陽(yáng)愛國(guó) ，周 煜，董國(guó)棟，鄧永強(qiáng)，田慧云，郭 莉，馬 坤，侯 巍，吳云飛，陳 冬，文 豪，吳 宣，朱銀寶

（1.四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都610041 ；2.湖北省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，湖北 武漢430000 ；3.云南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南 昆明650051 ；4.四川省廣漢市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 德陽(yáng)618000 ；5.南京路寶生物科技有限公司，江蘇 南京 210000）

血吸蟲病是嚴(yán)重危害人類和家畜健康的人畜共患寄生蟲病。為了解決適用于基層的快速診斷方法，本研究應(yīng)用乳膠微球免疫層析法研制的牛羊血吸蟲病抗體檢測(cè)試紙條在四川、湖北和云南省部分疫區(qū)縣、市進(jìn)行推廣應(yīng)用，共計(jì)檢測(cè)116 萬(wàn)份血紙樣品，并與傳統(tǒng)方法進(jìn)行符合率和檢測(cè)效率對(duì)比試驗(yàn)，取得了顯著地試驗(yàn)效果和社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益。試驗(yàn)結(jié)果表明，試紙條法適用于基層牛羊血吸蟲病的檢測(cè)、普查及檢疫，具有廣闊的市場(chǎng)應(yīng)用前景。

1 材料與方法

1.1 材料 牛血吸蟲病抗體檢測(cè)試紙條由南京路寶生物科技有限公司提供；待檢血紙來(lái)自四川、湖北和云南疫區(qū)縣（市）2012 年至2014 年采集的血紙樣品116 萬(wàn)頭份。

1.2 方法

1.2.1 試紙條操作步驟 將試紙條從冰箱取出置室溫平衡1 h；將各血紙進(jìn)行編號(hào)，裁剪血紙圓片0.24 cm2放在0.4 mL 血紙浸泡液中，室溫浸泡30 min；取試紙條，將帶箭頭端的試紙條插入已搖勻的血紙浸出液中，待液體在NC膜上滲出0.5 cm 左右時(shí)，將試紙條平放在桌面上，5～30 min 內(nèi)觀察結(jié)果；若T、C線均出現(xiàn)紅色帶，判為陽(yáng)性；僅C線出現(xiàn)紅色帶，則判為陰性；T、C線均不出現(xiàn)紅色帶，判為無(wú)效。

1.2.2 對(duì)照檢測(cè)方法操作步驟 糞孵毛蚴法參照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[1]操作，Dot-ELISA法參照試劑盒使用說(shuō)明書操作。

1.2.3 符合率試驗(yàn) 對(duì)試紙條檢測(cè)血吸蟲病呈陽(yáng)性的牛，再采集糞便用糞孵法進(jìn)行病原檢查，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果計(jì)算兩種方法的陽(yáng)性符合率。

1.2.4 檢測(cè)效率比較 分別統(tǒng)計(jì)試紙條、Dot-ELISA法和糞孵法3 種方法每人每天的樣品檢測(cè)數(shù)，比較3 種方法的檢測(cè)效率高低。

2 結(jié)果

2.1 試紙條的應(yīng)用結(jié)果 在2012 年至2014 年之間，用試紙條對(duì)四川、湖北及云南省相關(guān)血吸蟲病流行區(qū)普查、監(jiān)測(cè)或檢疫血紙樣品總計(jì)116 萬(wàn)份，其中四川28 萬(wàn)份、湖北71 萬(wàn)份、云南17 萬(wàn)份；檢出血吸蟲抗體陽(yáng)性牛血樣分別為268 份、217 份和100 份，陽(yáng)性率分別為0.0957%、0.0306%和0.0588%（見表1）。

表1 四川、湖北和云南血吸蟲抗體陽(yáng)性分布情況

2.2 試紙條法與糞孵法的符合率 試紙條測(cè)出四川、湖北和云南陽(yáng)性血紙數(shù)分別為268 份、217份和100 份，用糞孵法檢測(cè)呈陽(yáng)性血吸蟲毛蚴的樣品數(shù)分別是265 頭、214 頭和98 頭，其試紙條與糞孵法的陽(yáng)性符合率分別為98.88%、98.62%和98.0%（見表2）。

表2 試紙條與糞孵法血吸蟲病陽(yáng)性符合率比較

2.3 效率性比較 不同方法的效率性比較結(jié)果顯示，試紙條每人每天可檢測(cè)900份牛血紙樣品，而Dot-ELISA法每人每天只能檢測(cè)90 份牛血清，糞孵毛蚴法檢測(cè)20 份牛糞便；試紙條比Dot-ELISA提高效率10 倍，比糞孵毛蚴法提高效率45 倍（見表3）。

表3 試紙條與Dot-ELISA、糞孵毛蚴法效率比較

3 討論

我國(guó)血吸蟲病主要流行于長(zhǎng)江流域及其以南的部分區(qū)域[2]，在最易滋生釘螺的湖沼、山區(qū)、丘陵地帶流行，經(jīng)濟(jì)條件落后地區(qū)尤其嚴(yán)重。為了控制血吸蟲病的流行，使流行地區(qū)逐步達(dá)到血吸蟲病傳播阻斷和控制標(biāo)準(zhǔn)，我國(guó)投入了大量的人力、物力、財(cái)力，并取得了初步成效。本試驗(yàn)選擇四川、湖北和云南疫區(qū)縣市進(jìn)行試紙條的推廣應(yīng)用，各具有地區(qū)代表性，能很好的驗(yàn)證該方法的適用性。試紙條在3 個(gè)省份的大面積應(yīng)用、普查，從近3 年血吸蟲陽(yáng)性率看出3 個(gè)省份疫區(qū)縣市均達(dá)到國(guó)家血吸蟲病傳播阻斷標(biāo)準(zhǔn)，有效地阻斷了血吸蟲病的傳播。

糞孵毛蚴法[3]是目前基層常用的血吸蟲病確診法，試紙條與糞孵法在四川、湖北和云南3 個(gè)省份的血吸蟲病陽(yáng)性符合率分別達(dá)到了98.88%、98.62%和98.0%，說(shuō)明試紙條檢測(cè)方法具有很高的準(zhǔn)確性。效率性試驗(yàn)表明，試紙條很高的效率，且操作簡(jiǎn)單，結(jié)果直觀，非常適合疫區(qū)縣市牛、羊的大面積的普查，確保血吸蟲病查治的全面性和徹底性；另外Dot-ELISA法[4]以血清為檢測(cè)樣品，在采樣、保存和運(yùn)輸比較困難，糞孵法耗時(shí)、人為誤差大，不利于快速準(zhǔn)確判斷，而試紙條以血紙為樣品，采集和保存都方便，無(wú)需特定實(shí)驗(yàn)環(huán)境就能進(jìn)行快速準(zhǔn)確診斷。由于試紙條的高效性和準(zhǔn)確性，在血吸蟲病防治中可進(jìn)行先查后治，比普治法既節(jié)約了大批醫(yī)藥費(fèi)的開支，又節(jié)省了大量的勞動(dòng)力的支出，大大降低了防治成本和疫病帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)損失，及時(shí)阻斷血吸蟲病的流行，加快了消滅血吸蟲的步伐，促進(jìn)和保障畜牧業(yè)健康、穩(wěn)定、可持續(xù)發(fā)展，確保了公共衛(wèi)生的安全和社會(huì)的穩(wěn)定。

試紙條具有準(zhǔn)確性高、穩(wěn)定性好、效率高、經(jīng)濟(jì)實(shí)用及顯著的社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益，解決了基層家畜血吸蟲病防治工作的檢測(cè)手段需求，試紙條的推廣應(yīng)用及時(shí)掌握了牛羊血吸蟲病的流行情況，為有效制訂血吸蟲病的綜合防制措施提供了科學(xué)依據(jù)。

[1]農(nóng)業(yè)部血吸蟲病防治辦公室.動(dòng)物血吸蟲病防治手冊(cè)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科技出版社，1998：83-87.

[2]張雪娟，盧福莊，劉恩勇，等.斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾法診斷家畜血吸蟲病的敏感性和特異性[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2006，18（6）：453-457.

[3]林矯矯，胡述光，劉金明.中國(guó)家畜血吸蟲病防治[J].中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)，2011，19（3）：75-81.

[4]陳年高，林丹丹，謝曙英，等.日本血吸蟲病間接血凝試驗(yàn)診斷試劑盒臨床診斷效能[J].中國(guó)血吸蟲病防治雜志，2011，23（4）：377-380.