范曉楠 劉 梅 胡凱莉 蘇佳燦 奉建芳

(1 上海中醫(yī)藥大學(xué)穆拉德中藥現(xiàn)代化研究中心，上海，201203；2 第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院，上海，200433)

骨松靈顆粒質(zhì)量標準研究

范曉楠1劉 梅1胡凱莉1蘇佳燦2奉建芳1

(1 上海中醫(yī)藥大學(xué)穆拉德中藥現(xiàn)代化研究中心，上海，201203；2 第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院，上海，200433)

目的：建立骨松靈顆粒的質(zhì)量標準。方法：采用薄層色譜法(TLC)對復(fù)方中淫羊藿、骨碎補、補骨脂、熟地黃、黃芪、當歸、鹽杜仲、醋龜甲進行定性鑒別；采用高效液相色譜法(HPLC)對淫羊藿中淫羊藿苷、骨碎補中柚皮苷、熟地黃中毛蕊花糖苷、黃芪中黃芪甲苷進行含量測定。結(jié)果：八味藥材薄層色譜圖斑點清晰，具有專屬性；淫羊藿苷在0.031 5～1.712 0 ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.999 7，平均回收率為100.23%，RSD為2.23%；柚皮苷在0.056 8～1.817 5 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.999 6，平均回收率為99.97%，RSD為1.22%；毛蕊花糖苷在0.060 8～1.945 6 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.999 8，平均回收率為99.94%，RSD為1.24%；黃芪甲苷在0.467 6～11.220 0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.999 1，平均回收率為99.84%，RSD為3.35%。結(jié)論：該方法能準確可靠地進行定性、定量檢測，能有效地控制骨松靈顆粒的質(zhì)量。

骨松靈顆粒；淫羊藿苷；柚皮苷；毛蕊花糖苷；黃芪甲苷；薄層色譜；高效液相色譜

骨松靈顆粒是由淫羊藿、骨碎補、補骨脂、熟地黃、黃芪、當歸、杜仲、龜甲八味藥材制成的中藥復(fù)方制劑，臨床主要用于治療骨質(zhì)疏松癥。為有效地控制該制劑的質(zhì)量，本實驗對制劑的質(zhì)量標準通過薄層鑒別和含量測定進行了研究，分別采用TLC法對顆粒中的八味藥材進行了薄層鑒別和HPLC法分別對淫羊藿苷、柚皮苷、毛蕊花糖苷和黃芪甲苷進行定量測定。

1 資料與方法

1.1 儀器資料 Agilent-1100型高效液相色譜儀(Agilent Corporation)；島津SIL-20AC型高效液相色譜儀(SHIMADZU Corporation)；HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海千載科技有限公司)；DP-8K數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海帝魄科學(xué)儀器有限公司)；SG5200HE超聲波清洗器(上海冠特超聲儀器有限公司)；AL-204電子天平(METTLER-TOLEDO Corporation)；JP5001電子天平(上海良平儀器儀表有限公司)；TLC VISUALIZER(CAMAG Corporation)；薄層色譜硅膠預(yù)制板(煙臺市化學(xué)工業(yè)研究院；魯Q/YT257-85)。

1.2 受試藥物 淫羊藿苷對照品、柚皮苷對照品、毛蕊花糖苷對照品、黃芪甲苷對照品、異補骨脂素對照品、補骨脂素對照品、當歸對照藥材(批號分別為：110737-200415、110722-201111、111530-201309、110781-200613、110739-201115、110738-201313、120927-201315，中國食品藥品檢定研究院)；杜仲對照藥材、龜甲對照藥材、膽固醇對照品(批號：121202-200502、121494-200401、111618-200301，中國藥品生物制品檢定所)；骨松靈顆粒樣品(自制，批號20140718)；甲醇、正丁醇、氨水、磷酸、冰醋酸、95%乙醇、無水乙醇、乙酸乙酯、乙醚、丁酮、甲酸98%、正己烷、甲苯、濃硫酸、三氯甲烷、氯化鋁、氫氧化鉀等試劑均為分析純(國藥集團化學(xué)試劑有限公司)；甲醇、乙腈均為色譜純(Honey well B&J)；水為純水、超純水(上海中醫(yī)藥大學(xué)穆拉德中藥現(xiàn)代化研究中心自制)

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別

2.1.1 淫羊藿[1]取本品0.5 g，研細，加入10 mL 95%乙醇，水浴溫浸(50 ℃)30 min，提取液濾過，得到濾液，在水浴鍋上蒸干所得的濾液，濾液蒸干后所得的殘渣中加入1 mL 95%乙醇使殘渣溶解，此時所得的溶液即為供試品溶液。與制備淫羊藿供試品溶液的方法相同，將缺少淫羊藿藥材的藥粉制成陰性對照溶液。用電子分析天平精密稱定淫羊藿苷對照品適量，置于容量瓶中，加入甲醇溶解，制成濃度為0.1 mg/mL的對照品溶液。用玻璃點樣管分別吸取制備好的淫羊藿供試品溶液10 μL、缺淫羊藿藥材的陰性對照溶液10 μL、淫羊藿苷對照品溶液10 μL，將樣品溶液點樣于同一硅膠G薄層板上，以水-丁酮-甲酸-乙酸乙酯(1-1-1-10)作為展開劑，將點樣后的薄層板放置在展開缸中進行展開，取出展開好的薄層板，于通風(fēng)櫥中平放晾干揮去溶劑，并噴以AlCl3試液，于105 ℃加熱(15～20 min)至斑點清晰，置紫外366 nm下檢視。結(jié)果見圖1。

圖1 骨松靈顆粒淫羊藿薄層色譜圖

注：1淫羊藿苷對照品 2，3，4骨松靈顆粒 5陰性對照品

2.1.2 骨碎補[1-2]取本品約0.5 g，研細，置于圓底燒瓶中，加入甲醇30 mL，水浴(80 ℃)回流提取1 h，溶液冷卻至室溫后，提取液用濾紙進行濾過，得到濾液，在水浴鍋上蒸干所得的濾液，在濾液蒸干后所得的殘渣中加入1 mL甲醇，使殘渣溶解，此時所得的溶液即為供試品溶液。參照骨碎補供試品溶液的制備方法，將缺少骨碎補藥材的藥粉制成陰性對照溶液。用電子分析天平精密稱定柚皮苷對照品適量，置于容量瓶中，加入甲醇溶解，制成濃度為0.5 mg/mL的對照品溶液。用玻璃點樣管分別吸取制備好的骨碎補供試品溶液10 μL，柚皮苷對照品溶液6 μL、陰性對照品溶液10 μL，將上述3種樣品溶液點樣于同一硅膠G薄層板上，水-甲醇-丁酮-乙酸乙酯(1-3-6-10)作為展開劑，在展開缸中展開，展開后取出薄層板，晾干揮去溶劑，并噴以AlCl3試液，于烘箱中105 ℃加熱(15 min)至斑點清晰，紫外366 nm下檢視。結(jié)果見圖2。

圖2 骨松靈顆粒骨碎補薄層色譜圖

注：1柚皮苷對照品 2，3，4骨松靈顆粒 5陰性對照品

圖3 骨松靈顆粒補骨脂薄層色譜圖

注：1補骨脂素、異補骨脂素對照品 2，3，4骨松靈顆粒 5陰性對照品

2.1.3 補骨脂[3]取本品約5.0 g，研細，加95%乙醇30 mL，超聲處理15 min，濾過，水浴蒸干濾液，殘渣中加入0.5 mL甲醇使溶解，即得供試品溶液。精密稱定異補骨脂素對照品、補骨脂素對照品各1 mg，加入甲醇制成每1 mL各含1 mg的混合對照品溶液。同法制成缺補骨脂藥材的陰性對照品溶液。用玻璃點樣管分別吸取補骨脂供試品溶液4 μL，異補骨脂素與補骨脂素的混合對照品溶液2 μL，陰性對照品溶液4 μL，將樣品溶液點樣于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-正己烷(1-6)作為展開劑，在展開缸中展開，展開后取出薄層板，晾干揮去溶劑，并噴以10%氫氧化鉀甲醇試液(顯色劑)，置紫外366 nm下觀察。結(jié)果見圖3。

2.1.4 黃芪[1]取本品約8.0 g，研細，置于圓底燒瓶中，加入甲醇25 mL，水浴80 ℃回流提取1 h，將提取液過濾，收集濾液，水浴揮去甲醇，殘渣中加入熱水20 mL使之溶解，冷卻至室溫后，將殘渣溶解后的水溶液中加入用純水飽和過的正丁醇，一共萃取4次，每次均為40 mL，萃取完后，合并水飽和正丁醇提取液，然后，用氨試液一共萃取2次，每次均為40 mL，棄去氨試液，合并正丁醇萃取液，并在80 ℃水浴上揮去溶劑，殘渣中加入甲醇使之溶解，最后定容至5 mL容量瓶中，所得溶液即為供試品溶液。與制備黃芪供試品溶液的方法相同，將缺少黃芪藥材的藥粉制成陰性對照溶液。用電子分析天平精密稱定黃芪甲苷對照品適量，置于容量瓶中，加入甲醇溶解，制成濃度為2.0 mg/mL的對照品溶液。用玻璃點樣毛細管分別吸取黃芪供試品溶液6 μL，黃芪甲苷對照品溶液2 μL，缺少黃芪的陰性對照品溶液6 μL，將上述3種樣品溶液點樣于同一硅膠G薄層板上，以水-三氯甲烷-甲醇(0.3-10-3)作為展開劑，將點樣后的薄層板放在展開缸中展開，取出展開好的薄層板，于通風(fēng)櫥中平放晾干揮去溶劑，并噴以10%硫酸乙醇試液(顯色劑)，于烘箱中105 ℃加熱(15～20 min)至斑點清晰，最后日光燈下觀察斑點。結(jié)果見圖4。

圖4 骨松靈顆粒黃芪薄層色譜圖

注：1黃芪甲苷對照品 2，3，4骨松靈顆粒 5陰性對照品

2.1.5 熟地黃[1,4]取本品約10.0 g，研細，加入50 mL 80%甲醇，靜置30 min，超聲處理30 min，溶液濾過，水浴蒸干濾液，殘渣中加入5 mL純水使溶解，用純水飽和過的正丁醇，一共萃取4次，每次均為10 mL，合并四次水飽和的正丁醇提取液，將提取液在水浴鍋上蒸干溶劑，在蒸干溶劑后的殘渣中加入2 mL甲醇溶解，所得溶液即為供試品溶液。精密稱定毛蕊花糖苷適量，置于容量瓶中，加入甲醇溶解，制成濃度1 mg/mL的對照品溶液。同法制成缺熟地黃藥材的陰性對照品溶液。用玻璃點樣管分別吸取上述的熟地黃供試品溶液3 μL、毛蕊花糖苷對照品溶液3 μL、缺少熟地黃的陰性對照溶液3 μL，將上述3種樣品溶液點樣于同一硅膠G薄層板上，以甲醇-三氯甲烷(3-7)作為展開劑，將點樣后的薄層板放在展開缸中展開，取出展開好的薄層板，于通風(fēng)櫥中平放晾干揮去溶劑，并在薄層板上均勻噴以10%硫酸乙醇試液(顯色劑)，將噴好后的薄層板放置于105 ℃烘箱中加熱(15 min)，至斑點清晰后取出，在日光下觀察薄層板上的斑點。結(jié)果見圖5。

圖5 骨松靈顆粒熟地黃薄層色譜圖

注：1毛蕊花糖苷對照品 2，3，4骨松靈顆粒 5陰性對照品

2.1.6 當歸[5-6]取本品約8.0 g，研細，加入30 mL乙醚，超聲15 min，將超聲所得的溶液濾過，水浴鍋上蒸干溶劑，將蒸干溶劑所得的殘渣中加入0.5 mL甲醇溶解，殘渣溶解所得的溶液即為供試品溶液。用電子天平稱取當歸對照藥材1.0 g，加入10 mL乙醚，參照當歸供試品溶液的制備方法，將當歸對照藥材制備為對照藥材溶液。將缺少當歸藥材的藥粉參照當歸供試品溶液的制備方法制備成陰性對照溶液。用玻璃點樣毛細管分別吸取當歸供試品溶液10 μL，當歸對照藥材溶液5 μL，陰性對照溶液10 μL，將樣品溶液點樣于同一硅膠G薄層板上，用乙酸乙酯-正己烷(1∶4)作為展開劑，將點樣后的薄層板放在展開缸中展開，取出展開好的薄層板，于通風(fēng)櫥中平放晾干揮去溶劑，置紫外366 nm觀察薄層板上的斑點。結(jié)果見圖6。

2.1.7 杜仲[4,7]取本品約5.0 g，研細，加無水乙醇30 mL，靜置30 min，超聲處理30 min，溶液濾過，濾液減壓濃縮至0.5 mL，所得的濃縮液即為供試品溶液。用電子分析天平稱取杜仲對照藥材約3.0 g，參照供試品溶液制備方法，將杜仲對照藥材制備為對照藥材溶液。將缺少杜仲藥材的藥粉參照杜仲供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液，備用。用玻璃點樣管分別吸取杜仲供試品溶液10 μL、杜仲對照藥材溶液10 μL、缺少杜仲的陰性對照溶液10 μL，將樣品溶液點樣于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-正己烷(1∶9)作為展開劑，將點樣后的薄層板放在展開缸中進行展開，取出展開好的薄層板，于通風(fēng)櫥中平放晾干揮去溶劑，置紫外燈366 nm下檢查薄層板上的斑點。結(jié)果見圖7。

圖6 骨松靈顆粒當歸薄層色譜圖

注：1當歸對照藥材 2，3，4骨松靈顆粒 5陰性對照品

圖7 骨松靈顆粒杜仲薄層色譜圖

注：1杜仲對照藥材 2，3，4骨松靈顆粒 5陰性對照品

2.1.8 龜甲[1,8]取本品約13.0 g，研細，加入20 mL甲醇，在超聲儀上超聲30 min，將所得的溶液濾過，并在水浴鍋上蒸干所得的濾液，在濾液蒸干所得的殘渣中加入1 mL甲醇溶解，所得溶液即為供試品溶液。用電子天平精密稱定膽固醇對照品適量，置于棕色的容量瓶中，加入甲醇至刻度使溶解，制成濃度為1 mg/mL的對照品溶液。稱定龜甲對照藥材約4.0 g，按照供試品溶液制備方法制備為龜甲對照藥材溶液。與龜甲供試品溶液的制備方法相同，將缺少龜甲藥材的藥粉制成陰性對照溶液，備用。用玻璃點樣毛細管分別吸取龜甲供試品溶液3 μL、膽固醇對照品溶液和龜甲對照藥材溶液各3 μL、缺少龜甲的陰性對照品溶液3 μL，將樣品溶液點樣于同一硅膠G板上，乙酸乙酯-甲酸-甲苯-甲醇(2∶0.6∶15∶1)作為展開劑，將點樣后的薄層板放在展開缸中上行展開16 cm，取出展開好的薄層板，于通風(fēng)櫥中平放晾干揮去溶劑，并在薄層板上均勻噴以10%硫酸乙醇試液，將噴好后的薄層板放置在105 ℃烘箱中加熱(20 min)，至斑點清晰后取出，于日光下觀察薄層板上的斑點。結(jié)果見圖8。

圖8 骨松靈顆粒龜甲薄層色譜圖

注：1膽固醇對照品 2龜甲對照藥材 3，4，5骨松靈顆粒 6陰性對照品

結(jié)論：在薄層板上，三批制劑樣品在與相應(yīng)的陽性對照樣品位置處有顯相同的斑點，而陰性對照樣品在此處無干擾。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件[1]淫羊藿苷：流動相乙腈-水(30-70)，流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃，進樣量10 μL，檢測波長270 nm。理論塔板數(shù)按照主要成分淫羊藿苷的峰進行計算應(yīng)不低于1500。柚皮苷：流動相甲醇-磷酸-水(35∶4∶65)，流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃，進樣量10 μL，檢測波長283 nm。理論塔板數(shù)按照主要成分柚皮苷的峰進行計算應(yīng)不低于3000。毛蕊花糖苷：流動相乙腈-1%醋酸(14∶86)，流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃，進樣量20 μL，檢測波長334 nm。理論塔板數(shù)按照主要成分毛蕊花糖苷的峰進行計算應(yīng)不低于5 000。黃芪甲苷[9-10]：流動相乙腈-水(33∶67)，流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃，進樣量20 μL，蒸發(fā)溫度：100 ℃，霧化溫度：80 ℃，氮氣流速：1.6 mL/min。理論塔板數(shù)按照主要成分黃芪甲苷的峰進行計算應(yīng)不低于4 000。

2.2.2 對照品溶液制備 分別精密稱定淫羊藿苷、柚皮苷、毛蕊花糖苷、黃芪甲苷對照品適量，其中淫羊藿苷、柚皮苷、黃芪甲苷分別加入甲醇制成每毫升中含0.216 0、0.568 0、0.935 0 mg的溶液，毛蕊花糖苷加入流動相制成每毫升中含0.243 2 mg的溶液，即得對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液制備 1)淫羊藿苷供試品溶液：稱取本品約1.1 g，置于具塞錐形瓶中，加入甲醇20 mL，稱重，超聲處理1 h，再稱重，并用甲醇補足減失重量，搖勻，溶液濾過，取續(xù)濾液，用微孔濾膜(0.45 μm)進行濾過，即得。2)柚皮苷供試品溶液：稱取本品約1.2 g，加入甲醇30 mL，置于圓底燒瓶中，加熱回流(80 ℃)3 h，冷卻至室溫，溶液濾過，濾液置于50 mL容量瓶中，用甲醇洗滌容器，洗滌的溶液倒入量瓶中，并加入甲醇稀釋至容量瓶的刻度，用微孔濾膜(0.45 μm)進行濾過，即得。3)毛蕊花糖苷供試品溶液：稱取本品約12.0 g，置于圓底燒瓶中，加入甲醇100 mL，稱重，水浴80 ℃回流提取45 min，冷卻至室溫，用電子分析天平再稱重，并用甲醇補足提取過程中因溶劑揮發(fā)而減失的重量，搖勻溶液后用濾紙進行濾過，用量筒量取續(xù)濾液50 mL，水浴(80 ℃)揮干溶劑，在續(xù)濾液揮干溶劑后所得的殘渣中加入流動相進行溶解，溶解后溶液轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，用微孔濾膜(0.45 μm)進行濾過，即得。4)黃芪甲苷供試品溶液：稱取本品約5.0 g，置于圓底燒瓶中，加入甲醇100 mL，水浴(80 ℃)回流提取2 h，提取液用濾紙濾過，收集濾液，并在水浴鍋上揮去濾液中的溶劑，濾液揮去溶劑后所得的殘渣中加入50 mL熱水溶解，冷卻至室溫后，在水溶液中加入水飽和過的正丁醇，一共萃取4次，每次均為40 mL，合并所得的正丁醇提取液，然后用氨試液萃取2次，每次40 mL，棄去氨試液，合并正丁醇萃取液，并在水浴(80 ℃)上揮去溶劑，殘渣加甲醇進行溶解，并定容至10 mL量瓶中，用微孔濾膜(0.45 μm)進行濾過，即得。

2.2.4 標準曲線繪制 取2.2.2項下4種對照品溶液，稀釋成不同濃度，分別按照2.2.1項下色譜條件測定，記錄峰面積。分別以淫羊藿苷、柚皮苷、毛蕊花糖苷、黃芪甲苷濃度X為橫坐標，峰面積Y為縱坐標，得回歸方程Y=247.93X+0.023 7(r=0.999 7)，Y=205.14X+0.342 6(r=0.999 6)，Y=369.29X+0.140 6(r=0.999 8)，Y=1.529 3X+2.871 9(r=0.999 1)，線性范圍分別為0.031 5～1.712 0 μg，0.056 8～1.817 6 μg，0.060 8～1.945 6 μg，0.467 6～11.220 0 μg，線性關(guān)系良好。

2.2.5 專屬性 按2.2.3項下的方法，分別制備不含淫羊藿、骨碎補、熟地黃和黃芪的陰性對照溶液，按照2.2.1項下色譜條件進樣測定。結(jié)果在與淫羊藿苷、柚皮苷、毛蕊花糖苷和黃芪甲苷對照品色譜相應(yīng)位置上陰性對照品無干擾，表明本方法具有較好的專屬性。

2.2.6 精密度試驗 取2.2.2項下淫羊藿苷和柚皮苷對照品溶液各10 μL，毛蕊花糖苷和黃芪甲苷對照品溶液各20 μL，分別按2.2.1項下色譜條件測定，連續(xù)進樣5次，測得淫羊藿苷、柚皮苷、毛蕊花糖苷、黃芪甲苷峰面積RSD分別為0.11%，0.36%，0.83%，0.65%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗 精密吸取淫羊藿苷和柚皮苷供試品溶液各10 μL，毛蕊花糖苷和黃芪甲苷供試品溶液各20 μL，分別于0，2，4，6，8，12 h進行測定。結(jié)果淫羊藿苷在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定，RSD為3.14%；柚皮苷在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定，RSD為0.67%；毛蕊花糖苷在4 h內(nèi)基本穩(wěn)定，RSD為2.32%；黃芪甲苷在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定，RSD為1.86%。

2.2.8 重復(fù)性試驗 稱取骨松靈顆粒適量，按照2.2.3項下方法分別制備6份淫羊藿苷、柚皮苷、毛蕊花糖苷和黃芪甲苷供試品，按照2.2.1項下色譜條件測定峰面積，計算4種成分平均含量，RSD值分別為1.77%，0.73%，2.32%，0.79%，表明試驗重復(fù)性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗 取已知含量的骨松靈顆粒各9份，分別加入淫羊藿苷、柚皮苷、毛蕊花糖苷和黃芪甲苷對照品溶液適量，按照2.2.3項下供試品溶液的制備方法，同法進行處理樣品，樣品溶液進樣測定含量，計算樣品的加樣回收率。淫羊藿苷平均回收率為100.23%，柚皮苷平均回收率為99.97%，毛蕊花糖苷平均回收率為99.94%，黃芪甲苷平均回收率為99.84%，結(jié)果表明方法可靠。

2.2.10 樣品測定 取顆粒樣品共3批，按上述四種供試品溶液的制備方法制備樣品溶液，分別在上述各色譜條件下將樣品溶液進樣測定，測得四種指標性成分的含量。結(jié)果如下表1。

表1 骨松靈顆粒樣品測定結(jié)果(n=3)

3 討論

淫羊藿、骨碎補、熟地黃、黃芪是本方中的君臣藥。淫羊藿中的淫羊藿苷等黃酮類成分具有抑制破骨細胞形成[11]；骨碎補中柚皮苷等黃酮類成分具有提高骨密度，促進成骨細胞的增殖和分化[12]；熟地黃提取物能提高成骨細胞中堿性磷酸酶的活性及成骨細胞的增殖[13]；黃芪總黃酮能明顯抑制骨礦物質(zhì)的溶解和丟失[14]；故選擇淫羊藿中的淫羊藿苷、骨碎補中的柚皮苷、熟地黃中的毛蕊花糖苷、黃芪中的黃芪甲苷作為含量測定的指標性成分。

骨碎補的鑒定研究方法按照2010版藥典中展開劑的條件進行展開，結(jié)果在柚皮苷對照品的相應(yīng)位置處樣品無斑點，采用本實驗中展開劑條件后，斑點清晰可見，且陰性無干擾。黃芪的鑒定研究方法按照2010版藥典的檢測方法制樣，以黃芪甲苷為對照，結(jié)果陰性對照有干擾，經(jīng)摸索條件后，按照本實驗方法進行展開，結(jié)果斑點清晰，陰性對照無干擾。熟地黃的鑒定研究方法按照2010版藥典的檢測方法制樣展開，以毛蕊花糖苷為對照，結(jié)果供試品色譜圖斑點分不開，且陰性有干擾；參照文獻中展開劑條件進行展開，斑點清晰可見，且陰性無干擾。當歸的鑒定研究方法按照2010版藥典的檢測方法未有斑點，參考文獻中鑒別方法，結(jié)果斑點清晰可見，且陰性無干擾。

在定量測定中，分別對供試品溶液制備中的提前方法、提取溶劑、提取時間進行了考察，最終確定本文中供試品的處理方法。

采用《中國藥典》2010年版一部中淫羊藿藥材中淫羊藿苷含量測定色譜條件對本品中淫羊藿苷含量進行測定，色譜峰分離較好，峰形對稱，適合本品中淫羊藿苷的含量測定；按照藥典流動相條件(甲醇-醋酸-水)測定柚皮苷，峰有拖尾現(xiàn)象，將流動相改為甲醇-磷酸-水，峰形較好，適合本品中柚皮苷的含量測定；按照藥典，毛蕊花糖苷流動相條件為乙腈-0.1%醋酸(16∶84)，色譜峰分離不好，峰形拖尾，調(diào)整流動相條件為乙腈-1%醋酸(14∶86)，色譜峰分離較好；按照藥典，黃芪甲苷流動相比例為乙腈-水(32∶68)，色譜峰分離不好，調(diào)整流動相比例為(33∶67)，色譜峰分離較好。

由毛蕊花糖苷穩(wěn)定性試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，毛蕊花糖苷穩(wěn)定性較差[15]，供試品應(yīng)在制備后4 h內(nèi)進樣測定。

本研究采用TLC法定性鑒別8味藥材的特征斑點明顯，HPLC法測定4種指標性成分含量的方法較簡便，且穩(wěn)定、準確，可有效控制骨松靈顆粒的質(zhì)量。

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(2015-04-14收稿 責(zé)任編輯：張文婷)

The Study of the Quality Standard of Gusongling Granules

Fan Xiaonan1,Liu Mei1,Hu Kaili1,Su Jiacan2,Feng Jianfang1

(1ShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicine，MuradResearchCenterofModernizedChineseMedicine，Shanghai201203，China；2TheSecondMilitaryMedicalUniversityforChanghaiHospital，Shanghai200433，China)

Objective:To establish the quality standard for Gusongling Granules. Methods: TLC was performed to identify the qualification of Epimedii Folium(Yinyanghuo), Drynarial Rhizoma(Gusuibu), Psoraleae Fructus(Buguzhi), Rehmanniae Radix Praeparata(Shudihuang), Astragali Radix(Huangqi), Angelicae Sinensis Radix(Danggui), Eucommiae Cortex(Yanduzhong), Testudinis Carapax Et Plastrum(Cuguijia). Besides, a HPLC method was established for the determination of icariine, naringin, acteoside, and astragaloside. Results: The spots on TLC plates were clear with specificity. Icariin showed a good linear relationship at a range between 0.0315 and 1.7120 μg, r=0.9997, the average recovery was 100.23%, and RSD was 2.23%. Naringin showed a good linear relationship at a range between 0.0568 and 1.8175 μg, r=0.9996, the average recovery was 99.97%, and RSD was 1.22%. Acteoside showed a good linear relationship at a range between 0.0608 and 1.9456 μg, r=0.9998, the average recovery was 99.94%, and RSD was 1.24%. Astragaloside showed a good linear relationship at a range between 0.4676 and 11.2200 μg, r=0.9998, the average recovery was 99.84%, and RSD was 3.35%. Conclusion: This method can be accurate and reliable in qualitative and quantitative detection, and can control the drug quality effectively.

Gusongling Granules; Icariine; Naringin; Acteoside; Astragaloside; TLC; HPLC

上海市科委中藥現(xiàn)代化專項(編號:12401900703)

范曉楠(1988.9—)，女，碩士，研究方向：中藥新型給藥系統(tǒng)研究，E-mail：fanxn2007@163.com

奉建芳(1966.4—)，博士，研究員，博士生導(dǎo)師，研究方向：中藥新型給藥系統(tǒng)研究，E-mail：fengjianfang@vip.tom.com

R284.1

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.10.038