姜波濤

(哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院感染科化驗(yàn)室，哈爾濱 150001)

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·臨床研究·

酶聯(lián)免疫反應(yīng)加速儀在麻疹病毒IgM抗體檢測(cè)中的應(yīng)用

姜波濤

(哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院感染科化驗(yàn)室，哈爾濱 150001)

目的 探討酶聯(lián)免疫反應(yīng)加速儀在麻疹病毒IgM抗體檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值。方法 選取2013年6～12月哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院兒科疑似麻疹病例血清238份，麻疹病毒IgM抗體陽(yáng)性血清1份，在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中分別采用常規(guī)溫育法(常規(guī)法)和酶聯(lián)免疫反應(yīng)加速儀法(加速法)進(jìn)行麻疹病毒IgM抗體的檢測(cè)，比較兩種方法在檢測(cè)麻疹病毒IgM抗體的重復(fù)性、靈敏度及特異性。結(jié)果 加速法的變異系數(shù)(CV)為2.86%～9.52%，靈敏度為97.40%，特異度為100.00%，均符合試劑盒標(biāo)準(zhǔn)；且加速法和常規(guī)法對(duì)麻疹病毒IgM的定量檢測(cè)結(jié)果呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論 酶聯(lián)免疫反應(yīng)加速儀在麻疹病毒IgM抗體檢測(cè)中，各項(xiàng)指標(biāo)均符合試劑盒要求，可應(yīng)用于臨床檢測(cè)。

酶聯(lián)免疫反應(yīng)； 酶聯(lián)免疫反應(yīng)加速儀； 麻疹病毒； IgM

麻疹是由麻疹病毒引起的一種以發(fā)熱、呼吸道其他癥狀和全身斑丘疹為特征的急性病毒性傳染病[1]。目前最常用于檢測(cè)麻疹病毒IgM抗體的方法是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，該方法成本低廉，操作簡(jiǎn)單，但整個(gè)檢測(cè)過(guò)程需耗時(shí)3 h。國(guó)內(nèi)已有報(bào)道，ELISA加速儀在檢測(cè)乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)中可以有效縮短檢測(cè)時(shí)間。本研究將ELISA加速儀用于檢測(cè)麻疹病毒IgM抗體，以探討其在麻疹病毒IgM抗體檢測(cè)中的作用。現(xiàn)將相關(guān)研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 2013年6～12月本院兒科疑似麻疹病例血清238份，麻疹病毒IgM抗體陽(yáng)性血清1份(由哈爾濱市疾病預(yù)防控制中心提供)。

1.2 儀器與試劑 ELISA加速儀(四川諾亞醫(yī)療科技有限責(zé)任公司研制，型號(hào)：NY/MMJ)、酶標(biāo)儀(奧地利安圖斯)、37 ℃電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)、全自動(dòng)立式洗板機(jī)(鄭州基波新科技有限公司)。所有試劑均購(gòu)自珠海海泰生物制藥有限公司。

1.3 方法

1.3.1 檢測(cè)方法 具體操作方法嚴(yán)格按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[2]及儀器與試劑盒使用說(shuō)明書進(jìn)行。使用常規(guī)溫育法(簡(jiǎn)稱常規(guī)法)，37 ℃恒溫箱第1步孵育60 min、第2步孵育60 min，顯色30 min；而使用ELISA加速儀(簡(jiǎn)稱加速法)，第1步孵育30 min、第2步孵育30 min，顯色15 min，其余步驟及操作完全一致。所有標(biāo)本均經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)。

1.3.2 重復(fù)性試驗(yàn) 將麻疹病毒IgM抗體陽(yáng)性血清倍比稀釋,使用同一批號(hào)麻疹病毒IgM抗體檢測(cè)試劑盒,分別用加速法和常規(guī)法對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)，每份樣本檢測(cè)20次。

1.3.3 相關(guān)性分析 在疑似麻疹病例的血清中隨機(jī)抽取56份標(biāo)本，分別用常規(guī)法和加速法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

2.1 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果 經(jīng)倍比稀釋的麻疹病毒IgM抗體陽(yáng)性血清分別采用加速法和常規(guī)法進(jìn)行檢測(cè)，定性結(jié)果相同；在各不同稀釋倍數(shù)下，兩種方法所測(cè)血清麻疹病毒IgM抗體的樣本/臨床值比值(S/CO值)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；兩種方法的變異系數(shù)(CV)均小于15%，符合試劑盒的規(guī)定。見(jiàn)表1。

表1 不同稀釋倍數(shù)麻疹病毒IgM抗體陽(yáng)性血清 兩種方法檢測(cè)結(jié)果

注：+表示陽(yáng)性，-表示陰性。

2.2 相關(guān)性分析結(jié)果 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，加速法和常規(guī)法對(duì)麻疹病毒IgM的檢測(cè)結(jié)果呈正相關(guān)(回歸方程為Y=1.016X-0.11，P<0.05)。見(jiàn)圖1。

圖1 兩種方法檢測(cè)麻疹病毒IgM相關(guān)性分析

2.3 靈敏度和特異度 經(jīng)參考法實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)，疑似麻疹患者的238份血清中，192份為陽(yáng)性，列為實(shí)驗(yàn)組；46份為陰性，列為對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均采用常規(guī)法和加速法檢測(cè)麻疹病毒IgM抗體，加速法和常規(guī)法的靈敏度分別為97.40%、96.35%，兩種方法的特異度均為100.00%，兩種方法的靈敏度與特異度比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩種方法的檢測(cè)靈敏度與特異度

注：+表示陽(yáng)性，-表示陰性。

3 討 論

麻疹是一種嚴(yán)重危害人類健康的傳染病,據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)告，每年約有4 400萬(wàn)麻疹患者,并有100萬(wàn)兒童死于麻疹。1954年Enders與Peebles應(yīng)用人胚腎細(xì)胞培養(yǎng)麻疹病毒獲得成功之后，多位學(xué)者開(kāi)始研制麻疹疫苗以控制麻疹的傳染[3]。我國(guó)于1965年開(kāi)始使用麻疹減毒活疫苗,可靠地保護(hù)了絕大多數(shù)9～12個(gè)月乃至年齡更大的兒童[4]。然而，由于麻疹疫苗的廣泛使用，接觸野毒株的機(jī)會(huì)少，體內(nèi)抗體水平逐年減少，最終可導(dǎo)致不能完全抵御麻疹病毒的侵襲，出現(xiàn)不典型的臨床表現(xiàn)[5]。于是有效的檢測(cè)方法對(duì)麻疹的診斷和及時(shí)的治療起著重要作用。

麻疹病毒檢測(cè)的最直接方法是病毒分離，然而其操作過(guò)于復(fù)雜，且對(duì)標(biāo)本有嚴(yán)格的要求，難以在醫(yī)院大面積地推廣。分子生物學(xué)手段檢測(cè)麻疹病毒核酸的方法也開(kāi)始運(yùn)用于實(shí)驗(yàn)室診斷，但是多數(shù)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)麻疹病毒RNA時(shí)有一定的概率出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性[6]，且成本較高。目前，臨床主要應(yīng)用ELISA檢測(cè)患者血清中麻疹特異性抗體IgM，該方法敏感性和特異性均較好，但患者血清IgM的陽(yáng)性率與取血時(shí)間有關(guān)[7]。一般患者在出現(xiàn)皮疹后3 d至4周內(nèi)取血，麻疹病毒特異性IgM抗體的陽(yáng)性率達(dá)最高。

ELISA加速儀是基于傳統(tǒng)的孵育方法設(shè)計(jì)出來(lái)的。它綜合采用了先進(jìn)的正溫度系數(shù)(PTC)熱敏陶瓷加熱熱風(fēng)恒溫技術(shù)，利用高頻電磁波對(duì)生物分子的生化作用補(bǔ)充能量，并將反應(yīng)試劑進(jìn)行內(nèi)置振蕩，從而穩(wěn)定地加速了反應(yīng)過(guò)程并減少了人工操作程序和時(shí)間。常規(guī)ELISA因簡(jiǎn)單、易于操作、且準(zhǔn)確度高而備受青睞，然而其耗時(shí)過(guò)長(zhǎng)。ELISA加速儀很好地克服了這一缺陷[8]，在不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的前提下將整個(gè)實(shí)驗(yàn)時(shí)間約縮短了一半，有效地提高了檢測(cè)效率。

本研究結(jié)果顯示，在重復(fù)性方面，兩種方法比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；相關(guān)分析結(jié)果顯示，兩種方法對(duì)麻疹病毒IgM的檢測(cè)結(jié)果呈正相關(guān)(P<0.05)；兩種方法均具有較高的靈敏度與特異度，加速法的靈敏度和特異度分別為97.40%、100.00%，常規(guī)法分別為96.35%和100.00%，兩種方法的靈敏度和特異度比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。表明采用加速法對(duì)麻疹病毒IgM進(jìn)行檢測(cè)不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果，同時(shí)可以減少檢測(cè)時(shí)間，提高檢測(cè)效率。

綜上所述，將ELISA加速儀運(yùn)用于麻疹病毒IgM的檢測(cè)不會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成影響，同時(shí)可以大幅度地縮短檢測(cè)時(shí)間，提高檢測(cè)效率，值得在臨床中推廣應(yīng)用。

[1]逯光文，高福，嚴(yán)景華．麻疹病毒受體與病毒侵入[J]．生物工程學(xué)報(bào)，2013，29(1)：1-9．

[2]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜．全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M]．3版．南京：東南大學(xué)出版社，2006：630-631．

[3]Centers for Disease Control and Prevention(CDC)．Global control and regional elimination of measles,2000-2011[J]．MMWR Morb Mortal Wkly Rep，2013，62(2)：27-31．

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[7]李軼平．麻疹病毒檢測(cè)技術(shù)進(jìn)展[J]．中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2011，21(6)：1587-1588．

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10.3969/j.issn.1672-9455.2015.05.044

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1672-9455(2015)05-0684-02

2014-09-16

2014-11-28)