李云飛，龍曉東，李永忠(德陽(yáng)市人民醫(yī)院，四川德陽(yáng)618000)

病理性瘢痕組織中VEGF、CD105表達(dá)變化及意義

李云飛，龍曉東，李永忠
(德陽(yáng)市人民醫(yī)院，四川德陽(yáng)618000)

摘要:目的觀察病理性瘢痕組織中VEGF、CD(105)的表達(dá)變化，探討其臨床意義。方法采用免疫組化法檢測(cè)47例增生性瘢痕患者(增生性瘢痕組)、22例瘢痕疙瘩患者(瘢痕疙瘩組)瘢痕組織及16例接受整形美容手術(shù)者(對(duì)照組)正常皮膚組織中的VEGF、CD(105)表達(dá)情況及微血管密度(MVD)，并比較三組間的差異。結(jié)果瘢痕疙瘩組、增生性瘢痕組標(biāo)本中VEGF、CD(105)、MVD均高于對(duì)照組(P均＜0.05)，瘢痕疙瘩組標(biāo)本中VEGF、CD(105)、MVD與增生性瘢痕組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論病理性瘢痕組織中VEGF、CD(105)呈現(xiàn)高表達(dá)，提示異常血管新生參與了病理性瘢痕的發(fā)生發(fā)展過(guò)程; VEGF可能是抗血管新生治療病理性瘢痕增生的有效靶點(diǎn)。

關(guān)鍵詞:病理性瘢痕; CD(105);血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

病理性瘢痕包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩，是皮膚損傷后組織纖維異常增生，肉芽組織過(guò)度修復(fù)的結(jié)果。損傷修復(fù)所有階段均伴隨著血管及其生物活性物質(zhì)的參與，因此血管的生成與重建是創(chuàng)面愈合的關(guān)鍵［1］。CD105作為一種良好的血管標(biāo)記物，在新生血管中有很強(qiáng)的表達(dá)而在成熟血管中低表達(dá)或不表達(dá)，通過(guò)CD105計(jì)算出的微血管密度(MVD)能較為準(zhǔn)確的反映組織中的血管新生狀況［2］。VEGF是目前所知最強(qiáng)的促血管生成細(xì)胞生長(zhǎng)因子，在血管形成、促進(jìn)創(chuàng)傷愈合、組織修復(fù)及再生等方面起著十分重要的作用［3］。2014年1～3月，我們檢測(cè)并比較了增生性瘢痕、瘢痕疙瘩和正常皮膚組織中CD105、VEGF的表達(dá)情況及MVD，探討血管新生在病理性瘢痕發(fā)生、發(fā)展中的作用?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇2008～2013年門診收治的增生性瘢痕患者47例、瘢痕疙瘩22例，分別為增生性瘢痕組和瘢痕疙瘩組。均為單發(fā)。增生性瘢痕組男26例、女21例，年齡8～64(34±12.5)歲。瘢痕疙瘩組男14例、女8例，年齡12～58(24.5±14.5)歲。另取16例接受整形美容手術(shù)者為對(duì)照組，其中男4例、女12例，年齡18～43(25±10.5)歲。均取其手術(shù)切除瘢痕組織(對(duì)照組為正常皮膚組織)進(jìn)行檢測(cè)。各組標(biāo)本經(jīng)甲醛固定、脫水、透明、包埋后4 μm連續(xù)切片5張備用。

1.2VEGF、CD105表達(dá)檢測(cè)采用免疫組化SP法。按CD105、VEGF檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書步驟操作。用PBS代替一抗作為空白對(duì)照。VEGF陽(yáng)性染色呈棕黃色，表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。CD105主要表達(dá)于微血管內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)中，被染成棕黃色或棕褐色顆粒。將染色后的切片用Image Pro Plus 6.0行定量分析，分別挑選高倍鏡視野下的表皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞黃染區(qū)域作為測(cè)量區(qū)域(AOI)，測(cè)得切片上DAB顯色為棕黃色陽(yáng)性區(qū)域的光密度值，每張切片分別隨機(jī)選取10個(gè)視野，取其均值即平均光密度值(MOD)表示VEGF、CD105表達(dá)強(qiáng)度［4］。

1.3MVD測(cè)算在組織切片中，呈現(xiàn)淡黃棕黃或黃褐色單個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇均作為1個(gè)血管計(jì)數(shù)。CD105標(biāo)記的MVD計(jì)數(shù)方法參照Weidner方法［5］，先在低倍鏡下(×100)尋找富含血管的“熱點(diǎn)”區(qū)域然后在高倍鏡下(×400)進(jìn)行血管計(jì)數(shù)，每張切片選取5個(gè)不同的高倍視野計(jì)數(shù)，取其均值作為單位面積中血管數(shù)目的相對(duì)值。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量數(shù)據(jù)用珋x±s表示，組間比較采用方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

瘢痕疙瘩組、增生性瘢痕組、對(duì)照組標(biāo)本中VEGF、CD105、MVD表達(dá)見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，瘢痕疙瘩組、增生性瘢痕組標(biāo)本中VEGF、CD105、MVD均高于對(duì)照組(P均＜0.05)，瘢痕疙瘩組標(biāo)本中VEGF、CD105、MVD與增生性瘢痕組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1　瘢痕疙瘩組、增生性瘢痕組、對(duì)照組VEGF、CD105、MVD比較(±s)

注:與對(duì)照組相比，*P＜0.05。

組別　n　VEGF　CD105　MVD(條/HP)瘢痕疙瘩組　47　0.50±0.06*　0.48±0.08*　110.75±5.08*增生性瘢痕組　22　0.48±0.08*　0.46±0.08*　91.67±4.83*對(duì)照組16　0.19±0.09　0.17±0.09　16.78±4.64

3　討論

創(chuàng)傷后組織纖維異常增生，肉芽組織過(guò)度修復(fù)導(dǎo)致病理性瘢痕。這一直是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)。雖然目前對(duì)于病理性瘢痕形成的分子生物學(xué)機(jī)制尚不完全清楚，但在導(dǎo)致其發(fā)生的諸多因素中，血管因素越來(lái)越受到人們的關(guān)注。大量研究顯示，局部微血管的異常增生是造成瘢痕組織增生形成的重要因素［6，7］。

鑒于CD105在新生血管中有很強(qiáng)的表達(dá)而在成熟血管中低表達(dá)或不表達(dá)，通過(guò)CD105標(biāo)記計(jì)算出的MVD能較為準(zhǔn)確地反映組織中的新生血管的情況。本研究結(jié)果顯示，增生性瘢痕和瘢痕疙瘩組織中MVD明顯高于正常皮膚組織，血管新生現(xiàn)象明顯。相關(guān)研究也證實(shí)瘢痕增生的程度同微血管流量相關(guān)［8］，血液循環(huán)豐富的的部位發(fā)生病理性瘢痕的概率較循環(huán)相對(duì)較差的部位增高。瘢痕手術(shù)時(shí)，處于增生期的創(chuàng)面出血明顯多于成熟期瘢痕。這些均提示局部豐富的微血管同瘢痕組織增生存在著密切的關(guān)系［9］。針對(duì)新生血管進(jìn)行抑制可能成為治療瘢痕組織異常增生的一種新途徑。

VEGF是目前已知最強(qiáng)的促血管生成細(xì)胞生長(zhǎng)因子，在血管形成、促進(jìn)創(chuàng)傷愈合、組織修復(fù)及再生等方面起著十分重要的作用。其生物學(xué)功能包括促進(jìn)細(xì)胞增殖、增加血管通透性、促進(jìn)血管支撐物的形成等［10～12］。本研究結(jié)果顯示，病理性瘢痕組織中VEGF表達(dá)明顯高于正常組織，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)筆者認(rèn)為其促進(jìn)瘢痕生成的機(jī)制包括以下幾個(gè)方面:①VEGF可以促進(jìn)炎性細(xì)胞的聚集，刺激炎性介質(zhì)的釋放，提高血管通透性，加重炎性反應(yīng)而導(dǎo)致成纖維細(xì)胞增殖及分泌大量膠原，促進(jìn)病理性瘢痕形成［13］。②成纖維細(xì)胞增殖及分泌大量膠原需要消耗大量的氧氣及營(yíng)養(yǎng)支持，新生血管可以運(yùn)輸氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)［14］。③VEGF不僅可影響血管內(nèi)皮細(xì)胞增生同時(shí)具備促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖的作用［15］。

總之，瘢痕形成是極其復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程，影響的因素眾多。局部微血管的異常增生在其中占有重要作用，VEGF作為創(chuàng)面愈合中微血管生成的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，不僅能促進(jìn)新生血管形成，同時(shí)作為血管內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的生存因子，對(duì)于病理性瘢痕的產(chǎn)生有很強(qiáng)的促進(jìn)作用，因此以VEGF及其受體作為靶點(diǎn)進(jìn)一步深入研究將為病理性瘢痕的診斷及治療提供更為理想的手段。

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(收稿日期:2015-03-29)

文章編號(hào):1002-266X(2015) 22-0067-02

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B

中圖分類號(hào):R619.6

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.22.027