劉艷秋 高美華 李紅林 解長(zhǎng)銀 章海飛 (青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室，青島 266071)

近年研究顯示，我國糖尿病患者已超過9 200萬，此外尚有約1.48 億屬于糖尿病前期，將有發(fā)展為糖尿病的趨勢(shì)［1，2］。糖尿病血管并發(fā)癥是糖尿病患者致死致殘的主要原因［3］。在眾多的黏附分子中，選擇素家族備受關(guān)注。選擇素在糖尿病各種血管事件如動(dòng)脈粥樣硬化、血栓形成、微血管損傷的病理生理過程中起著重要作用。本文對(duì)2 型糖尿病患者血清中sP 選擇素、sE-選擇素水平變化及相關(guān)因素進(jìn)行研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 研究對(duì)象收集2014 年1 月～2014年6 月在本院就診的患者，按照2003 年美國糖尿病協(xié)會(huì)(ADA)關(guān)于糖尿病(DM)、空腹血糖異常(IFG)、糖耐量異常(IGT)的診斷標(biāo)準(zhǔn)分為:①糖尿病前期(PDM)組32 例，男15 例，女17 例，30～77歲，平均(62.55±14.76)歲。包括空腹血糖異常(Impaired fasting glucose，IFG)，5.6 mmol/L≤空腹血糖(FPG)＜7.0 mmol/L，并且餐后2 h 血糖(P2hBG)＜7.8 mmol/L;或者糖耐量異常(Impaired glucose tolerance，IGT)，F(xiàn)PG ＜ 5.6 mmol/L，且7.8mmol/L≤2hPG ＜11.1 mmol/L。②2 型糖尿病組(T2DM 組)32 例，男17 例，女15 例，42～84 歲，平均(57.77± 9.95)歲。FPG ≥7.0 mmol/L 和(或)2hPG≥11.1 mmol/L。③糖尿病合并冠心病組:34 例，男性17 例，女性17 例，30 歲～84 歲平均年齡(61.33±15.06)歲。冠心病組 經(jīng)Judkins 法冠狀動(dòng)脈造影檢查確診為冠心病者，即至少有一支冠脈內(nèi)徑狹窄≥50%，其中根據(jù)冠狀動(dòng)脈造影結(jié)果，疾病史上均先有糖尿病，后出現(xiàn)冠心病的患者。④選取同期在本院體檢的健康者32 例為正常對(duì)照組(NC 組)，男15 例，女17 例，40～73 歲，平均(55.73±9.97)歲。排除各種急慢性感染、甲狀腺功能異常、肝腎功能疾病和心功能不全、腫瘤、風(fēng)濕等。

1.2 方法 采用Olympus(AU680)型自動(dòng)生化分析儀測(cè)定空腹血清TG、CHOL、HDL-C LDL-C、FPG、HbA1C 含量，采用(MAGLUMI2000)全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定空腹血清FINS 含量，血清sP-選擇素、sE-選擇素用酶聯(lián)法。試劑盒是由美國Rapidbio(RB)公司提供，操作按說明書。主要儀器包括:北京普朗公司的DNM-9602 型酶標(biāo)儀和天津通利信達(dá)儀器廠生產(chǎn)的DH3600A 型恒溫箱。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理。經(jīng)過正態(tài)性檢驗(yàn)，各組檢測(cè)結(jié)果均符合正態(tài)分布，以±s 表示;組間比較t 檢驗(yàn);各指標(biāo)間相關(guān)性采用Pearson 相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 各觀察組例數(shù)、性別比、年齡、DBP、CHO、LDL均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P ＞0.05)。糖尿病前期組HbA1C、FINS、HOMA-IR、sP-selectin、sE-selectin 高于正常對(duì)照(P ＜0.01～0.05);單純糖尿病組SBP、FBG、TG、HbA1c、FINS、HOMA-IR、sP-selectin、sE-selectin 顯著高于正常對(duì)照組(P ＜0.01);單純糖尿病組FBG、HbA1c、FINS、HOMA-IR 高于糖尿病前期組(P ＜0.01～0.05);單純糖尿病組HDL-C 顯著低于健康對(duì)照組和糖尿病前期組(P ＜0.01);糖尿病合并冠心病組BMI、SBP、FPG、TG、HbA1C、FINS、HOMA-IR、sP-selectin、sE-selectin 均高于正常對(duì)照組(P＜0.01～0.05);糖尿病合并冠心病組BMI、SBP、FBG、TG、HbA1C、FINS、HOMA-IR、sP-selectin、sE-selectin 高于糖尿病前期組(P ＜0.01～0.05);糖尿病合并冠心病組BMI、FBG、FINS、HOMA-IR、sP-selectin 高于單純糖尿病組(P ＜0.01～0.05);糖尿病合并冠心病組HDL-C 低于健康對(duì)照組和糖尿病前期組(P ＜0.01～0.05)。見表1、2。

表1 各組觀察指標(biāo)的比較(±s)Tab.1 Comparison with levels of each observation indexes (±s)

表1 各組觀察指標(biāo)的比較(±s)Tab.1 Comparison with levels of each observation indexes (±s)

Note:1)vs NC P ＜0.01，2)vs NC P ＜0.05，3)vs PDM P ＜0.01，4)vs PDM P ＜0.05，5)vs DM P ＜0.01.

表2 各組空腹胰島素、胰島素抵抗指數(shù)、sP-selectin、sE-selectin 水平的比較(±s)Tab.2 Comparison with each observation levels of FINS，HOMA-IR，sE-selectin and sP-selectin(±s)

表2 各組空腹胰島素、胰島素抵抗指數(shù)、sP-selectin、sE-selectin 水平的比較(±s)Tab.2 Comparison with each observation levels of FINS，HOMA-IR，sE-selectin and sP-selectin(±s)

Note:1)vs NC P ＜0.01，2)vs NC P ＜0.05，3)vs PDM P ＜0.01，4)vs PDM P ＜0.05，5)vs DM P ＜0.01.

表3 sP-selectin、sE-selectin 與臨床資料的相關(guān)性Tab.3 Correlation between sP-selectin，sE-selectin and clinical data

2.2 Pearson 相關(guān)性分析結(jié)果 血清sP-selectin 與FBG、FINS、TG、HbA1C、HOMA-IR 呈正相關(guān)(P 均＜0.01);血清sE-selectin 與FBG、FINS、TG、HbA1C、HOMA-IR 呈正相關(guān)(P 均值為＜0.01)，與HDL-C負(fù)相關(guān)(P 均 ＜0.05)，sP-selectin 和sE-selectin 與BMI、SBP、DBP、CHO、LDL-C 無相關(guān)性(P 均值為＞0.05)。見表3。

2.3 sP-selectin 與sE-selectin 相關(guān)性分析(r=0.592 3，P ＜0.001)，見圖1。

3 討論

糖尿病是以血循環(huán)中葡萄糖水平持續(xù)升高為基本特征的臨床代謝綜合征，其主要特征為胰島素抵抗和(或)胰島素分泌不足。胰島素抵抗作為代謝綜合征的核心環(huán)節(jié)，可進(jìn)一步誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生葡萄糖調(diào)節(jié)受損、高血壓、血脂紊亂等癥狀［4］。

近幾年來研究發(fā)現(xiàn)，2 型糖尿病微血管及大血管并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展過程中慢性炎癥起重要作用，炎癥論被提了出來［5］。免疫調(diào)節(jié)因子在糖尿病尤其是糖尿病并發(fā)癥發(fā)病機(jī)制中所起的作用正逐漸為人們所關(guān)注［6］。研究發(fā)現(xiàn)，黏附分子家族的Ca2+依賴外源凝集素一族P-選擇素和E-選擇素在感染、創(chuàng)傷、缺血再灌注等病理生理過程中，特別是在炎癥早期發(fā)展過程中起重要作用［7］。

圖1 sP-selectin 與sE-selectin 之間的相關(guān)性Fig.1 Correlation between sP-selectin and sE-selectin

P-選擇素即CD62P，是一種高糖基化的糖蛋白，又被稱為跨膜單鏈糖蛋白，與E-選擇素及L-選擇素同屬于選擇素家族的成員。P-選擇素是相對(duì)分子質(zhì)量約140 KU 的跨膜蛋白，是凝血酶活化的血小板和血管內(nèi)皮細(xì)胞上的白細(xì)胞黏附受體。它包含1 個(gè)氨基末端的碳水化合物識(shí)別域、表皮生長(zhǎng)因子、9 個(gè)重復(fù)區(qū)域、1 個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域和胞質(zhì)尾區(qū)。P-選擇素有兩種，即單體可溶性P-選擇素(TPS)和膜P-選擇素(MPS)［8］。近年來，隨著分子生物學(xué)發(fā)展，對(duì)P-選擇素的結(jié)構(gòu)、功能、調(diào)控及病理生理作用進(jìn)行了較為深入的研究。查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)［9］，P-選擇素的表達(dá)受體內(nèi)外許多調(diào)節(jié)因子的影響，靜息時(shí)，內(nèi)皮細(xì)胞上的P-選擇素含量甚微，當(dāng)受到炎性反應(yīng)因子刺激后，P-選擇素的表達(dá)顯著增加。Gokularishnam 等［10］研究發(fā)現(xiàn)，胰島素抵抗的患者胰島素水平增高，同時(shí)伴隨血漿P-選擇素水平增高;孫曉軍等研究發(fā)現(xiàn)［11］，檢測(cè)可溶性P-選擇素，可作為2 型DM 病情判定以及治療效果觀察。Yngen 等［12］也進(jìn)行了相關(guān)研究，他認(rèn)為胰島素抵抗可以促進(jìn)P-選擇素高表達(dá)，同時(shí)P-選擇素高表達(dá)也加重了胰島素抵抗，促進(jìn)血小板活化;高血糖對(duì)脂肪代謝具有調(diào)節(jié)作用，血糖升高時(shí)常伴有高膽固醇血癥及高三酰甘油血癥，研究證實(shí)高膽固醇血癥可引起血漿P-選擇素水平升高，并且與LDL 具有相關(guān)性［13］。有研究證實(shí)P-選擇素在急性心肌梗死疾病的發(fā)生發(fā)展過程中擔(dān)負(fù)著重要角色［14］。冠心病發(fā)生涉及血管內(nèi)皮功能、血小板、凝血、纖溶因子等一系列生物分子的參與。冠心病患者P-選擇素水平明顯升高，和冠狀動(dòng)脈病變程度相關(guān)，可預(yù)測(cè)冠心病嚴(yán)重性［15］。糖尿病已被大量流行病學(xué)調(diào)查和臨床研究證實(shí)是心血管病變的危險(xiǎn)因素。近年來隨著血栓形成和血小板聚集學(xué)說的深入研究，給冠心病的病因研究及早期預(yù)防和治療帶來了革命性的影響。P-選擇素作為上述學(xué)說的重要標(biāo)志物和介導(dǎo)物［16，17］。本研究結(jié)果顯示sP-選擇素與FPG、FINS、HBA1C 呈高度正相關(guān)，提示血清sP-選擇素隨著血糖和胰島素的水平升高而升高。糖尿病并發(fā)冠心病組患者血清sP-選擇素水平明顯高于糖尿病前期和單純糖尿病組患者;血清sP-選擇素水平與HOMA-IR 呈高度正相關(guān)，提示血清sP-選擇素水平與胰島素抵抗密切相關(guān)，血清sP-選擇素水平的增高是2 型糖尿病及其并發(fā)冠心病發(fā)生發(fā)展的高危因素之一。

E-選擇素屬于人類白細(xì)胞分化抗原CD62E，為細(xì)胞因子激活血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的110 kD 跨膜糖蛋白，其相對(duì)分子量為115 000，由一系列蛋白區(qū)域片段構(gòu)成，其結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性決定了功能的瞬時(shí)性和特異性。E-選擇素(LECAM-2、ELAM-1)有一個(gè)末端唾液酸殘基和至少一個(gè)巖藻糖殘基。對(duì)E 選擇素糖識(shí)別的結(jié)構(gòu)調(diào)查顯示，有許多小分子和大分子的多糖結(jié)合到E 選擇素上，如唾液酸Lewisx 四糖域(α2-3)、半乳糖(β1-4)、葡萄糖。此外，對(duì)E 選擇素的生化結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察，確認(rèn)E 選擇素含有的唾液酸化Lewisa 抗原表位的寡糖，是外源凝集素識(shí)別的最小低聚糖［18］。E-selectin 是黏附分子成員。黏附分子是一類調(diào)節(jié)細(xì)胞與細(xì)胞間、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)相互識(shí)別、相互黏著及信號(hào)傳遞，起黏附作用的糖蛋白分子。在細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育、免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)、組織修復(fù)和腫瘤轉(zhuǎn)移等生理、病理過程中起重要作用。血管內(nèi)皮細(xì)胞、白細(xì)胞及其他多種細(xì)胞可表達(dá)黏附分子，細(xì)胞表面的黏附分子脫落后進(jìn)入血液，成為可溶性黏附分子，二者成平行關(guān)系。有研究顯示，Eselectin 與心腦血管事件的發(fā)生相關(guān)［19］，許多研究證明，2 型糖尿病患者，甚至糖耐量降低，其血清各種黏附分子水平包括sE-selectin 顯著高于正常人群。Matsumoto 等［20］的研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病合并大血管、微血管病變組血清sE-selectin 水平均明顯高于無血管病變組。sE-選擇濃度可以是一種生物標(biāo)記，用于指示隨后的發(fā)展代謝性疾病，尤其是心血管疾?。?1］。E-選擇素及可溶性E 選擇素在全身性炎癥反應(yīng)狀態(tài)下水平升高［22］，本研究結(jié)果顯示sE-選擇素與FPG、FINS、HBA1C 呈正相關(guān)，糖尿病并發(fā)冠心病組患者血清sE-選擇素水平高于糖尿病前期組，血清sE-選擇素水平與HOMA-IR 呈正相關(guān)，提示血清sE-選擇素參與胰島素抵抗，血清sE-選擇素水平的增高也是2 型糖尿病及其并發(fā)冠心病發(fā)生發(fā)展的高危因素之一。

綜上所述，sP-selectin、sE-selectin 與糖尿病的發(fā)生有關(guān)，同時(shí)在糖尿病的發(fā)生與發(fā)展中起重要作用。這二者高度相關(guān)(r=0.5923，P ＜0.001)，sP-selectin和sE-selectin 作為血小板、內(nèi)皮細(xì)胞活化的標(biāo)志物，在糖尿病前期階段就已經(jīng)明顯升高，并隨著糖代謝紊亂程度的加重而逐漸升高。因此，有效監(jiān)測(cè)sPselectin 和sE-selectin 對(duì)早期血管病變的診斷，對(duì)預(yù)防大血管并發(fā)癥的發(fā)生具有重要意義。

［1］Wild S，Roglic G，Green A，et al.Global prevalence of diabetes:estimates for the year 2000 and projections for 2030［J］.Diabetes Care，2004，27(10):1047-1053.

［2］Wenying Yang，Juming Lu，Jiangping Weng，et al.Prevalence of diabetes among men and women in China［J］.N Engl J Med，2010，362(12):1090-1101.

［3］郭立新，潘 琦，初明峰，等.高同型半胱氨酸血癥與糖尿病患者頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度關(guān)系及強(qiáng)化控制的影響［J］.中華內(nèi)分泌代謝雜志，2006，22(1):19-22.

［4］Nasreddine L，Naja F.Tabet M，et al.Obesity is associated with insulin resistance and components of the metabolic syndrome in Lebanese adolescents［J］.Ann Human Biol，2012，39(2):122-128.

［5］朱麒錢，尤巧英，李成江，等.c 反應(yīng)蛋白與2 型糖尿病人血管病變危險(xiǎn)岡素的相關(guān)性研究［J］.中華內(nèi)分泌代謝雜志，2005，21(5):320-332.

［6］王勇軍，黃 干.2 型糖尿病腎病患者血清白細(xì)胞介素-1 受體拮抗劑、白細(xì)胞介素-1β 和超敏C 反應(yīng)蛋白的檢測(cè)研究［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2008，18(7):972-974.

［7］何劍戈，任愛紅，施懿誠，等.肝缺血再灌注損傷的機(jī)制及其預(yù)防［J］.河南科技大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2012，30(3):235-237.

［8］Xiao B，Tong C，Jia X，et al.Tyrosine replacement of PSGL-1 reduces association kinetics with P-and L-selectin on the cell membrane［J］.Biophys J，2012，103(4):777-785.

［9］Camalho AC，Sousa RB，F(xiàn)ranco AX，et al.Protective effects of fucoidan，a P-and L-selectin inhibitor，in murine acute pancreatitis［J］.Pancreas，2014，43(1):82-87.

［10］Gokulakrishnan K，Dcclaa R，Mohan V，et a1.Soluble P-selectin and CD40L levels in subjects with prediabetes，diabetes mellitus，and metabolic syndrome-the Chennai Urban Rural Epidemiology Study［J］.Metabolism，2006，55(2):237-242.

［11］孫曉軍，楊文東，馬慶海.2 型糖尿病患者可溶性P-選擇素與超敏c 反應(yīng)蛋白的相關(guān)性研究［J］.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，32(1):116-117.

［12］Yngen M，Li N，Hjemdahl P，et al.Insulin enhances platelet activation in vitro［J］.Thromb Res，2001，104(2):85-91.

［13］Staprans I Rapp H，Pan X，et al.Oxidized lipid in the diet are asource of oxidized in dylamicrons of human serum［J］.Arther Ioscler Thromh，2009，24(63):1900-1905.

［14］馬守國.冠脈介入干預(yù)前后急性心肌梗死患者M(jìn)MP-9、IL-6、P-選擇素動(dòng)態(tài)變化的臨床意義［J］.中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2014，18(9):1457-1460.

［15］羅 立，黃 怡，楊 禮，等.P-選擇素與冠心病患者冠脈病變程度相關(guān)性研究［J］.醫(yī)學(xué)臨床研究，2014，31(6):1152-1153.

［16］Blankenberg S，Barbaux S，Tiret L.Adhesion molecules and atherosclerosis［J］.Atherosclerosis，2009，170:191-203.

［17］杜林林，王朝暉.P 選擇素在急性冠狀動(dòng)脈綜合征中的研究進(jìn)展［J］.臨床心血管病雜志，2008，19(7):442-444.

［18］Jubeli E，Moine L，Vergnaud-Gauduchon J，et al.E-selectin as a target for drug delivery and molecular imaging［J］.J Control Release，2012，158(2):194-206.

［19］Huang Z，Yin Q，Sun W，et al.Microbleeds in ischemic stroke are associated with lower serum adiponectin and higher soluble E-selectin levels［J］.J Neurol Sci，2013，334(1):83-87.

［20］Matsumoto K，Sera Y，Ueki Y，et al.Comparison of selMm concentration of soluble adhesion molecules in diabetic microangiopathy and macroangiopathy［J］.Diabet Med，2002，19 (10):822-826.

［21］Mochizuki K，Inoue S，Miyauchi R，et al.Plasma sE-selectin level is positively correlated with neutrophil count and diastolic blood pressure in Japanese men［J］.J Nutr Sci Vitaminol，2013，59(5):447-53.

［22］De Pablo R，Monserrat J，Reyes E，et al.Circulating sICAM-1 and sE-Selectin as biomarker of infection and prognosis in patients with systemic inflammatory response syndrome［J］.Eur J Intern Med，2013，24 (2):132-138.