jié)果顯示，重型和輕型HFMD患兒血清S100β含量均明顯高于健康對照者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，重型與輕型HFMD血清S100β含量差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。其結(jié)果說明S100β可以較敏感地反映HFMD患者神經(jīng)損傷的程度，可以檢測出無影像學(xué)變化的腦神經(jīng)損傷情況。S100β是HFMD患者腦神經(jīng)損傷的極敏感指標(biāo)，對腦出血患兒神經(jīng)損傷轉(zhuǎn)歸的判斷具有重要意義。

NSE是主要存在于神經(jīng)元細(xì)胞中的一種可溶性胞漿蛋白，主要參與糖酵解、催化磷酸烯醇化丙酮酸的生成。在顱腦外傷時(shí)由于神經(jīng)元細(xì)胞完整性破壞，使大量NSE從細(xì)胞內(nèi)釋放出來，透過破壞的血腦屏障進(jìn)入血液[10]。正常體液中NSE 含量甚微，但當(dāng)腦受到損傷時(shí)，神經(jīng)細(xì)胞因受損而變性、壞死崩解，該酶可大量進(jìn)入腦脊液和血液中。因此，血液中NSE含量的高低可反映中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損的程度，是反映神經(jīng)元細(xì)胞受損程度較好的生化指標(biāo)[10-11]。本研究結(jié)果顯示，重型HFMD患兒血清NSE含量明顯高于輕型HFMD患兒和健康對照者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，輕型HFMD患兒血清NSE只稍高于健康對照者，二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，由此說明血清NSE的檢測結(jié)果與影像學(xué)結(jié)果基本一致，可以比較準(zhǔn)確地反映HFMD患兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損的情況。

文獻(xiàn)[12]顯示NSE可能會(huì)發(fā)生局限性升高，升高24 h后即會(huì)下降。NSE沒有年齡的區(qū)別，但需要注意在溶血的情況下，NSE可以發(fā)生假陽性反應(yīng)[13]。有人用不同的S100β和NSE濃度為分界標(biāo)準(zhǔn)評估預(yù)后，將所得的真陽性率和假陽性率作圖所得的曲線比較，發(fā)現(xiàn)在相同的敏感度下S100β對預(yù)后的評估較NSE更特異，在相同的特異度下S100β對預(yù)后的評估也較NSE更敏感，由此說明S100β對預(yù)后的評估較NSE更敏感、更特異，這與本研究檢測結(jié)論一致。由于S100β具有熱穩(wěn)定性，不受溶血、低溫、肝素等因素影響，并可在室溫或4 ℃全血標(biāo)本中保存48 h而被認(rèn)為有較好的敏感性和特異性，故很多學(xué)者主張S100β和NSE二者結(jié)合更有利于腦損傷的臨床判斷。

MBP是中樞神經(jīng)系統(tǒng)少突細(xì)胞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)雪旺細(xì)胞合成的一種強(qiáng)堿性膜蛋白，分為中樞型(A1)和周圍型(P2)兩種類型，A1存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，由少突膠質(zhì)細(xì)胞合成和分泌，腦白質(zhì)含量最高，P2則由雪旺細(xì)胞合成和分泌，存在于周圍神經(jīng)髓鞘膜中[14]。MBP是神經(jīng)組織所特有的膜蛋白成分，對維持髓鞘結(jié)構(gòu)的完整和功能具有重要作用。當(dāng)髓鞘破壞時(shí)，MBP可釋放入腦脊液和血液，其含量變化是反映中樞神經(jīng)有無實(shí)質(zhì)性損害，尤其是髓鞘有無脫失的特異性標(biāo)志物，對判斷病情嚴(yán)重程度和預(yù)后有重要意義。與S100β比較，作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)生化標(biāo)志物MBP特異性更強(qiáng)，但敏感性較低[15]。與S100β主要用于疾病診斷和病情評估不同，MBP還用于臨床治療，標(biāo)志有MBP微基因的雪旺細(xì)胞不僅能在宿主脊髓內(nèi)存活，而且還有非?；钴S的功能，如分泌多種神經(jīng)營養(yǎng)因子維持受損神經(jīng)元的存活，為再生提供先決條件。本研究結(jié)果顯示，重型HFMD患兒血清MBP水平明顯高于輕型HFMD患兒和健康對照者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，而輕型HFMD患兒血清MBP只稍高于健康對照者，二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，由此說明血清MBP的檢測結(jié)果與影像學(xué)結(jié)果也基本一致。

綜上所述，重型與輕型HFMD患兒S100β、NSE和MBP存在不同的變化趨勢，S100β可用于診斷HFMD患兒早期神經(jīng)損傷，可以反映影像學(xué)無病例改變的腦神經(jīng)損傷，而NSE和MBP則可用于HFMD患兒神經(jīng)損傷的病情變化觀察，聯(lián)合檢測S100β、NSE和MBP可提高HFMD患兒神經(jīng)損傷的診斷率、明確療效和監(jiān)測預(yù)后。

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教育部第44批留學(xué)回國人員科研啟動(dòng)基金項(xiàng)目(2012-940)。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.03.032

A

1672-9455(2015)03-0368-02

2014-07-19

2014-10-15)

△通訊作者，E-mail:1572690432@qq.com。