王英賀，姚新華，苑淑賢，郭衍冰，魏 峰，邵洪澤，李 爽，曹利利＊

（1.吉林省畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究院，吉林長春130062；2.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，吉林長春130118）

豬腹瀉嚴(yán)重影響了養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，幾乎我國所有的省份都報道了豬腹瀉的暴發(fā)和流行，豬的病毒性腹瀉危害尤其嚴(yán)重，妨礙了我國養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，引起了眾多科研工作者的廣泛關(guān)注。針對此類疾病，生產(chǎn)上仍缺乏快速、準(zhǔn)確的診斷方法和有效的預(yù)防措施，所以熟練掌握引起豬腹瀉的各類病毒的病原、臨床癥狀、流行特點(diǎn)以及病理變化，并制定科學(xué)、合理的綜合防治對策是提升養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的關(guān)鍵。綜合各類引起豬腹瀉的病毒，其中危害最大的是豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）、豬傳染性胃腸炎病毒（Porcine transmissible gastroenteritis virus，TGEV）、豬輪狀病毒（Porcine rotavirus，PoRV）、豬博卡病毒（Porcine bocavirus，PBoV）和豬嵴病毒（Porcine kobuvirus，PKV）?，F(xiàn)將以上病毒所引發(fā)腹瀉的研究現(xiàn)狀及預(yù)防措施敘述如下，希望為后續(xù)研究提供參考。

1 病原學(xué)特性

1.1 豬流行性腹瀉病毒

豬流行性腹瀉病毒（PEDV）為尼多病毒目、冠狀病毒科、冠狀病毒屬，線性單股正鏈RNA 病毒，約28kb［1］。病毒粒子大小約為95nm～190nm，呈多形性且多數(shù)為球形，由纖突蛋白（S）、膜蛋白（SM）、小包膜蛋白（E）和核衣殼蛋白（N）組成，其中E、S和M 蛋白存在于病毒表面，N 蛋白與PEDV 基因組相互纏繞［2］。最初于1971年英國首次報道該病，此后比利時、德國、瑞士等國也相繼報道［3］，1976年我國報道了豬流行性腹瀉的發(fā)生［4］，1978年分離出PEDV 并 將 其 命 名 為CV777 株［5］，1995 年 國 際病毒分類委員會第六次會議將PEDV 正式列為冠狀病毒屬成員［6］，2013 年北美和南美才報道發(fā)現(xiàn)PEDV［7］。PEDV 對 消 毒 藥 和 外 界 環(huán) 境 抵 抗 力 不強(qiáng)，超聲處理和反復(fù)凍融對PEDV 的感染力也幾乎沒有影響，但其卻對氯仿和乙醚尤其敏感［8］。細(xì)胞培養(yǎng)PEDV 相對困難，直到1982年才首次在胎豬腸組織原代單層細(xì)胞上培養(yǎng)PEDV 并獲得成功，1988年首次在含有胰酶的Vero細(xì)胞培養(yǎng)基中成功繁殖PEDV［9］。

1.2 豬傳染性胃腸炎病毒

豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）屬于套式病毒目、冠狀病毒科、冠狀病毒屬的單股正鏈RNA 病毒，病毒粒子呈多形性，其直徑為60nm～160nm，分子質(zhì)量6×103ku［10］，基因組大小約28.5kb［11］。1946年美國伊利諾斯州首次報道，隨后1956 年日本，1957年 英 國 對TGE 進(jìn) 行 報 道［12］，1973 年 在 我國首次分離得到TGEV。TGEV 核酸有9 個開放閱讀框（ORFs）編碼4種結(jié)構(gòu)蛋白（糖蛋白S、N－端被糖基化的完整膜蛋白M、磷酸化的酸性蛋白N 和膜結(jié)合蛋白E）和5 種非結(jié)構(gòu)蛋白（ORF1a、ORF1ab、ORF3a、ORF3b、ORF7）［13］。TGEV 在 胞漿中成熟，出芽是通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，病毒粒子可在細(xì)胞漿的空泡中觀察到。該病毒只有一個血清型，對外界的抵抗力較弱，但在寒冷又潮濕的季節(jié)生命力極強(qiáng)且穩(wěn)定性極好。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)豬睪丸細(xì)胞（Swin testicle，ST）被認(rèn)為是培養(yǎng)TGEV 最為靈敏的細(xì)胞系［14］。TGEV 對氯仿、乙醚、去氧膽酸鈉和光照敏感（在紫外照射下可迅速滅活）；在膽汁中存在相當(dāng)穩(wěn)定；對胰酶有抵抗力，毒力越強(qiáng)的毒株，對胰酶的敏感性越高；對低溫耐受，在液氮中存放3年毒力無明顯下降。

1.3 豬輪狀病毒

輪狀病毒（RV）屬呼腸病毒科、輪狀病毒屬是二十面體雙層對稱衣殼、無囊膜、呈球形的雙鏈分節(jié)段RNA 病毒，RV 基因組總長度約為18.52kb，總分子質(zhì)量約為12×103ku［15］，由11個節(jié)段組成，編碼6種結(jié)構(gòu)蛋白（VP1－VP7）和6種非結(jié)構(gòu)蛋白（NSP1－NSP6）［16］。1969 年 在 小 牛 糞 便 中 成 功 分 離 到RV［17］；1974年在英國首次從腹瀉的豬病料中分離到輪狀病毒［18］；1990 年Saif研究RV 基因組雙鏈RNA 的電泳型，病毒遺傳特性和病毒抗原發(fā)現(xiàn)均有不同程度的差異，于是將RV 分為7個群（A－G）［19］。RV 具有組抗原、亞組抗原和血清型抗原三類主要特異性抗原，目前認(rèn)為腸毒素中的NSP4是RV 的關(guān)鍵致病因素［20］，成熟的RV 粒子直徑約為75nm，主要由含有VP4和VP7的外衣殼，含有VP6的中間層衣殼和含有VP1、VP2、VP3 的最內(nèi)層衣殼組成［21］。由于RV 表面的VP4有抑制病毒在細(xì)胞上生長的作用，因此PoRV 需在不加血清的培養(yǎng)液中用蛋白水解酶處理才可適應(yīng)細(xì)胞生長。有報道稱MA－104細(xì)胞和Vero細(xì)胞是最適合輪狀病毒生長的 細(xì) 胞 系，1980 年 細(xì) 胞 分 離 到 了RV－Wa 株［22］。RV 具有較強(qiáng)的抗理化因素能力，如耐乙醚、次氯酸鹽、氯仿、甲醛、酸堿，在反復(fù)凍融以及37℃超聲處理1h等情況下仍不失活，其中可致病性PoRV 可在室溫下存在4 個月。但是，EGTA、EDTA、硫甲酸鈉等均可使RV 失活。

1.4 豬博卡病毒

豬博卡病毒（PBoV）為無囊膜的單鏈DNA 病毒是細(xì)小病毒科，細(xì)小病毒亞科（Parvovirinae）、博卡病毒屬（Bocavirus）成員［23－24］。病毒粒子為正12面體，直徑約為26nm，體積小且結(jié)構(gòu)簡單，豬博卡病毒基因組大小約5.2kb 左右，有3 個開放閱讀框［25］，2009年首次由瑞典學(xué)者通過隨機(jī)多重擴(kuò)增方法和高通量測序技術(shù)在豬群中得以鑒定［26］。PBoV按照發(fā)現(xiàn)的先后順序可分為5 種基因型（PBov1、PBoV2、PBoV3、PBoV4、PBoV5）［27］。該病毒對外界抵抗能力強(qiáng)，以“首－尾”相接的滾環(huán)模式進(jìn)行復(fù)制。

1.5 豬嵴病毒

嵴病毒為無囊膜的單股正鏈RNA 病毒屬小核糖核酸病毒科、Kobu病毒屬，是近年來發(fā)現(xiàn)的新型病毒。其成員包含愛知病毒（Aichi virus，AiV）與牛嵴病毒（Bovine kobuvirus，BKV）和候選豬嵴病毒（Porcine kobuvirus，PKV）［28］。病毒粒子呈球形，直徑大小約為30nm，嵴病毒基因組大小約為8.2kb～8.4kb，目前發(fā)現(xiàn)存在一個開放閱讀框，編碼一個由3個結(jié)構(gòu)蛋白和7個非結(jié)構(gòu)蛋白組成的大的聚合蛋白［29］。PKV 于2007年在匈牙利首次被發(fā)現(xiàn)，此后中國、泰國、韓國、日本、巴西、新西蘭等地開始報道［30］。2013 年P(guān)KV 被 正 式 確 定 為 嵴 病 毒 屬 成員［31］。PKV 粒子在體外相對穩(wěn)定，但對熱敏感，60℃30min即可被滅活。PKV 不僅存在于胃腸道內(nèi)，還存在于健康的豬血液中，雖然豬嵴病毒在腹瀉仔豬中檢出率很高，但目前沒有充分的證據(jù)證明是否豬感染嵴病毒會引起腹瀉或者是腹瀉會引起嵴病毒的感染，此外PKV 的易感細(xì)胞不明確，未能成功分離。所以該病毒的致病性、臨床癥狀和病理特點(diǎn)應(yīng)倍加關(guān)注。

2 流行病學(xué)

2.1 傳染源

經(jīng)調(diào)查了解發(fā)現(xiàn)豬流行性腹瀉的主要傳染源是病豬；豬傳染性胃腸炎主要傳染源為病豬和康復(fù)帶毒豬，貓、犬和狐貍被認(rèn)為是該病毒在豬群中傳播的帶毒者；豬博卡病毒主要傳染源為病豬和康復(fù)帶毒豬；輪狀病毒的主要傳染源是病豬、隱性感染豬和康復(fù)帶毒豬。

2.2 傳播途徑

通常引起豬病毒性腹瀉的傳播途徑為消化道和呼吸道。對于輪狀病毒，人和其他動物可通過攜帶病毒傳播該?。浑m然糞－口途徑是豬流行性腹瀉主要的傳播途徑但并不是唯一的；豬博卡病毒還可通過哺乳、配種垂直傳播；豬嵴病毒病毒除了具有糞－口途徑外還可通過母乳和血液傳播。

2.3 流行方式及特點(diǎn)

豬病毒性腹瀉主要發(fā)生在冬春寒冷季節(jié)，不同年齡和品種的豬均可感染發(fā)病，且通常表現(xiàn)為發(fā)病率高、病死率成年豬低、仔豬高等特點(diǎn)。但是，不同病毒引起的腹瀉在流行方式上仍存在很大差異。例如：豬的流行性腹瀉的潛伏期較長一般為5d～8d，哺乳仔豬和架子豬比成年豬發(fā)病嚴(yán)重，病死率也高于成年豬，1983年P(guān)rager首次確定PED 呈地方性流行并且可以在豬群中持續(xù)存在；而Maes 和Haelter調(diào)查發(fā)現(xiàn)流行性的豬傳染性胃腸炎的潛伏期較一般病毒短，部分豬群可在18h～71h內(nèi)感染發(fā)?。ㄗ胸i潛伏期較短，大豬潛伏期較長）。1 日齡～10日齡內(nèi)的仔豬死亡率最高，可高達(dá)100%，但隨著年齡的增長發(fā)病率和死亡率逐漸降低。TGE 在流行病學(xué)研究方面更為復(fù)雜，有報道稱如果感染了TGEV 的變異株P(guān)RCV，流行模式將會發(fā)生改變。該病主要存在暴發(fā)性流行、地方流行和周期性流行三種流行模式。但是，豬輪狀病毒和新發(fā)現(xiàn)的豬博卡病毒、豬嵴病毒僅呈地方性感染，其中豬輪狀病毒對理化因素有很強(qiáng)的抵抗力從而導(dǎo)致病愈的豬也常常帶毒。由于輪狀病毒不但在不同物種間交互感染，而且也與不同病毒株和細(xì)菌株間存在混合感染，使疾病擴(kuò)散并長期傳播，導(dǎo)致豬的死亡率升高，給養(yǎng)豬業(yè)造成很大的損失。豬博卡病毒也與其他病毒存在混合感染且其最短潛伏期約為16h～19h。而豬嵴病毒沒有地域限制［32］，3周齡以下的仔豬感染豬嵴病毒的概率較高。

3 臨床癥狀

豬的病毒性腹瀉大多表現(xiàn)為潛伏期短，發(fā)病快，死亡率高，主要臨床癥狀為引起不同程度的嘔吐和腹瀉，但各類病毒因病原不同表現(xiàn)的臨床癥狀也有差異。感染傳染性胃腸炎的豬首先出現(xiàn)口渴、嘔吐等癥狀，接著出現(xiàn)嚴(yán)重的噴射狀水樣腹瀉，嚴(yán)重的糞中帶血。病豬表現(xiàn)為被毛逆立、毛發(fā)黯淡無光、消瘦掉膘，糞便顏色常為黃色、綠色、灰白色。不同日齡的豬出現(xiàn)不同的臨床癥狀，例如，仔豬會突然發(fā)病，出現(xiàn)噴射式水樣腹瀉、短暫嘔吐、嚴(yán)重脫水并在2d～7d內(nèi)死亡，病愈的仔豬也會出現(xiàn)生長發(fā)育不良；泌乳母豬出現(xiàn)斷乳、體溫升高、嘔吐、腹瀉、脫水；一些成年豬和育肥豬普遍呈現(xiàn)厭食、個別嘔吐、輕度腹瀉，在1周左右康復(fù)，并且會產(chǎn)生主動免疫。豬流行性腹瀉的臨床癥狀與豬傳染性胃腸炎類似，患有流行性腹瀉的豬，母豬或育肥豬在疾病暴發(fā)時鮮有臨床癥狀，隨著日齡增加死亡率逐漸降低。而輪狀病毒感染的初期常常表現(xiàn)為食欲減退、精神抑郁、食后嘔吐、一段時間后會發(fā)生嚴(yán)重的深黑色或黃白色水樣或糊狀的腹瀉。同時，仔豬的日齡、斷奶的時間和母源抗體的存在與否導(dǎo)致臨床癥狀發(fā)生不同的變化（無母源抗體的新生仔豬病死率可達(dá)100%）；在引起豬腹瀉的病毒中，豬博卡病毒對空腸黏膜絨毛還未發(fā)育完全的哺乳仔豬的影響最大，嚴(yán)重時會造成腎和心臟功能衰竭而死亡，而母豬和育肥豬無顯著癥狀，死亡率也較低。對于患有豬嵴病毒的豬在發(fā)病前先嘔吐，然后出現(xiàn)多次反復(fù)的劇烈腹瀉（糞便顏色多為灰白色、黃綠色、淡綠色）。

4 病理變化

TGEV、PBoV、PoRV 引起腹瀉的病死豬，病變主要發(fā)生在胃和腸道，其共同特點(diǎn)為小腸管膨滿脹氣、腸壁變薄發(fā)亮、腸內(nèi)存在不同顏色的液狀或糊狀內(nèi)容物（TGEV 和PBoV 為黃綠色或灰白色、PoRV為深黑色或黃白色）、胃內(nèi)有凝乳塊、部分胃黏膜和小腸黏膜充血腫脹。組織學(xué)變化主要為腸絨毛萎縮變短甚至脫落、小腸絨毛上皮細(xì)胞空泡化。而PEDV 引起腹瀉的病死豬病變主要發(fā)生在腸道，與傳染性胃腸炎相似。

5 診斷

臨床診斷需對臨床特征表現(xiàn)做出相應(yīng)的判斷，而這些病毒性腹瀉癥狀非常相似，無法辨識是何種病毒引發(fā)的腹瀉，僅能做出初步診斷。所以目前市場上檢測和治療豬病毒性腹瀉常用實(shí)驗(yàn)室方法，即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、間接夾心ELISA、免疫電鏡法（IEM）、免疫熒光法（IF）、間接血凝試驗(yàn)（IHA）、PCR 和多重RT－PCR法等。

6 綜合防控措施

引起豬病毒性腹瀉的原因較復(fù)雜，因?yàn)樵谂R床上往往是混合存在和相互促進(jìn)誘發(fā)的，因此需要尋找出一條綜合而全面的治療豬病毒性腹瀉的措施。針對本文所列舉的病毒性腹瀉，其預(yù)防措施總結(jié)如下：改善飼養(yǎng)管理措施，保持養(yǎng)豬舍的衛(wèi)生環(huán)境，為避免養(yǎng)豬場環(huán)境被污染，應(yīng)及時而又徹底的清理糞便及被污染的墊草和器具，控制外來人員的進(jìn)入，做好豬場滅鼠、滅蠅、防貓等工作，定期做好消毒處理?？刂曝i舍的溫度、相對濕度、光照和通風(fēng)強(qiáng)度。給豬喂食配方合理的優(yōu)質(zhì)飼料，不給豬飲用污水，不交叉使用豬舍和器具，并且要嚴(yán)格避免豬群密度過大。認(rèn)真執(zhí)行防疫制度，做好免疫預(yù)防：及時接種正規(guī)疫苗，有效保護(hù)母豬，使哺乳仔豬獲取較高的母源抗體保護(hù)。另外還要對幾種重要的傳染病格外注意，為避免免疫效果差或抗體水平低應(yīng)經(jīng)常做抗體檢測。其次，由于缺乏豬博卡病毒疫苗，為預(yù)防該類疾病的發(fā)生與泛濫應(yīng)對母豬進(jìn)行返飼。新生仔豬與待產(chǎn)母豬護(hù)理：新生仔豬在接產(chǎn)過程中要嚴(yán)格消毒，使仔豬身體盡快干燥，仔豬產(chǎn)出后應(yīng)盡快吃到初乳。確定仔豬最佳斷奶時間，使仔豬較好采食。母豬產(chǎn)前半個月至產(chǎn)后一周做好保健工作，避免年后產(chǎn)仔。嚴(yán)把挑種關(guān)，盡量做到自繁自養(yǎng)：如從外引進(jìn)，為了防止帶疫病，應(yīng)該嚴(yán)格做好隔離飼養(yǎng)，并設(shè)定好觀察期，一般45d后無疫病出現(xiàn)，才可與本場豬混和飼養(yǎng)，另外還要注意盡量不要從患過重大傳染病的豬場引進(jìn)仔豬。做好當(dāng)?shù)亓餍胁W(xué)調(diào)查，通過本豬場以及鄰近豬場的調(diào)查分析，確定主要致病因素和以往發(fā)病情況，制定適用于本場的免疫和藥物預(yù)防工作。

7 小結(jié)

輕度腹瀉對于機(jī)體是一種保護(hù)性反應(yīng)，它能夠及時排除體內(nèi)的有害物質(zhì)。但是，嚴(yán)重而又持續(xù)的腹瀉則是消化系統(tǒng)出現(xiàn)障礙，致使腸道內(nèi)菌群失調(diào)，機(jī)體發(fā)生全身性營養(yǎng)不良、血糖降低、酸中毒等，從而導(dǎo)致電解質(zhì)和水排出體外。病毒引發(fā)的腹瀉是突發(fā)性和持續(xù)性的，給養(yǎng)豬帶來的損失更是慘重的，因此我們應(yīng)該警惕病毒性腹瀉的發(fā)生。在我國，除了上述幾種病毒可引起豬的病毒性腹瀉外，還有牛病毒性腹瀉病毒、豬瘟病毒、偽狂犬病病毒、豬圓環(huán)病毒等，雖然本文并未談及但由這些病毒引發(fā)的腹瀉，我們?nèi)匀恍枰o予高度的關(guān)注。到目前為止，我國對豬博卡病毒和豬嵴病毒的認(rèn)識與了解還缺少深層次的研究與探討，相關(guān)的科研報道還相當(dāng)匱乏，深入探索這兩種病毒的基因結(jié)構(gòu)、致病機(jī)制、免疫應(yīng)答及感染后引起的臨床表現(xiàn)等相關(guān)內(nèi)容具有一定意義。

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