趙春娟，高文惠（河北科技大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，石家莊　050000）

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飼料及畜產(chǎn)品中激素殘留檢測(cè)方法研究進(jìn)展

趙春娟，高文惠*
（河北科技大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，石家莊050000）

摘要：隨著養(yǎng)殖業(yè)與畜牧業(yè)的快速發(fā)展，各種激素、飼料添加劑被廣泛使用，而飼料及畜產(chǎn)品中激素殘留會(huì)對(duì)環(huán)境和人體健康產(chǎn)生影響。因此，對(duì)飼料及畜產(chǎn)品中激素殘留檢測(cè)方法的研究尤為重要。文章綜述了飼料及畜產(chǎn)品中激素殘留檢測(cè)技術(shù)。

關(guān)鍵詞：飼料；畜產(chǎn)品；激素殘留；檢測(cè)方法

近幾年，飼料及畜產(chǎn)品中激素殘留污染問(wèn)題引起世界上的廣泛關(guān)注。在動(dòng)物飼養(yǎng)及其飼料加工過(guò)程中濫用激素，最終導(dǎo)致畜產(chǎn)品被激素殘留污染[1]。因此，必須要加強(qiáng)對(duì)飼料中違禁類激素的檢測(cè)，從源頭上控制激素殘留。研究表明，在一定的飼養(yǎng)條件下，一些激素類藥物在動(dòng)物喂養(yǎng)期間可以引起蛋白質(zhì)沉淀，提高飼料轉(zhuǎn)化利用率，加快動(dòng)物增重速度，取得更顯著的經(jīng)濟(jì)效益。但殘留于畜產(chǎn)品中的激素類藥物通過(guò)食物鏈進(jìn)入人體，導(dǎo)致人體激素中毒，甚至一些殘留激素存在致癌的潛在危害，嚴(yán)重威脅消費(fèi)者的身體健康[2-3]。我國(guó)農(nóng)業(yè)部已于2002年發(fā)布176號(hào)公告，明確規(guī)定禁止在飼料中添加己烯雌酚、雌二醇等雌性激素，炔諾醇、左炔諾孕酮、炔諾酮等孕激素，苯丙酸諾龍等雄性激素以及蛋白同化激素。但受經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使，飼料中違規(guī)添加激素的事件仍時(shí)有出現(xiàn)，因此，檢測(cè)飼料及畜產(chǎn)品中激素等添加劑具有重要意義。

常見(jiàn)的激素類物質(zhì)主要包括甾體激素和非甾體類激素。飼料及畜產(chǎn)品中的激素主要包括β-興奮劑、性激素、動(dòng)物生長(zhǎng)素等。目前，飼料及畜產(chǎn)品中激素殘留檢測(cè)方法主要包括高效液相色譜法、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、高效毛細(xì)管電泳法以及免疫分析法等[4-14]。其中免疫分析法根據(jù)其標(biāo)記物的種類又可分為放射免疫分析法、酶聯(lián)免疫分析法、熒光免疫分析法、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法。

1　高效液相色譜法

高效液相色譜法（HPLC）是分析檢測(cè)中常用的方法，可以在常溫條件下實(shí)現(xiàn)對(duì)高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、摩爾質(zhì)量大的物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)。鑒于其高效、高靈敏度的特點(diǎn)在激素殘留檢測(cè)領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用，同時(shí)為建立液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法奠定了基礎(chǔ)。劉紅菊等采用固相萃取反相高效液相色譜法對(duì)飼料中10種性激素進(jìn)行測(cè)定，樣品經(jīng)乙腈超聲提取，并選用乙腈-水進(jìn)行梯度洗脫，試驗(yàn)結(jié)果表明，10種性激素線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均> 0.999 8，加標(biāo)回收率為95.32%～102.5%，RSD< 1.8%[15]。該方法簡(jiǎn)單可靠，樣品的雜質(zhì)干擾較少，適用于飼料中違禁性激素的殘留分析。李蘭等采用DAD二極管陳列檢測(cè)器同時(shí)檢測(cè)飼料中的5種糖皮質(zhì)激素，為保證各組分有良好的分離度和合理的分析時(shí)間，采用梯度淋洗，5種組分的分離度均>1.5，分峰型尖銳，分析時(shí)間28 min，在豬配合飼料中，3個(gè)濃度水平的5種糖皮質(zhì)激素的回收率>66.5%，RSD≤10.6；在雞配合飼料中，3個(gè)濃度水平的5種糖皮質(zhì)激素的回收率>66.4%，RSD≤10.0[16]。盧艷芬等建立高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定飼料中的克倫特羅和萊克多巴胺，建立了酸性甲醇-水混合溶液提取、混合有機(jī)溶劑萃取、固相萃取柱凈化、反相色譜柱分離、雙波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器檢測(cè)相結(jié)合的方法，樣品加標(biāo)回收率為62%～97%，RSD<10%，該方法與單獨(dú)測(cè)定兩種β-激動(dòng)劑相比省時(shí)省力，降低檢測(cè)成本，實(shí)現(xiàn)了兩種物質(zhì)的同時(shí)測(cè)定，能夠滿足飼料中鹽酸克倫特羅和萊克多巴胺監(jiān)控檢測(cè)的要求[17]。Fan等通過(guò)超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（UPLC-MS/MS）測(cè)定了10類固醇激素，結(jié)果表明，應(yīng)用此方法，分析物在MS/MS上的響應(yīng)值和類固醇激素的濃度間有很好的線性關(guān)系，其檢測(cè)限為0.01 μg·kg-1，雞肉、豬肉、牛肉和香腸樣品中加標(biāo)回收率是76.8%～98.7%，RSD<10%[18]。該方法具有較高的靈敏度和重復(fù)性，并能在成分復(fù)雜的食物中迅速檢測(cè)出類固醇激素的殘留量。

2　液質(zhì)聯(lián)用法

液質(zhì)聯(lián)用法（LC-MS）是以液相色譜作為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜作為檢測(cè)系統(tǒng)的一種檢測(cè)方法。樣品在質(zhì)譜中與流動(dòng)相分離，樣品被離子化后，經(jīng)質(zhì)譜的質(zhì)量分析器將離子碎片按質(zhì)荷比（m/z）分離，經(jīng)檢測(cè)器得到質(zhì)譜圖。液質(zhì)聯(lián)用法體現(xiàn)了色譜和質(zhì)譜的優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，將色譜對(duì)復(fù)雜樣品的高分離能力，與質(zhì)譜具有高選擇性、高靈敏度及能夠提供相對(duì)分子質(zhì)量與結(jié)構(gòu)信息的優(yōu)點(diǎn)結(jié)合起來(lái)，在食品分析、藥物分析、環(huán)境分析等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。張毅等建立了谷物類飼料中10種雄性激素、11種孕激素、10種糖皮質(zhì)激素、5種雌性激素以及5種二羥基苯甲酸內(nèi)酯類藥物的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC- MS/ MS）檢測(cè)方法，均質(zhì)樣品經(jīng)乙酸乙酯提取，以改良的QuEChERS吸附劑分散于提取液中實(shí)現(xiàn)快速凈化，采用C18色譜柱分離，分別在正、負(fù)電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式下檢測(cè)，試驗(yàn)優(yōu)化了影響QuEChERS凈化效果和LC-MS /MS分析性能的主要因素[19]。所建立方法的前處理過(guò)程簡(jiǎn)便、凈化效率高，方法的靈敏度、回收率和精密度能較好地滿足禁用激素測(cè)定的要求。該方法為谷物類飼料中禁用激素的監(jiān)控和管理提供了良好的技術(shù)支持。張文剛等采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)飼料中6種玉米赤霉醇激素類藥物，試驗(yàn)中對(duì)樣品的前處理和儀器檢測(cè)條件進(jìn)行優(yōu)化，在0.5～100 μg·kg-1線性良好，檢出限為2 μg·kg-1，標(biāo)準(zhǔn)添加回收率為63.5%～117%，適用于飼料中玉米赤霉醇類藥物的分析檢測(cè)[20]。潘云山等用高效液相色譜串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜檢測(cè)飼料中10種β-受體激動(dòng)劑，樣品經(jīng)高氯酸提取、HLB柱凈化，C18色譜柱分離，電噴霧（ESI）離子源電離，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）對(duì)10種受體激動(dòng)劑進(jìn)行定性、定量分析，試驗(yàn)結(jié)果顯示，10種目標(biāo)物質(zhì)在0.5～40 μg·L-1線性良好，相關(guān)系數(shù)> 0.999，回收率為71.2%～103%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差3.7%～ 9.8%，方法定量限（S/N=10）為0.01 mg·kg-1[21]。該方法樣品處理簡(jiǎn)單，靈敏度高，定性準(zhǔn)確，可用于飼料中β-受體激動(dòng)劑的定性、定量檢測(cè)。Kaklama?nos等采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定牛血清中12種合成代謝類固醇，蛋白沉淀后，血清樣品經(jīng)過(guò)HLB固相萃取小柱凈化，在正、負(fù)兩種大氣壓化學(xué)電離模式下，采用多重反應(yīng)對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，試驗(yàn)結(jié)果顯示，檢測(cè)限為0.02～0.12 ng·mL-1，回收率為70.2%～118.2%，該方法靈敏、準(zhǔn)確、選擇性強(qiáng)，適用于類固醇激素的高通量定量分析[22]。Yang等建立了高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)豬肝、牛奶、肌肉當(dāng)中50種蛋白同化激素，目標(biāo)物經(jīng)過(guò)酶解后用甲醇提取，經(jīng)石墨碳化氨基柱凈化后上機(jī)測(cè)定，試驗(yàn)結(jié)果表明，定量限為0.04～2.0 μg·kg-1，平均回收率為76.9%～121.3%，RSD為2.4%～21.2%[23]。

3　氣質(zhì)聯(lián)用法

氣質(zhì)聯(lián)用法（GC-MS）是將氣相色譜儀與質(zhì)譜儀通過(guò)適當(dāng)接口相結(jié)合，借助計(jì)算機(jī)技術(shù)，進(jìn)行聯(lián)用分析的技術(shù)。將氣相色譜法的高分離優(yōu)勢(shì)與質(zhì)譜法的高鑒別能力相結(jié)合。氣質(zhì)聯(lián)用法具有靈敏度更高，定性、定量準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，可以在多種殘留物同時(shí)存在的情況下對(duì)其中的某種特定物質(zhì)進(jìn)行定量、定性檢測(cè)。但氣質(zhì)聯(lián)用法要求目標(biāo)物質(zhì)沸點(diǎn)較低、熱穩(wěn)定好。李勝等采用氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定飼料中萊克多巴胺，樣品經(jīng)N，O-雙三甲基硅基三氟乙酰胺衍生，選用選擇監(jiān)測(cè)離子模式進(jìn)行檢測(cè)，試驗(yàn)結(jié)果表明，萊克多巴胺衍生物的峰面積與其濃度為20.0～1 000 μg·L-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)>0.997，樣品加標(biāo)回收率為67.5%～92.3%，變異系數(shù)為3.0%～12%，方法檢出限達(dá)5 μg·kg-1[24]。楊柳等建立了氣質(zhì)聯(lián)用法對(duì)乳牛飼料中領(lǐng)苯二甲酸酯類環(huán)境激素進(jìn)行測(cè)定，樣品經(jīng)乙腈超聲提取30 min，結(jié)果顯示，回收率為85.42%～104.92%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.12%～4.97%，方法準(zhǔn)確可靠；對(duì)乳牛飼料樣品中6種鄰苯二甲酸酯類環(huán)境激素進(jìn)行了檢測(cè)，其中鄰苯二甲酸正二丁酯（DnBP）和鄰苯二甲酸二（2-乙基）乙酯（DEHP）含量相對(duì)較高，青貯飼料中單項(xiàng)和總鄰苯二甲酸酯類環(huán)境激素（PAEs）含量高于精飼料[25]。林維宣等建立了動(dòng)物組織10種β-興奮劑類獸藥殘留量的氣相色譜-質(zhì)譜法檢測(cè)方法，樣品經(jīng)pH 5.2乙酸鈉溶液提取，提取液依次經(jīng)乙酸乙酯-異丙醇（60?40）混合溶劑和叔丁基甲醚-異丙醇（5?1）萃取凈化，再經(jīng)Strata-X-C陽(yáng)離子交換柱（500 mg, 3 mL）凈化后，用BSTFA?TMCS（99?1）衍生劑衍生，采用HP-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）色譜柱進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜法分析，通過(guò)對(duì)質(zhì)譜條件的一系列優(yōu)化，兼顧各成分的靈敏度，建立了最佳質(zhì)譜分析條件，10種β-興奮劑類獸藥檢出限1～5 μg·kg-1。室內(nèi)平均回收率為59.1%～77.4%，變異系數(shù)（CV%）為0.87～7.04[26]。該方法的檢測(cè)限、回收率和精密度等技術(shù)指標(biāo)滿足對(duì)β-興奮劑殘留量檢測(cè)的有關(guān)要求。Zeng等建立了豬肉組織中8種合成代謝類固醇激素的GC-MS多殘留檢測(cè)方法，樣品經(jīng)液液萃取、凈化后，在最佳試驗(yàn)條件下，8種目標(biāo)物質(zhì)在2.5～50 μg·kg-1線性關(guān)系良好，回收率為67.7%～ 120%，方法可靠、適用[27]。

4　毛細(xì)管電泳技術(shù)

毛細(xì)管電泳（CE）又稱高效毛細(xì)管電泳（HPCE），是一類以毛細(xì)管為分離通道、以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力的新型液相分離技術(shù)。該技術(shù)具有分離效率高、分析速度快、樣品前處理簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。張敬敬等建立了一種應(yīng)用毛細(xì)管電泳法快速、高效分離畜產(chǎn)品中β-受體激動(dòng)劑的方法，在最佳試驗(yàn)條件下，4 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)了克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇3種β-受體激動(dòng)劑的基線分離。在8～100 μg·mL-1線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)>0.997 1，平均回收率為89.20%～95.34%，RSD≤3.33%（n=5），倫特羅和萊克多巴胺的檢測(cè)限均為4.5 μg·mL-1，沙丁胺醇的檢測(cè)限為5.5 μg·mL-1[28]。段建平等建立了同時(shí)測(cè)定飼料中西馬特羅、鹽酸克倫特羅與沙丁胺醇的毛細(xì)管區(qū)帶電泳-紫外檢測(cè)方法，考查試驗(yàn)參數(shù)對(duì)分離和檢測(cè)結(jié)果的影響，最佳試驗(yàn)條件下，在60 mmol·L-1檸檬酸-檸檬酸鈉運(yùn)行緩沖液（pH=6）中，上述3種物質(zhì)在8 min內(nèi)完全分離，西馬特羅、鹽酸克倫特羅和沙丁胺醇的線性響應(yīng)范圍為0.1～1.0 mg·L-1，最低檢測(cè)限（以信噪比為3計(jì)）分別為0.02，0.03和0.02 mg·L-1[29]。

5　免疫分析法

5.1放射免疫分析法

放射免疫標(biāo)記技術(shù)（RIA）是采用放射性同位素的抗原或抗體來(lái)檢查相應(yīng)抗體或抗原的高靈敏度免疫分析方法，此法具有高靈敏度（10-9或10-12），可進(jìn)行超微量分析。本法常用同位素有3H、14C、125I和131I等。放射免疫分析法應(yīng)用范圍廣泛，在食品安全檢測(cè)中可用來(lái)檢測(cè)肉類藥物殘留，黃曲霉毒素等。林杰等應(yīng)用CharmⅡ放射免疫分析方法測(cè)定飼料樣品的磺胺類殘留，該檢測(cè)方法可靠，靈敏度高，特異性強(qiáng)，且快速簡(jiǎn)便，在60 min內(nèi)可出初篩結(jié)果，假陰性率為0，特別有助于大批量樣品的初篩檢測(cè)[30]。但是，由于該檢測(cè)方法是基于微生物受體反應(yīng)，檢測(cè)結(jié)果有假陽(yáng)性的可能，因此，初篩陽(yáng)性的樣品必須用其他方法進(jìn)行確證。CharmⅡ放射免疫分析方法作為目前一種快捷可靠的檢測(cè)手段，值得推廣應(yīng)用。周浩等應(yīng)用放射免疫法檢測(cè)飼料中四環(huán)素類抗生素殘留，建立快速篩選方法，確定了樣品處理及控制點(diǎn)設(shè)定的方法，用液相色譜質(zhì)譜（LC-MS）法驗(yàn)證了放射免疫分析法篩選的樣品，符合率達(dá)100%，且該方法特異性強(qiáng)，與氯霉素、紅霉素、鏈霉素、青霉素G、磺胺嘧啶等其他抗生素?zé)o交叉反應(yīng)。飼料樣品前處理簡(jiǎn)單、干擾因素小，只需簡(jiǎn)單處理便可檢測(cè)，從接收樣品到出結(jié)果，整個(gè)過(guò)程約20 min，陰性結(jié)果不僅表明該樣品中含四環(huán)素族單種抗生素濃度分別<50 μg·kg-1，同時(shí)也可表明，四環(huán)素族濃度總和≤50 μg·kg-1[31]。所以，CharmⅡ放射免疫法提供了一種快速、有效的篩選檢測(cè)飼料中多種四環(huán)素類藥物的方法。

5.2酶聯(lián)免疫吸附法

酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種酶聯(lián)免疫技術(shù)，根據(jù)抗原-抗體反應(yīng)動(dòng)力學(xué)可分為競(jìng)爭(zhēng)性和非競(jìng)爭(zhēng)性兩種。根據(jù)反應(yīng)體系與檢測(cè)體系之間的關(guān)系分為直接法、間接法。其中間接法是檢測(cè)抗體最常用的方法，其原理為利用酶標(biāo)記的抗體以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體。李瑞園等建立了飼料中己烯雌酚定量的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法，試驗(yàn)結(jié)果顯示，己烯雌酚在0～4.5μg·kg-1呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9997，樣品加標(biāo)平均回收率為76%～94.2%，該方法靈敏度高，適合飼料中己烯雌酚檢測(cè)，且適用于大批量樣品的篩選[32]。徐新慧等用競(jìng)爭(zhēng)性酶免疫分析法快速定量測(cè)定43個(gè)小麥樣品中玉米赤霉烯酮毒素的含量，分析結(jié)果表明，玉米赤霉烯酮在0.5～450 μg·kg-1線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.997 36[36]。賈濤等采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定飼料中的萊克多巴胺，試驗(yàn)研究表明，該方法的回收率>95%，相關(guān)系數(shù)>0.99，最低檢測(cè)限可達(dá)到0.5 ng·mL-1[34]。本方法適用于飼料及飼料添加劑中萊克多巴胺的快速測(cè)定。但由于該方法檢測(cè)結(jié)果可能出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，因此初篩陽(yáng)性結(jié)果必須采用其他方法確認(rèn)。

5.3時(shí)間分辨熒光免疫分析

時(shí)間分辨熒光免疫分析（TRFIA）是一種新型的體外超微量分析技術(shù)。TRFIA利用了具有獨(dú)特?zé)晒馓匦缘蔫|系元素及其螯合物為示蹤物，代替熒光物質(zhì)、酶、同位素、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)，標(biāo)記抗體、抗原、激素、多肽、蛋白質(zhì)、核酸探針及生物細(xì)胞，待反應(yīng)體系發(fā)生后，用時(shí)間分辨熒光免疫分析檢測(cè)儀測(cè)定反應(yīng)產(chǎn)物中的熒光強(qiáng)度。根據(jù)產(chǎn)物熒光強(qiáng)度和相對(duì)熒光強(qiáng)度的比值，判斷反應(yīng)體系中分析物的濃度，從而達(dá)到定量分析。何明祥采用包被二抗間接競(jìng)爭(zhēng)法，以抗SAL二抗體包被96微孔板作為固相二抗，與游離SAL間接競(jìng)爭(zhēng)限量的以Eu3+標(biāo)記的SAL-OVA抗原，建立解離增強(qiáng)模式的熒光免疫分析體系檢測(cè)沙丁胺醇（SAL），以利用時(shí)間分辨熒光免疫分析（TRFIA）技術(shù)建立快速、高靈敏度的沙丁胺醇（SAL）全自動(dòng)檢測(cè)方法，結(jié)果表明該法的靈敏度為0.04 ng·mL-1，批內(nèi)和批間變異系數(shù)分別為2.2%和8.7%，平均回收率為106.5%，與鹽酸克倫、萊克多巴胺的交叉反應(yīng)率分別為0.93%和0.73%[35]。由此可見(jiàn)，用TRFIA法檢測(cè)SAL，靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好，具有良好的應(yīng)用前景。王超等采用時(shí)間分辨熒光技術(shù)建立高靈敏的玉米赤霉烯酮（ZEN）間接競(jìng)爭(zhēng)免疫分析法（ZEN-TRFIA），以玉米赤霉烯酮人工抗原（ZENBSA）包被96孔板為固相抗原，與ZEN標(biāo)準(zhǔn)或樣品中的ZEN共同競(jìng)爭(zhēng)有限的抗ZEN的單抗，用稀土離子Eu3+標(biāo)記的羊抗鼠抗體進(jìn)行示蹤，該方法的靈敏度為0.01 μg·L-1，測(cè)量范圍為0.01～20.00 μg·L-1，批內(nèi)和批間變異分別為7.2%和14.6%，平均回收率為94.4%，與玉米赤霉醇（ZER）的交叉反應(yīng)率為15.16%，7條不同時(shí)間進(jìn)行的ZEN-TRFIA的效應(yīng)點(diǎn)值（ED）ED20、ED50和ED80分別為0.156±0.024、0.634±0.049和2.595±0.225 μg·L-1，試劑盒4℃保質(zhì)期超過(guò)6個(gè)月，研究表明，ZEN-TRFIA是目前報(bào)道的ZEN檢測(cè)中較靈敏的方法，該分析方法穩(wěn)定性好，貨架期符合要求，可測(cè)范圍寬，具有很好的應(yīng)用前景[36]。Shen等通過(guò)時(shí)間分辨熒光技術(shù)（TR-FLA）從豬組織中篩查萊克多巴胺，該方法是基于直接競(jìng)爭(zhēng)免疫法，萊克多巴胺-卵清蛋白作為固相抗原，用銪標(biāo)記單克隆抗體進(jìn)行示蹤，當(dāng)豬肝臟和肌肉中萊克多巴胺的含量達(dá)到1～10 μg·kg-1時(shí)，回收率可達(dá)88.2%～118.5%，且其變異系數(shù)為7.1%～20.5%，檢出限為0.1 μg·kg-1。通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用法驗(yàn)證，時(shí)間分辨熒光技術(shù)對(duì)檢出豬組織中的萊克多巴胺具有很好的效果[37]。

5.4化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法

化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）方法是基于放射免疫分析的基本原理，將酶的化學(xué)發(fā)光與免疫反應(yīng)結(jié)合起來(lái)，進(jìn)而發(fā)展來(lái)的一種分析方法。CLIA是將發(fā)光物質(zhì)或酶標(biāo)記在抗原或抗體上，免疫反應(yīng)結(jié)束后，加入氧化劑或酶底物而發(fā)光，通過(guò)測(cè)量發(fā)光強(qiáng)度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定待測(cè)物的濃度。其主要優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高、線性范圍寬、標(biāo)記物的有效期長(zhǎng)、無(wú)放射性危害、可實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)化等。李細(xì)芬研究了小分子半抗原與載體蛋白結(jié)合的方法，最終采用重氮鹽法制備出鹽酸克倫特羅的人工免疫原、包被原和酶標(biāo)抗原，用人工免疫原免疫新西蘭大白兔，制備出高效價(jià)和高特異性的鹽酸克倫特羅抗體。通過(guò)優(yōu)化各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件，建立了簡(jiǎn)便、快捷、實(shí)用的鹽酸克倫特羅直接競(jìng)爭(zhēng)化學(xué)發(fā)光酶免疫分析方法。對(duì)所建立方法的性能指標(biāo)進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)，考查了方法的檢測(cè)限、定量限、精密度、準(zhǔn)確度。該方法檢測(cè)靈敏度較高，靈敏度為0.25 μg·kg-1，檢測(cè)限為0.02 μg·kg-1，批間和批內(nèi)變異系數(shù)均<20%[38]。盧江等應(yīng)用抗玉米赤霉烯酮單克隆抗體，以辣根過(guò)氧化物酶催化魯米諾-過(guò)氧化氫化學(xué)發(fā)光體系，建立了一種簡(jiǎn)便、快速、高特異性的間接競(jìng)爭(zhēng)化學(xué)發(fā)光酶免疫法用于檢測(cè)玉米中的玉米赤霉烯酮。所建立的方法分析靈敏度為0.09 ng·mL-1，批內(nèi)變異系數(shù)<9.1%，批間變異系數(shù)< 14.7%，樣品的加標(biāo)回收率為79.6%～97.6%，所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)為0.988 4，檢測(cè)線性范圍為0.104～1.69 ng·mL-1，檢測(cè)時(shí)間為60 min[39]。

6　小結(jié)

隨著人們對(duì)動(dòng)物性食品需求量的增加，動(dòng)物性食品中的激素殘留也越來(lái)越成為全社會(huì)共同關(guān)注的公共衛(wèi)生問(wèn)題。采用選擇性好、快捷的檢測(cè)手段是今后發(fā)展方向。應(yīng)從源頭控制激素類物質(zhì)添加，指導(dǎo)和幫助養(yǎng)殖業(yè)科學(xué)養(yǎng)殖，嚴(yán)格控制濫用動(dòng)物抗生素和激素，在畜牧生產(chǎn)實(shí)踐中規(guī)范用藥，同時(shí)建立起一套藥物殘留監(jiān)控體系，制定違規(guī)的相應(yīng)處罰手段，有效地控制藥物殘留的發(fā)生，并發(fā)展選擇性好、快捷的檢測(cè)手段，確保動(dòng)物性食品的食用安全和人類健康。

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前沿科技摘編

Determination Methods of Hormone Residues in Feeds and Animal Products

ZHAO Chunjuan, GAO Wenhui*
（College of Biological Science and Engineering, Hebei University of Science and Technology, Shijiazhuang 050000, China）

Abstract:With the fast development of livestock and animal husbandry, a variety of hormones and feed addi?tives were widely used, and harmful to public health and environment. Therefore，it was particularly important that the detection methods of hormone residues were established in feeds and animal products. This paper reviewed the detection methods of hormone in feeds and animal products.

Key words:feed; animal product; hormone residue; detection method

*通信作者：博士，教授，E-mail：wenhuigao@126.com。

作者簡(jiǎn)介：趙春娟（1988-），女，河北張家口人，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称钒踩c檢測(cè)。

基金項(xiàng)目：河北省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（14227504D，14236602D-13）

收稿日期：2014-08-29

中圖分類號(hào)：S816；S872

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001-0084（2015）01-0009-06