癌組織中EpCAM、CD44v6的表達(dá)與早期低危子宮內(nèi)膜腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系

陳金龍1，2，劉乃富1

(1山東省腫瘤醫(yī)院，濟(jì)南250117；2濟(jì)南大學(xué)·山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院)

摘要：目的探討癌組織中上皮細(xì)胞黏附分子(EpCAM)、CD44v6的表達(dá)與早期低危子宮內(nèi)膜腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系。方法病理檢查確診的早期低危子宮內(nèi)膜腺癌患者共118例，根據(jù)隨訪中是否發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移分為兩組：A組72例為無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者，B組46例為有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者；選取同期行診斷性刮宮或手術(shù)治療且術(shù)后病理檢查證實(shí)為正常子宮內(nèi)膜的患者30例作對(duì)照(C組)。取A、B兩組手術(shù)中切除的癌組織及C組手術(shù)中切除的正常子宮內(nèi)膜，采用免疫組化法檢測(cè)各種組織中的EpCAM、CD44v6，并進(jìn)行分析。結(jié)果A組EpCAM陽(yáng)性表達(dá)率為30.6%(22/72)、CD44v6陽(yáng)性表達(dá)率為15.3%(11/72)，B組EpCAM陽(yáng)性表達(dá)率為60.8%(28/46)、CD44v6陽(yáng)性表達(dá)率為39.1%(18/46)，C組EpCAM陽(yáng)性表達(dá)率為26.7%(8/30)、CD44v6陽(yáng)性表達(dá)率為6.7%(2/30)；A組與B組及B組與C組EpCAM、CD44v6陽(yáng)性表達(dá)率相比，P均<0.05；B組EpCAM陽(yáng)性表達(dá)者的中位生存時(shí)間為35個(gè)月，陰性表達(dá)者為43個(gè)月，兩者相比，P<0.05，B組CD44v6陽(yáng)性表達(dá)者的中位生存時(shí)間為38個(gè)月，陰性表達(dá)者為48個(gè)月，兩者相比，P均<0.05。結(jié)論 早期低危子宮內(nèi)膜腺癌患者癌組織中EpCAM、CD44v6陽(yáng)性表達(dá)者容易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，生存時(shí)間較短。

關(guān)鍵詞：子宮內(nèi)膜癌；子宮內(nèi)膜腺癌；低危子宮內(nèi)膜腺癌；黏附分子；上皮細(xì)胞黏附分子；跨膜糖蛋白；腫瘤轉(zhuǎn)移；疾病預(yù)后

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.43.024

中圖分類號(hào)：R737.33文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

收稿日期：(2015-08-14)

通信作者：劉乃富

早期低危子宮內(nèi)膜癌預(yù)后較好，一般術(shù)后無(wú)需輔助治療，但仍有部分患者術(shù)后發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差。尋找預(yù)測(cè)早期低危子宮內(nèi)膜癌未來(lái)發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移可能性的生物學(xué)指標(biāo)成為近年來(lái)研究的熱點(diǎn)。上皮細(xì)胞黏附分子(EpCAM)和CD44v6在乳腺癌、結(jié)直腸癌及甲狀腺癌等腺癌組織中的表達(dá)變化及臨床意義已有文獻(xiàn)報(bào)道[1～3]。本研究采用免疫組化方法對(duì)早期低危子宮內(nèi)癌患者癌組織中的EpCAM、CD44v6進(jìn)行了檢測(cè)，探討其表達(dá)變化與早期低危子宮內(nèi)膜腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系。

1資料與方法

1.1臨床資料2000年1月～2010年12月于山東省腫瘤醫(yī)院接受全面分期手術(shù)治療的早期低危子宮內(nèi)膜腺癌患者共118例，按照隨訪中(隨訪至2014年12月，隨訪中的相關(guān)檢查包括婦科檢查、超聲、胸部X線片、陰道殘端細(xì)胞學(xué)檢查及血清CA125檢測(cè)等)是否發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者FIGO分期均為Ⅳ期)分為兩組：A組72例為無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者，B組46例為有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①初次治療；②根據(jù)FIGO制定的子宮內(nèi)膜癌病理分期標(biāo)準(zhǔn)分為ⅠA期；③年齡≤60歲；④病理類型為子宮內(nèi)膜樣腺癌，高分化、高中分化及中分化；⑤無(wú)脈管癌栓。排除標(biāo)準(zhǔn)：①未行全面分期手術(shù)治療；②術(shù)前行抗腫瘤治療(化療、放療、激素治療等)；③合并其他惡性腫瘤；④臨床資料不完整。選取同期行診斷性刮宮或手術(shù)治療且術(shù)后病理檢查證實(shí)為正常子宮內(nèi)膜的患者30例作對(duì)照(C組)。

1.2EpCAM、CD44v6檢測(cè)方法采用免疫組化SP法。對(duì)118例早期低危子宮內(nèi)膜腺癌患者的癌組織及C組的正常子宮內(nèi)膜組織進(jìn)行石蠟包塊，4 μm厚連續(xù)切片，每例切4張，防脫片處理后分別進(jìn)行HE染色和免疫組化染色。HE染色后由兩名病理醫(yī)師查看進(jìn)一步確定診斷。免疫組化SP染色方法參照試劑盒相關(guān)說(shuō)明書進(jìn)行,主要操作步驟如下：將組織切片在二甲苯溶液、乙醇中脫蠟，蒸餾水洗凈；0.3%過(guò)氧化氫溶液室溫孵育封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，PBS洗凈；抗原修復(fù)液(枸椽酸緩沖液)中修復(fù)抗原，蒸餾水、PBS洗凈；滴加胎牛血清室溫孵育10 min，傾去血清，勿洗；滴加稀釋的一抗，置濕盒中4 ℃冰箱過(guò)夜(約12 h)，PBS沖洗；滴加二抗，恒溫培養(yǎng)箱中孵育30 min，PBS沖洗；滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，37 ℃孵育，PBS沖洗；DAB顯色，蘇木素復(fù)染，流水沖洗，脫水，透明，封片。在高倍顯微鏡下觀察組織染色情況并進(jìn)行照相。用PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照。EpCAM定位于細(xì)胞膜，呈棕黃色顆粒；CD44v6定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，呈棕黃色；細(xì)胞無(wú)著色或與背景顏色一致為陰性。免疫組化染色結(jié)果判定參照Form-witz 評(píng)分方法[2]：400倍鏡下連續(xù)觀察5個(gè)高倍視野，以陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占比例小于<20%為陰性、≥20%為陽(yáng)性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn)、Fisher確切概率法，生存分析用Kaplan-Meier生存分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組EpCAM表達(dá)比較EpCAM的陽(yáng)性表達(dá)率A組為30.6%(22/72)、B組為60.8%(28/46)、C組為26.7%(8/30)；A、B組相比，P<均0.05；A、C組相比，P>均0.05；B、C組相比，P<均0.05。

2.2各組CD44v6表達(dá)比較CD44v6的陽(yáng)性表達(dá)率A組為15.3%(11/72)、B組為39.1%(18/46)、C組為6.7%(2/30)；A、B組相比，P<均0.05；A、C組相比，P>均0.05；B、C組相比，P<均0.05。

2.3B組EpCAM與CD44v6表達(dá)的相關(guān)性在B組中，EpCAM與CD44v6同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)者13例，EpCAM陽(yáng)性表達(dá)、CD44v6陰性表達(dá)者15例，EpCAM陰性表達(dá)、CD44v6陽(yáng)性表達(dá)者5例，EpCAM與CD44v6同時(shí)陰性表達(dá)者13例；EpCAM與CD44v6的表達(dá)有關(guān)(χ2=4.05，P<0.05)。

2.4EpCAM 表達(dá)與早期低危子宮內(nèi)膜腺癌患者術(shù)后發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的關(guān)系B組EpCAM陽(yáng)性表達(dá)者的術(shù)后中位生存時(shí)間為35個(gè)月、陰性表達(dá)者的中位生存時(shí)間為43個(gè)月，兩者相比，P<0.05。B組CD44v6陽(yáng)性表達(dá)者的術(shù)后中位生存時(shí)間為38個(gè)月、陰性表達(dá)者的中位生存時(shí)間為40個(gè)月，兩者相比，P<0.05。

3討論

EpCAM是一種單次跨膜糖蛋白，由位于2p21染色體的腫瘤相關(guān)鈣信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)基因編碼，屬于黏附分子家族的單次跨膜Ⅰ型糖蛋白，幾乎表達(dá)于所有的腺癌組織中，多數(shù)定位在細(xì)胞與細(xì)胞之間的緊密連接處，其功能主要是參與調(diào)節(jié)細(xì)胞間黏附，介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及細(xì)胞遷移、增殖、分化等[4]。Kurtz等[5，6]研究發(fā)現(xiàn)，EpCAM 可以通過(guò)參與β-連環(huán)蛋白依賴的Wnt 級(jí)聯(lián)反應(yīng)激活C-myc 等原癌基因的表達(dá)而具有致癌作用，同時(shí)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)EpCAM 蛋白的降解可激活EpCAM作為有絲分裂信號(hào)傳導(dǎo)器的功能等。Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路是一種多層次、多環(huán)節(jié)的復(fù)雜信號(hào)通路，該通路發(fā)生障礙與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)[7]。Du等[8]的研究發(fā)現(xiàn)，EpCAM在胃癌轉(zhuǎn)移病灶中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于原發(fā)灶，而通過(guò)siRNA下調(diào) EpCAM的表達(dá)可以抑制胃癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力，EpCAM可能在癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移過(guò)程中起到了促進(jìn)作用。Kunavisarut等[9]研究發(fā)現(xiàn)，EpCAM多數(shù)位于細(xì)胞與細(xì)胞之間的緊密連接處，提高了癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移性。本研究發(fā)現(xiàn)，C組正常子宮內(nèi)膜組織中EpCAM陽(yáng)性表達(dá)率僅為26.7%(8/30)，遠(yuǎn)低于A、B組。B組即發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的早期低危子宮內(nèi)膜腺癌組織中EpCAM 的陽(yáng)性表達(dá)率為60.8%(28/46)，明顯高于A組即無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的早期低危子宮內(nèi)膜腺癌組的陽(yáng)性表達(dá)率30.6%(22/72)，且其染色強(qiáng)度亦明顯高于A組。提示EpCAM可能是早期低危子宮內(nèi)膜癌發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)分子之一。

CD44家族作為一類細(xì)胞表面跨膜糖蛋白黏附分子，具有高度異質(zhì)性，其功能是通過(guò)與透明質(zhì)酸酶或膠原結(jié)合，在細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與基質(zhì)之間的特異性黏附過(guò)程中發(fā)揮重要作用。CD44的表達(dá)由Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路調(diào)控，在β-連環(huán)蛋白/Tcf-4信號(hào)傳導(dǎo)通路控制下參與上皮細(xì)胞的增殖與更新[10]。根據(jù)CD44基因表達(dá)過(guò)程中剪切方式的不同, 可將其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物分為標(biāo)準(zhǔn)型CD44s和變異型CD44v。CD44v有多個(gè)亞型(v1～v6)，其中CD44v6表現(xiàn)出與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移的密切相關(guān)關(guān)系，其主要在上皮源性的腫瘤細(xì)胞中表達(dá),可通過(guò)影響腫瘤細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和分布以及運(yùn)動(dòng)能力而促使細(xì)胞間黏附作用下降[11]。研究[12]發(fā)現(xiàn)，CD44v6的異常表達(dá)與許多人類惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移以及預(yù)后密切相關(guān)，甚至認(rèn)為CD44v6可作為腫瘤獨(dú)立的預(yù)后判斷指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，C組正常子宮內(nèi)膜組織中CD44v6陽(yáng)性表達(dá)率為6.7%，遠(yuǎn)低于A、B組。B組即發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的子宮內(nèi)膜癌組織中CD44v6的陽(yáng)性表達(dá)率為39.1%，明顯高于A組，染色強(qiáng)度亦明顯高于A組。提示CD44v6在早期子宮內(nèi)膜癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了作用。

EpCAM及CD44v6均屬于細(xì)胞黏附素家族，介導(dǎo)細(xì)胞間的相互黏附作用，促進(jìn)癌細(xì)胞向基質(zhì)侵襲，從而影響癌細(xì)胞的遷移和轉(zhuǎn)移。目前尚未有證據(jù)表明二者之間在作用機(jī)制上存在明確的相關(guān)關(guān)系。但CD44家族中相關(guān)亞型CD44v4～v7與EpCAM直接相互作用，形成CD44v4～v7-EpCAM復(fù)合物，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[13]。本研究發(fā)現(xiàn)，EpCAM及CD44v6在早期低危子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)呈正相關(guān)，兩指標(biāo)陽(yáng)性表達(dá)的患者發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的幾率較大，提示EpCAM可能與CD44v6之間存在相互作用，共同促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移，但其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步探究。

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