陳軍，廖小莉，覃思繁，林思彤(廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，南寧530021)

彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤組織中MGMT、hMLH1蛋白表達(dá)變化及其臨床意義

陳軍，廖小莉，覃思繁，林思彤
(廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，南寧530021)

摘要:目的觀察彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)組織中O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(MGMT)和人MutS同系物1(hMLH1)表達(dá)變化，并探討其與DLBCL臨床病理參數(shù)和化療療效的關(guān)系。方法采用免疫組織化學(xué)方法檢測100例初治DLBCL患者腫瘤組織中的MGMT和hMLH1，分析兩者表達(dá)的相關(guān)性及其與DLBC臨床病理參數(shù)、化療療效的關(guān)系。結(jié)果本組患者腫瘤組織MGMT表達(dá)陽性42例，陰性58例，hMLH1表達(dá)陽性54例，陰性46例。DLBCL患者腫瘤組織中MGMT與hMLH1表達(dá)無顯著相關(guān)性。MGMT表達(dá)與DLBCL臨床分期、IPI評分、病理亞型有關(guān)(P均＜0.05)，與患者性別、年齡、血清LDH、全身癥狀、原發(fā)部位無關(guān); hMLH1表達(dá)與DLBCL患者IPI評分、病理亞型有關(guān)(P均＜0.05)，與臨床分期、性別、年齡、血清LDH、全身癥狀、原發(fā)部位無關(guān)。MGMT陽性者CR率和化療總有效率分別為28.6%、52.4%，均低于MGMT陰性者的55.2%和75.9% (P均＜0.05)。hMLH1陽性者CR率和化療總有效率分別為75.9%，均高于hMLH1陰性者的28.3%和54.4% (P均＜0.05)。結(jié)論

DLBCL組織中MGMT和hMLH1表達(dá)率分別為42%和54%，MGMT表達(dá)與臨床分期、IPI評分、病理亞型有關(guān)，hMLH1表達(dá)與IPI評分、病理亞型有關(guān)，MGMT表達(dá)陽性和hMLH1表達(dá)表達(dá)陰性者化療效果較好。

關(guān)鍵詞:彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤; O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶;人MutS同系物1

彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤中最常見的一種類型，其化療效果和預(yù)后與腫瘤耐藥有密切關(guān)系［1］。烷化劑如環(huán)磷酰胺、氮芥、甲基芐肼等，是DLBCL的一線化療藥物。O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(MGMT)是機(jī)體修復(fù)烷基化合物損傷的關(guān)鍵酶，對抗烷化劑的DNA損傷，在腫瘤發(fā)生、復(fù)發(fā)進(jìn)展及化療耐藥中起著重要作用［2］。人MutS同系物1(hMLH1)是細(xì)胞DNA錯配修復(fù)系統(tǒng)中一種重要的錯配修復(fù)基因，其表達(dá)的缺失會導(dǎo)致細(xì)胞錯配修復(fù)功能缺陷，表現(xiàn)為復(fù)制錯誤等，與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)［3］。MMR功能缺陷與腫瘤耐藥有關(guān)。2012 年1月～2014年12月，我們分析了DLBCL患者腫瘤組織中MGMT與hMLH1表達(dá)與DLBCL臨床病理參數(shù)及化療療效的關(guān)系。現(xiàn)報告如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇2009年1月～2011年12月就診，經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診的初治DLBCL患者100例為研究對象，年齡17～75(42.3±13.2)歲。臨床分期采用Ann Arbor分期法，Ⅰ期10例、Ⅱ期23例、Ⅲ期49例、Ⅳ期18例。淋巴瘤國際預(yù)后指數(shù)(IPI)評分參照《NCCN淋巴瘤指南》2013年第2版，0～2分40例，3～5分60例;病理亞型參照第4版《WHO造血與淋巴系統(tǒng)腫瘤DLBCL免疫表型分類》，GCB型46例，非GCB型54例。血清乳酸脫氫酶(LDH)正常55例、升高45例。有全身癥狀52例，無全身癥狀48例。原發(fā)部位為淋巴結(jié)內(nèi)64例、淋巴結(jié)外36例。其腫瘤組織經(jīng)10%中性甲醛固定后常規(guī)石蠟包埋待測。

1.2MGMT、hMLH1表達(dá)檢測采用免疫組化En-Vision兩步法。按試劑盒說明書操作。取已知陽性切片作陽性對照，用PBS代替一抗為陰性對照。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn): MGMT和hMLH1表達(dá)產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞核和(或)細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。根據(jù)染色程度和免疫陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞總數(shù)百分比綜合計分。按腫瘤細(xì)胞染色強(qiáng)度計分: 0分細(xì)胞無著色，1分呈淡黃色，2分呈棕黃色，3分呈棕褐色(染色深淺需與背景著色相對比) ;按切片中陽性腫瘤細(xì)胞數(shù)所占百分比計分: 0分為陰性，1分為陽性癌細(xì)胞≤10%; 2分為11%～50%，3分為50%～75%，4分為75%以上。染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞百分比的乘積＞2分為陽性，否則為陰性。

1.3化療及療效判定100例患者均行CHOP或類CHOP方案聯(lián)合化療，化療4周期或以上。療效評定參照《NCCN淋巴瘤指南》2013年第2版，分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、病情穩(wěn)定(SD)、病情進(jìn)展(PD)。以CR和PR計算總有效率。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料采用χ2檢驗及Spearman相關(guān)性分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1腫瘤組織MGMT、hMLH1表達(dá)及其相關(guān)性本組患者腫瘤組織MGMT表達(dá)陽性42例(42%)，陰性58例(58%)。hMLH1表達(dá)陽性54例(54%)，陰性46例(46%) MGMT、hMLH1均陽性24例，均陰性28例，MGMT陽性hMLH1陰性18例，MGMT陰性hMLH1陽性30例。MGMT、hMLH1表達(dá)無顯著相關(guān)性(γ=0.054，P=0.596)。

2.2MGMT、hMLH1表達(dá)與DLBCL臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表1。由表1可見，MGMT表達(dá)與DLBCL臨床分期、IPI評分、病理亞型有關(guān)(P均＜0.05)，與患者性別、年齡、血清LDH、全身癥狀及腫瘤原發(fā)部位無關(guān); hMLH1表達(dá)與DLBCL患者IPI評分、腫瘤病理亞型有關(guān)(P均＜0.05)，與患者性別、年齡、血清LDH、全身癥狀及腫瘤臨床分期、原發(fā)部位無關(guān)。

2.3MGMT、hMLH1表達(dá)與DLBCL化療效果的關(guān)系MGMT陽性者CR12例、PR10例、SD12例、PD8例，化療總有效率52.4%，MGMT陰性者分別為32、12、7、7例和75.9%，MGMT陽性者CR例數(shù)和化療總有效率均低于MGMT陰性者(P均＜0.05)。hMLH1陽性者CR30例、PR11例、SD8例、PD5例，化療總有效率75.9%，hMLH1陰性者分別為13、12、7、4例和55.4%，hMLH1陽性者CR例數(shù)和化療總有效率均高于hMLH1陰性者(P均＜0.05)。

3　討論

DLBCL是一種形態(tài)學(xué)，免疫學(xué)表型、遺傳學(xué)和臨床表現(xiàn)都具有明顯異質(zhì)性的B細(xì)胞性淋巴瘤。其侵襲力較高，化療只能使約40%的患者達(dá)到持續(xù)緩解，仍有較多DLBCL患者療效不佳［4］。如何識別預(yù)后不良的高?；颊撸荄LBCL研究的熱點。

MGMT基因的表達(dá)產(chǎn)物是一種DNA修復(fù)酶，在正常細(xì)胞的基因修復(fù)中有著重要作用［5］。研究發(fā)現(xiàn)在大腸癌組織MGMT蛋白表達(dá)顯著高于癌旁組織［6］。在乳腺癌的研究中也發(fā)現(xiàn)，MGMT基因的表達(dá)與乳腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期較晚相關(guān)，生存曲線顯示MGMT基因無表達(dá)或低表達(dá)組患者的5年生存率明顯高于基因中表達(dá)或高表達(dá)者［7］。本研究結(jié)果顯示MGMT的表達(dá)與DLBCL臨床分期、IPI相關(guān)，與上述研究結(jié)果相符。分析原因，可能腫瘤細(xì)胞處于高增殖狀態(tài)時，細(xì)胞基因組穩(wěn)定性減弱，為維護(hù)細(xì)胞基因組的穩(wěn)定性及遺傳保真性，相應(yīng)的DNA修復(fù)基因蛋白表達(dá)增多，與腫瘤細(xì)胞的活性有關(guān)。烷化劑主要是造成腫瘤細(xì)胞內(nèi)DNA烷基化損傷，其中以O(shè)6-甲基鳥嘌呤對腫瘤細(xì)胞威脅最大。MGMT是一種重要的DNA損傷修復(fù)酶，可將烷化劑形成的O6-甲基鳥嘌呤上的甲基轉(zhuǎn)移到自身的活性半胱氨酸殘基上，能有效修復(fù)烷化劑損傷，其高表達(dá)則可能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對烷化劑耐藥［8］。本研究結(jié)果顯示，MGMT表達(dá)陽性者的CR率及總有效率顯著低于陰性者，提示MGMT蛋白表達(dá)是導(dǎo)致DLBCL化療耐藥的一個重要因素。

hMLH1是DNA錯配修復(fù)系統(tǒng)中的重要組成部分，其功能缺陷，表現(xiàn)為復(fù)制錯誤或微衛(wèi)星不穩(wěn)定，導(dǎo)致一系列涉及細(xì)胞生長、分化、凋亡及腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力等的相關(guān)靶基因改變，從而引起腫瘤的發(fā)生發(fā)展或復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)在胃癌中hMLH1減少或喪失提示腫瘤患者預(yù)后不良［9］。文獻(xiàn)報道hMLH1還與其他多種腫瘤發(fā)生有關(guān)，如膀胱癌、乳腺癌、肺癌、腸癌、卵巢癌等。本研究結(jié)果顯示，DLBCL組織hMLH1表達(dá)與IPI相關(guān)。DNA錯配修復(fù)系統(tǒng)還參與損傷所誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡及基因缺陷引起的微衛(wèi)星不穩(wěn)定，使腫瘤細(xì)胞對多種化療藥物耐藥，如烷化劑、鉑類等，并對損傷所誘導(dǎo)的凋亡產(chǎn)生抗性［10］。本研究結(jié)果顯示，hMLH1表達(dá)陽性者的CR率及總有效率率顯著高于陰性者，提示hMLH1蛋白表達(dá)在DLBCL化療中是一個敏感的協(xié)同因素。

Hans等［11］研究認(rèn)為DLBCL中GCB型的預(yù)后顯著優(yōu)于非GCB型，非GCB型可能存在著較GCB型更復(fù)雜的耐藥機(jī)制。本研究結(jié)果顯示，MGMT表達(dá)陽性和hMLH1表達(dá)陰性病例主要集中在非GCB組，提示MGMT表達(dá)陽性和hMLH1表達(dá)降低在非GCB型DLBCL的耐藥機(jī)制中有著重要作用。

本組DLBCL患者腫瘤組織MGMT與hMLH1蛋白表達(dá)無顯著相關(guān)性，提示在DLBCL中這兩種蛋白修復(fù)DNA損傷的途徑是相對獨立的。

參考文獻(xiàn):

［1］Pasqualucci L，Neumeister P，Goossens T，et al.Hypermutation of multiple proto-oncogenes in B-cell diffuse large-cell lymphomas ［J］.Nature，2001，412 (6844) : 341-346.

［2］Kaina B，Christmann M，Naumann S，er al.MGMT: key node in the battle against genotoxicity，carcinogenicity and apoptosis induced by alkylating agents［J］.DNA RePair(Amst)，2007，6 (8) : 1079-1099.

［3］Hansen WK，Kelly MR.Review of mammalian DNA repair and translational implications［J］.J Pharmacol Exp Ther，2000，295 (1) : 1-9.

［4］Alizadeh AA，Eisen MB，Davis RE，et al.Distinct types of diffuse large B-cell lymphoma identified by gene expression profiling［J］.Nature，2000，403(6769) : 503-511

［5］Riemenschneider MJ，Heqi ME，Reifenberger G.MGMT promoter methylation in malignant gliomas［J］.Target Oncol，2010，5(3) : 161-165.

［6］Cordeiro AT，Silva CM，Bartchewsk JW，et al.Evaluation of the expression of the MGMT gene in normal and neoplastic tissue of patients with colorectal cancer［J］.Rev Col Bras Cir，2012，39(1) :48-53.

［7］謝美強(qiáng)，莊粵蕾，張志輝.MGMT基因表達(dá)與乳腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2013，34(15) : 2361-2363.

［8］呂申.細(xì)胞DNA修復(fù)系統(tǒng)與腫瘤發(fā)生及化療耐藥性［J］.大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2012，34(6) : 519-524.

［9］Uehara H，Miyamoto M，Kato K，et al.Effects of dietary intake and genetic factors on hypemethylation of the hMLH1 gene promoter in gastric cancer［J］.World J Gastroenterol，2005，11 (25) : 3834-3841.

［10］Miyashita K，F(xiàn)ujii K，Yamada，et al.Frequent microsatellite in stability in non-Hodgkin lymphoma irresponsive to chemotherapy ［J］.Leuk Res，2008，32(8) : 1183-1195.

［11］Hans CP，Weisenburger DD，Greiner TC，et al.Confirmation of the molecular classification of diffuse large B cell lymphoma by immunohistochemistry using a tissue microarray［J］.Blood，2004，103(1) : 275-282.

Expression changes and clinical significance of MGMT and hMLH1 in diffuse large B-cell lymphoma

CHEN Jun，LIAO Xiao-li，QIN Si-fan，LIN Si-tong
(Cancer Hospital Affiliated to Guangxi Medical University，Nanning 530021，China)

Abstract:Objective To observe the expression changes of O6-methylguanine DNA methyltransferase (MGMT) and human MutL homolog 1 (hMLH1) in the diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) tissues and to investigate their correlations with DLBCL clinicopathological features and chemotherapeutic effect.Methods Immunohistochemisty was employed to determine the expression of MGMT and hMLH1 in the tumor tissues of 100 cases of newly diagnosed patients with DLBCL，and their correlations with DLBCL clinical parameters and chemotherapeutic effect were analyzed.Results In the tumor tissues，the positive expression of MGMT and hMLH1 was found in 42 and 54 cases，and the negative expression of MGMT and hMLH1 was found in 58 and 46 cases，respectively.In the tumor tissues of DLBCL patients，MGMT was not correlated with and hMLH1.The expression of MGMT was significantly related with the clinical stage，international prognostic index (IPI) score and different immunohistochemical subgroups of DLBCL (all P＜0.05)，and was not related with sex，age，serum LDH，general symptoms and primary sites.The expression of hMLH1 was significantly related with IPI score and immunohistochemical subgroups of DLBCL (all P＜0.05) ; and was note related with clinical stage，sex，age，serum LDH，general symptoms and primary sites.The complete remission (CR) rate (28.6%) and total effective rate of chemotherapy (52.4%) in the positive MGMT group were lower than those of the negative group (55.2%，75.9%) (all P＜0.05).The CR rate (55.6%) and total effective rate of chemotherapy (75.9%) in the positive hMLH1 group were lower than those of the negative group (28.3%，54.4%) (all P＜0.05).Conclusions The expression rates of MGMT and hMLH1 are 42% and 54%，respectively in DLBCL tissues.The expression of MGMT is significantly related with the clinical stage，IPI score and different immunohistochemical subgroups of DLBCL; and the expression of hMLH1 is significantly related with IPI score and different immunohistochemical subgroups of DLBCL.The chemotherapeutic effect of pa-book=25,ebook=487tients with MGMT negative and hMLH1 positive expression is better than that of patients with the opposite expression.

Key words:diffuse large B-cell lymphoma; O6-methylguanine DNA methyltransferase; human MutL homolog 1

(收稿日期:2015-04-17)

作者簡介:第一陳軍(1975-)，男，碩士研究生，副主任醫(yī)師，研究方向為淋巴造血系統(tǒng)腫瘤病理診斷與臨床研究。E-Mail: chenjun2826@163.com

文章編號:1002-266X(2015)22-0024-03

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

中圖分類號:R733.1

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.22.007