陳鵬輝 楊冰 季然 謝暢 張?jiān)?林彩霞 陳幼楠

·論著·

振腹對(duì)2型糖尿病大鼠血清游離脂肪酸和甘油三酯的影響

陳鵬輝 楊冰 季然 謝暢 張?jiān)?林彩霞 陳幼楠

目的 研究振腹對(duì)2型糖尿病大鼠血清游離脂肪酸及甘油三酯的影響。方法 用高糖高脂聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,最終模型組11只、低頻治療組9只、高頻治療組10只,設(shè)立12只正常大鼠為對(duì)照組,予振腹治療6周,于治療前后監(jiān)測(cè)大鼠空腹血糖、游離脂肪酸、甘油三酯的水平。多組間差異比較采用單因素方差分析。結(jié)果 治療前,與對(duì)照組對(duì)比,其余各組大鼠空腹血糖、游離脂肪酸、甘油三酯的水平均升高(P＜0.05)。治療后,與模型組對(duì)比,低頻治療組和高頻治療組大鼠空腹血糖、游離脂肪酸、甘油三酯的水平均降低(P＜0.05);低頻治療組和高頻治療組相比較,大鼠空腹血糖、游離脂肪酸、甘油三酯的水平無(wú)明顯差異(P＞0.05)。結(jié)論

振腹能降低2型糖尿病大鼠空腹血糖、游離脂肪酸、甘油三酯的水平,其機(jī)制可能為:(1)振腹通過(guò)調(diào)節(jié)腎上腺的分泌功能影響脂代謝;(2)增強(qiáng)腹部肌肉和胃腸道平滑肌運(yùn)動(dòng),增加了組織對(duì)脂肪的氧化作用;(3)減少腹部及內(nèi)臟脂肪異位堆積,提高腹部及內(nèi)臟組織細(xì)胞胰島素受體的敏感性。

振腹; 2型糖尿病; 游離脂肪酸; 甘油三酯; 腎上腺

在臨床上,2型糖尿病(type 2 diabetes mellites,T2DM)患者多數(shù)伴有一系列脂代謝的異常,血循環(huán)中游離脂肪酸(free fatty acid,FFA)和甘油三酯(triglyceride,TG)水平升高為主要表現(xiàn)之一[1]。FFA及 TG升高與胰島素抵抗(insulin resistance,IR)以及細(xì)胞損害密切相關(guān),參與了糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生與進(jìn)展。因此,降低循環(huán)中的FFA和TG水平對(duì)于糖尿病患者的治療有著重大的益處。目前臨床運(yùn)用振腹療法輔助治療糖尿病取得了較好的療效。振腹療法是由北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院的臧?？平淌谠?0世紀(jì)80年代創(chuàng)立的一套以調(diào)理臟腑病為主的推拿手法,整套操作過(guò)程以振腹操作為核心,臨床操作的振動(dòng)頻率多控制在400～600次/分[2],但其機(jī)制仍處于探索階段。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究不同頻率的振腹對(duì)T2DM大鼠空腹血清FFA及TG的水平的影響,旨在探討振腹療法發(fā)揮療效的途徑。

1 材料與方法

1.1 材料

60只健康清潔級(jí)雄性SD大鼠,8周齡,體質(zhì)量(290±10)g,由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供。飼養(yǎng)室溫恒定20～25℃,相對(duì)濕度40% ～60%,12小時(shí)光照周期。

高糖高脂飼料[3](66%基礎(chǔ)飼料、15%豬油、10%白糖、6%酪蛋白、3%蛋黃粉),由北京科澳協(xié)力飼料有限公司提供;鏈脲佐菌素(streptozotocin, STZ)購(gòu)于美國(guó) Sigma公司;游離脂肪酸試劑盒(ACS-ACOD法)購(gòu)于北京九強(qiáng)生物技術(shù)股份有限公司;甘油三酯試劑盒(GPO-PAP法)、葡萄糖氧化酶法(GOP-POD法)血糖測(cè)定試劑盒購(gòu)于北京柏定生物工程有限公司;羅氏羅康全活力型血糖試紙購(gòu)于北京健力園醫(yī)療器械有限公司;東芝FR120全自動(dòng)生化分析儀;日本東芝TBA-40FR全自動(dòng)生化分析儀;羅氏全活力型血糖儀。

1.2 T2DM動(dòng)物模型建立和分組處理

大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后定為實(shí)驗(yàn)第1周。所有大鼠隨機(jī)分為兩組,12只正常大鼠基礎(chǔ)飼料飼養(yǎng),48只T2DM造模大鼠給予高糖高脂飼料。飼養(yǎng)6周后(第6周),所有大鼠禁食12個(gè)小時(shí),造模大鼠一次性快速腹腔注射2%STZ溶液30 mg/(kg·bw),正常大鼠腹腔注射等同劑量的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液[4]。造模大鼠繼續(xù)高糖高脂飼養(yǎng)2周,以空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)≥16.7 mmol/L,且穩(wěn)定7天作為模型成功標(biāo)準(zhǔn)對(duì)造模大鼠進(jìn)行篩選。最終符合成模標(biāo)準(zhǔn)大鼠35只,將大鼠隨機(jī)分為三組,分別為模型組12只、低頻治療組11只、高頻治療組12只;正常大鼠12只為對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)干預(yù)階段,模型組死亡1只,低頻治療組大鼠死亡2只,高頻治療組大鼠死亡2只。

1.3 干預(yù)方案

實(shí)驗(yàn)從第9周開始治療,到第14周治療結(jié)束。對(duì)照組:基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng),自制鼠袋固定且不振腹,每次15分鐘,隔日1次,連續(xù)6周。模型組:高糖高脂飼料喂養(yǎng),其他操作均同對(duì)照組。低頻治療組:高糖高脂飼料喂養(yǎng),自制鼠袋固定,以機(jī)械振動(dòng)器振腹,振動(dòng)器上下振動(dòng)幅度2 mm,頻率300次/分,作用部位參照臨床振腹法采用的區(qū)域,覆蓋神闕、關(guān)元、下脘、滑肉門、大橫穴(穴位定位參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》),每次15分鐘,隔日1次,連續(xù)6周。高頻治療組:振動(dòng)頻率為600次/分,其余操作均同低頻治療組。

1.4 指標(biāo)測(cè)定及標(biāo)本采集

每周觀察各組大鼠的一般情況、日?；顒?dòng)、攝食飲水、排泄量、體重等。FBG:每周治療結(jié)束時(shí),禁食10小時(shí),于大鼠尾靜脈快速點(diǎn)刺取血,用羅氏血糖儀檢測(cè),具體測(cè)試嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書進(jìn)行。血清FFA、TG測(cè)定:第8周結(jié)束時(shí)和第14周治療結(jié)束時(shí),禁食10小時(shí),乙醚麻醉后眶后取血,具體測(cè)試嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行處理,結(jié)果均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,各組間差異均采用單因素方差分析(One-Way ANOVA),組間兩兩比較采用LSD方法,以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠一般情況

治療前與對(duì)照組相比,模型組、低頻治療組、高頻治療組大鼠毛質(zhì)粗糙,精神萎靡,行動(dòng)遲緩,飲水量及尿量明顯增多;治療后,模型組癥狀無(wú)明顯改變,而低、高頻治療組糖尿病癥狀較治療前有所緩解,表現(xiàn)為大鼠活動(dòng)增多,飲水量及尿量有所減少,但兩組毛質(zhì)依舊粗糙。治療前各組大鼠體重?zé)o明顯差異(P＞0.05)。治療后,與對(duì)照組比較,模型組、低頻治療組、高頻治療組的大鼠體重明顯較低(P＜0.05);模型組、低頻治療組、高頻治療組相互比較,各組體重?zé)o明顯差異(P＞0.05),但低、高頻治療組大鼠的體重略大于模型組的體重,見表1。

2.2 振腹對(duì)T2DM大鼠FBG的影響

治療前,與對(duì)照組比較,模型組、低頻治療組、高頻治療組大鼠FBG明顯較高,表現(xiàn)出高血糖癥狀,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);低頻治療組、高頻治療組與模型組比較,各組大鼠的FBG無(wú)明顯差異(P＞0.05),大鼠FBG基本處于同一基線水平,說(shuō)明三組來(lái)自同一大樣本,樣本具備可比性。治療6周后,與對(duì)照組比較,模型組、低頻治療組、高頻治療組大鼠FBG明顯較高(P＜0.05);與模型組比較,低頻治療組、高頻治療組 FBG水平明顯較低(P＜0.05);低頻治療組與高頻治療組比較,大鼠FBG差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),見表2。

2.3 振腹對(duì)T2DM大鼠血清FFA和TG水平的影響

治療前,與對(duì)照組比較,模型組、低頻治療組、高頻治療組的FFA和TG均高于對(duì)照組(P＜0.05),三組T2DM大鼠均出現(xiàn)高FFA,高TG的癥狀;與模型組相比,低頻治療組、高頻治療組大鼠的FFA和TG水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),說(shuō)明大鼠FFA和TG處于同一基線水平,三組來(lái)自同一大樣本,樣本具備可比性。治療6周后,與對(duì)照組比較,模型組、低頻治療組、高頻治療組大鼠FFA和TG明顯較高(P＜0.05);與模型組比較,低頻治療組、高頻治療組的FFA和TG指標(biāo)水平較低(P＜0.05);低頻治療組與高頻治療組相比較,指標(biāo)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),見表3。

3 討論

本課題采用高糖高脂飼料聯(lián)合小劑量STZ腹腔注射建立T2DM模型,結(jié)果顯示,T2DM大鼠除表現(xiàn)有明顯的血糖升高,還觀察到該模型大鼠的FFA和TG增高的脂代謝異常的現(xiàn)象。該結(jié)果與周迎生等[5-6]報(bào)道的文獻(xiàn)結(jié)果相似,T2DM大鼠具有高血糖、高血脂的特征,此模型符合人類T2MD的特點(diǎn),為課題組研究振腹對(duì)T2MD糖脂代謝的影響奠定了良好的基礎(chǔ)。

糖尿病屬中醫(yī)學(xué)“消渴病”范疇,其基本病機(jī)為三焦氣機(jī)郁久化熱,燥熱耗傷陰津,形成了“燥熱”“陰虛”[7],隨著病情的發(fā)展,由陰虛而致氣陰兩虛。振腹療法是以小幅度、高頻率振顫通過(guò)手掌或指端持續(xù)作用于腹部和神闕、天樞等特定穴位的操作[2],其治則主要體現(xiàn)在培元?dú)?、調(diào)運(yùn)化、暢氣機(jī),調(diào)整元?dú)獾奶搶?shí)盛衰并暢通其運(yùn)行通路,促進(jìn)元?dú)饨?jīng)由三焦布達(dá)周身,使五臟氣機(jī)通暢,升降出入有序[8],間接改善膏脂輸布障礙,從而調(diào)節(jié)血脂代謝異常。

T2DM患者的脂代謝異常與胰島素抵抗、腹型肥胖等代謝綜合因素有關(guān)。TG的產(chǎn)生過(guò)多和清除缺陷是導(dǎo)致患者血脂異常的主要原因之一[9]。TG是FFA在組織內(nèi)的儲(chǔ)存形式,FFA是TG的水解產(chǎn)物,兩者異常是導(dǎo)致IR的重要原因[10]。一方面,異常增多的FFA具有“脂毒性”作用,升高的FFA轉(zhuǎn)流入肌肉和肝臟等非脂肪組織,造成TG的異位沉積,沉積導(dǎo)致組織IR和胰島細(xì)胞功能損傷[11]。另一方面,FFA可以干擾葡萄糖代謝的不同環(huán)節(jié),特別是在胰島素受體及受體后的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方面發(fā)揮作用,降低胰島素刺激的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)[12]。內(nèi)臟脂肪的異常增多是肥胖患者脂代謝紊亂和胰島素抵抗的病理生理基礎(chǔ)[13]。內(nèi)臟脂肪中β腎上腺素能受體表達(dá)水平及親和力高于皮下脂肪,這使得內(nèi)臟脂肪更易于分解,成為循環(huán)中FFA和TG的主要來(lái)源[14]。臧?？芠15]認(rèn)為振腹療法的振動(dòng)信息刺激了腹大神經(jīng),影響腎上腺使其產(chǎn)生應(yīng)激,血中腎上腺皮質(zhì)激素分泌增加,刺激腦垂體和松果體,從而使內(nèi)分泌的眾多環(huán)節(jié)均得到調(diào)節(jié),振腹通過(guò)調(diào)整內(nèi)分秘的作用達(dá)到減少腹部脂肪的堆積。此外,腹部運(yùn)動(dòng)可直接刺激腹部脂肪積聚部位及胃腸道,增強(qiáng)腹部肌肉、胃腸道平滑肌的運(yùn)動(dòng)和改善腹部組織胰島素受體的敏感性來(lái)調(diào)節(jié)代謝功能,加快對(duì)血液內(nèi)FFA及血糖的攝取及利用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,中醫(yī)振腹可以有效調(diào)節(jié)T2DM大鼠的糖脂代謝異常,降低大鼠血清FBG、FFA、TG的水平,振腹頻率在達(dá)到臨床操作的頻率400～600次/分時(shí),即可達(dá)到臨床的治療效果。其機(jī)制可能為:(1)振腹通過(guò)調(diào)節(jié)腎上腺的分泌功能,影響脂代謝;(2)增強(qiáng)腹部肌肉和胃腸道平滑肌運(yùn)動(dòng),增加了組織對(duì)脂肪的氧化作用;(3)減少腹部及內(nèi)臟脂肪異位堆積,提高腹部及內(nèi)臟組織細(xì)胞胰島素受體的敏感性。本實(shí)驗(yàn)為振腹療法的研究提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù),但實(shí)驗(yàn)研究?jī)H停留在對(duì)單一技術(shù)參數(shù)的探討上,觀測(cè)指標(biāo)也局限于血清學(xué)指標(biāo)的測(cè)定。因此,有必要在本研究的基礎(chǔ)上完善實(shí)驗(yàn)進(jìn)行更加深入的研究。

振腹法來(lái)源于推拿按摩手法中的振法,為中醫(yī)推拿術(shù)中獨(dú)特的操作手法。振腹療法常用于內(nèi)科疾病治療,主要包括婦科、男科疾病以及由內(nèi)分泌功能紊亂引起的部分臨床病癥等。臨床可利用其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)成為輔助治療糖尿病的途徑之一,其優(yōu)點(diǎn)主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:(1)預(yù)防糖尿病。肥胖是導(dǎo)致糖尿病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,而肥胖人群隨生活水平的提高將越來(lái)越多,特別在中青年,肥胖將構(gòu)成這一群體易患糖尿病的重要因素[16]。振腹療法在中醫(yī)理論的指導(dǎo)下,其“治未病”的優(yōu)越性是顯而易見的,體現(xiàn)在振腹通過(guò)降脂減肥而達(dá)到預(yù)防作用。(2)輔助治療糖尿病。振腹療法直接作用腹部,對(duì)于腹型肥胖的患者具有更強(qiáng)的針對(duì)性。此外,對(duì)于運(yùn)動(dòng)能力減退的糖尿病患者,振腹可彌補(bǔ)其主動(dòng)運(yùn)動(dòng)能力的不足,作為一種被動(dòng)運(yùn)動(dòng)繼續(xù)發(fā)揮運(yùn)動(dòng)療法對(duì)糖尿病的治療作用。

振腹法是推拿治療內(nèi)科疾病特別是內(nèi)分泌疾病的代表性手法,幾乎不存在不良反應(yīng),但學(xué)界對(duì)于中醫(yī)振腹的認(rèn)識(shí)度仍相對(duì)不足。因此,深入對(duì)振腹療法作用機(jī)理的研究,可以提高振腹療法在學(xué)術(shù)界的影響力和臨床應(yīng)用范圍,更好的傳承名老中醫(yī)的學(xué)術(shù)思想及技法。

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Influences of the vibrating abdomen on serum free fatty acids and triglyceride in rats w ith type 2diabetesmellitus

CHEN Peng-hui,YANGBing,JIRan,et al. School ofAcupuncture-Moxibustion and Tuina,Beijing University ofChinese Medicine,Beijing 100029,China

CHEN You-nan,E-mail:chenyounan2010@163.com

Objective To study the influences of the vibrating abdomen on serum free fatty acids and triglyceride in rats with type 2 diabetesmellitus.M ethods The ratmodels were established by using high sugar fatty feed combined with injection of low dose of streptozotocin,finally the ratswere divided into model group(n=11),low frequency treatmentgroup(n=9)and the high frequency treatmentgroup(n= 10),and all the treatment were lasted for 6 weeks.Another 12 normal rats were chosen as the control group.Fasting blood-glucose(FBG),free futty acid(FFA)and triglyceride(TG)were tested in pretherapy and post-treatment,and the resultswere analyzed by using one-way analysis of variance.Results

Compared with the control group,the levels of FBG,FFA and TG in the restanother groupswere increased significantly(P＜0.05).Compared with themodel group,the levels of FBG,FFA and TG of rats in low frequency and high frequency treatment groups were decreased significantly(P＜0.05).The differences in the levels of FBG,FFA and TG were not significant between low frequency treatment group and high frequency treatment group(P＞0.05).Conclusions Vibrating abdomen could decrease the levels of FBG,FFA and TG of rats with type 2 diabetes mellitus,and the mechanism might be related with thefollowing aspects:(1):Vibrating abdomen could influence the lipid metabolism by adjusting the secretion function of adrenal gland.(2)Vibrating abdomen could increase the lipid oxidation by strengthening the movement of abdominal muscles and gastrointestinal smooth muscles.(3)Vibrating abdomen could increase the sensitivity of insulin receptor in cells of abdomen and visceral by reducing the ectopic fataccumulation in abdomen and visceral.

Vibrating abdomen; Type 2 diabetes mellitus; Free fatty acid; Triglyceride; Adrenal

R244.1

A

10.3969/j.issn.1674-1749.2015.09.009

2014-11-29)

(本文編輯:董歷華)

國(guó)家自然科學(xué)基金(81202772)

100029 北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院[陳鵬輝(碩士研究生)、楊冰(碩士研究生)、季然(碩士研究生)、謝暢(碩士研究生)、張?jiān)?碩士研究生)、林彩霞、陳幼楠]

陳鵬輝(1990-),2010級(jí)在讀七年制研究生。研究方向:推拿治療內(nèi)科疾病的機(jī)理研究。E-mail: bucmchenpenghui@163.com

陳幼楠(1980-),女,博士,副教授。研究方向:推拿治療內(nèi)科疾病的機(jī)理研究。E-mail: chenyounan2010@163.com