安徽省阜陽市臨泉縣人民醫(yī)院（236400）劉啟迪 任翼

南京中醫(yī)藥大學(xué)國家教育部中藥炮制規(guī)范化及標(biāo)準(zhǔn)化工程研究中心（210023）秦昆明 蔡皓 蔡寶昌△

南京海昌中藥集團有限公司（210061) 秦昆明 蔡寶昌△

本實驗利用經(jīng)典柱層析色譜（CC），薄層層析色譜（TLC），制備薄層色譜法（PTLC），制備液相（PHPLC）和重結(jié)晶等方法，首次從牛蒡子的石油醚部位和乙酸乙酯部位共分離得到13種單體化合物，經(jīng)1H-NMR,13C-NMR及高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）等方法鑒定結(jié)構(gòu)，分別為牛蒡苷元，油酸，棕櫚油酸，十四烷酸，14-二十八烯烴，β-谷甾醇，咖啡酸），咖啡酸乙酯,對羥基苯甲酸,反式對羥基肉桂酸，羅漢松脂素，牛蒡酚B，絡(luò)石苷元。其中化合物3， 4，5，7，8，9，10為首次從牛蒡子中分離得到，為牛蒡子的抗菌，抗炎和抗腫瘤作用機理研究提供參考依據(jù)[1]。

1 儀器與材料

Bruker AV-500型核磁共振光譜儀（TMS為內(nèi)標(biāo)），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀B-680A Rotavapor（瑞士Buchi公司），DL-2010低溫冷卻液循環(huán)（上海申生科技），SHZD(III)循環(huán)水式真空泵（鞏義市英峪予華儀器），EL104型梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司，HH-S6數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市醫(yī)療儀器廠）。

薄層層析硅膠（TLC），制備薄層色譜（PTLC，Varian 940-LC）和柱層析硅膠（200～300目）（青島海洋化工廠），Sephedex LH-20（瑞典Amersham Pharmacia Biotech AB公司），其他試劑均為分析純。

牛蒡子為野生牛蒡子，產(chǎn)地東北吉林（批號: 120301），經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院陳建偉教授鑒定為菊科植物牛蒡（Arctium lappa L.）的干燥成熟果實。

2 提取與分離

取粉碎過篩的牛蒡子藥材粉末11.2 kg，用石油醚對牛蒡子滲漉脫脂，脫脂后的牛蒡子藥材粉末用乙酸乙酯滲漉提取，分別回收石油醚和乙酸乙酯，得石油醚部位2kg和乙酸乙酯部位503g。乙酸乙酯部位浸膏析出結(jié)晶，為化合物1（20g）。

取石油醚部位300g，經(jīng)硅膠柱分離,石油醚-乙酸乙酯（100∶0～0∶100）梯度洗脫，得到5個部位（Fr.1～5）。其中Fr. 2經(jīng)硅膠柱分離,以石油醚-二氯甲烷梯度洗脫（100∶1～100∶10）,得化合物2（37.2 mg）和化合物3（91.9mg）。Fr. 3經(jīng)硅膠柱層析分離，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫（100∶2～100∶10），高效薄層制備色譜以二氯甲烷為展開劑,得化合物4（27.5mg）。Fr. 4經(jīng)硅膠柱層析分離，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，得化合物5（23.1 mg）。Fr. 5經(jīng)硅膠柱層析分離，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，得化合物6（75.7mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物2：白色油狀物，易溶于氯仿，甲醇，不溶于水。1H-NMR（CDCL3，500MHZ）譜中δ 5.34（2H，m）與13C-NMR（CDCL3，300MHZ）譜信號δ 129.7，130.0說明結(jié)構(gòu)中有一個烯鍵；13C-NMR δ 179.36說明結(jié)構(gòu)中有一羧基存在；1H-NMR譜中δ 2.3（2H，t，J=7.5HZ），δ 1.6（2H，m），δ 2.0（4H，m），δ 1.25～1.30（22H），δ 0.89（3H，m）信號，以及13C-NMR譜中δ 34.0，31.9，29.0～29.8，27.2，24.7，22.6，14.1信號，提示有CH3-（CH2）n- CH2-脂肪鏈存在。以上數(shù)據(jù)與文獻[2][3][4]對照基本一致，鑒定化合物2為油酸。

4 討論

化合物2，3，4，5，6屬于脂肪酸類成分，化合物7，8，9，10屬于酚酸類成分，化合物1，10，11，12，13屬于木脂素類成分。研究發(fā)現(xiàn)，木脂素類成分是牛蒡子主要成分，具有抗腫瘤，抗糖尿病腎病作用[5]；而脂肪酸和酚酸類成分具有抗菌，抗炎作用，同時，脂肪酸類成分影響前列腺素的生物合成，和主要成分牛蒡苷，牛蒡苷元協(xié)同發(fā)揮抗癌作用[6][7][8]。

5 結(jié)論

棕櫚油酸在不飽和脂肪酸中抗菌活性最強。因此，咖啡酸,咖啡酸乙酯,對羥基苯甲酸,反式對羥基肉桂酸和棕櫚酸的首次分離為研究牛蒡子的炮制工藝和飲片的質(zhì)量控制提供基礎(chǔ)，并為牛蒡子飲片的抗菌，抗炎以及抗腫瘤的作用機理及臨床合理用藥研究提供參考依據(jù)。