胡莉萍　（山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心　山東 濟(jì)南　250022）

我國(guó)中草藥等免疫佐劑的研究現(xiàn)狀

胡莉萍（山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心山東 濟(jì)南250022）

隨著生物技術(shù)的發(fā)展，新一代疫苗包括合成肽疫苗、基因工程疫苗等新型疫苗不斷涌現(xiàn)，但是現(xiàn)代疫苗研究過(guò)程中遇到的關(guān)鍵問(wèn)題是其免疫原性弱，必須由佐劑來(lái)克服，因此免疫佐劑的研究越來(lái)越受到人們的關(guān)注。免疫佐劑也稱佐劑或抗原佐劑，是一類單獨(dú)使用時(shí)一般無(wú)免疫原性，但與抗原物質(zhì)合并使用時(shí)能增強(qiáng)抗原物質(zhì)免疫原性，增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答，或改變機(jī)體免疫應(yīng)答類型的物質(zhì)。1925年，法國(guó)獸醫(yī)免疫學(xué)家Ranmon 發(fā)現(xiàn)疫苗中某些物質(zhì)的佐劑作用，1926年Glenny證明明礬具有佐劑作用，1951年Freund 研制成弗氏佐劑。目前我國(guó)對(duì)油乳佐劑、微生物成分佐劑、多糖佐劑、細(xì)胞因子佐劑等新型佐劑的研究也進(jìn)展迅速［1-3］，而對(duì)中草藥制劑作為免疫佐劑的研究報(bào)道偏少。本文綜合了近年來(lái)中草藥制劑等作為免疫佐劑的研究概況，并就免疫佐劑現(xiàn)狀及研究發(fā)展趨勢(shì)提出自己的見解，為開發(fā)研制高效、低毒、結(jié)構(gòu)新穎的免疫佐劑提供參考。

1　中草藥提取物作為免疫佐劑

中草藥具有抑菌抗病毒的作用，其提取物也具有免疫佐劑的功能。如皂角苷、蜂膠佐劑、植物多糖糖苷類佐劑及復(fù)方中草藥佐劑等新型佐劑。

1.1植物多糖、糖苷及復(fù)方中藥佐劑（1）多糖包括植物多糖、動(dòng)物多糖及微生物多糖，近年來(lái)對(duì)多糖研究的加深，發(fā)現(xiàn)多糖具有調(diào)節(jié)免疫功能、抗腫瘤、延緩衰老、抗疲勞、抗輻射、抗菌抗病毒等多種功效。（2）孟秀彥等（2007）研究證明直接飼喂松花粉能夠顯著提高雞、兔的免疫功能，而且這種增強(qiáng)作用是非特異性的，并且對(duì)機(jī)體沒有任何毒副作用。 因此，松花粉多糖免疫佐劑的免疫增強(qiáng)作用在實(shí)驗(yàn)室研究中取得了非常可觀的進(jìn)展。（3）中藥多糖特別是補(bǔ)益類中藥多糖一般都有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的作用，是良好的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，很有希望開發(fā)成為新型疫苗佐劑［14］。從中草藥植物中提取糖苷，與病毒及類脂混合，在一定條件下形成一種性能穩(wěn)定的復(fù)合制劑，免疫增強(qiáng)作用明顯。此外，一些復(fù)方中藥也可作為佐劑，如紫術(shù)散、當(dāng)歸補(bǔ)血湯等，對(duì)免疫激活和提高免疫都有很大的作用，并且糖苷及復(fù)方中藥對(duì)免疫激活和提高免疫都有很大的作用，并具有抗腫瘤作用。［15］

總之，多糖類佐劑安全、有效、可靠、穩(wěn)定，是一個(gè)很有發(fā)展前景的佐劑，但因其產(chǎn)地不同、采收時(shí)間差異，有效成分的含量不如西藥那樣容易確定。另外一些佐劑提取工藝煩瑣、成本高、效果不穩(wěn)定，限制了它的推廣使用。

1.2植物花粉（蜂膠）佐劑植物花粉是蜜蜂制造蜂膠的原料，蜂膠具有廣譜的生物學(xué)活性，是一種天然的免疫增強(qiáng)劑。應(yīng)用蜂膠或配合抗原引入機(jī)體，既能引起特異性免疫應(yīng)答，又能啟動(dòng)非特異性防御機(jī)制，能刺激免疫機(jī)制和丙種球蛋白活性，增加抗體產(chǎn)量，強(qiáng)補(bǔ)體活性和吞噬細(xì)胞的吞噬能力。用蜂膠制成的禽霍亂菌苗，具有安全可靠、保護(hù)率高（95.5%）、免疫期長(zhǎng)（6個(gè)月）、產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)免疫力時(shí)間早（5d）和無(wú)毒副作用等優(yōu)點(diǎn)［12］。蜂膠所含的成分極其復(fù)雜，其本身是否有抗原性值得注意。波蘭的一些學(xué)者研究表明［13］，蜂膠本身無(wú)明顯抗原性和過(guò)敏性，毒性作用較小。另外，蜂膠還是一種廣譜抗微生物藥，所以蜂膠制劑對(duì)感染性疾病的療效，一方面是由于其具有抗細(xì)菌，抗真菌，抗病毒和抗寄生蟲作用，抑制了這些致病微生物的生長(zhǎng)繁殖，另一方面則由于其增強(qiáng)特異性和非特異性免疫能力，提高機(jī)體的抗病力，最終消滅病原體，使家畜痊愈。

2　其他免疫佐劑

2.1鹽類佐劑鹽類佐劑以鋁鹽佐劑最常用，至今這類佐劑仍是美國(guó)食品和藥物管理局（FDA）準(zhǔn)許用于人類疫苗的惟一佐劑。鋁佐劑作用機(jī)制是其與抗原形成復(fù)合物，注射后在局部形成抗原貯存庫(kù)，其穩(wěn)定性決定抗原釋放速度。鋁佐劑主要促進(jìn)體液免疫應(yīng)答而對(duì)細(xì)胞免疫應(yīng)答幾乎無(wú)作用，主要適用于以抗體為保護(hù)性免疫的疾病的疫苗。鋁佐劑雖然廣泛應(yīng)用于獸用疫苗，特別是各種菌苗，但其仍存在許多缺點(diǎn)，如輕度局部反應(yīng)，形成肉芽腫，甚至發(fā)生局部無(wú)菌性膿腫。此外，鋁膠疫苗凍后膠體狀態(tài)被破壞，不能冷凍干燥，需要在低溫狀態(tài)下運(yùn)輸，分批制備相同的疫苗比較困難。最主要的是，研究證實(shí)［4］，腦組織對(duì)鋁元素有親和性，腦組織中的鋁沉積過(guò)多，可使人記憶力減退、智力低下、行動(dòng)遲鈍、催人衰老，即老年癡呆的癥狀。即使是受用免疫佐劑也有殘留的危害，隨著現(xiàn)代人們健康意識(shí)的加強(qiáng)，這種鋁鹽佐劑越來(lái)越不受追崇。但是由于其成本低，與成本較高的新型免疫佐劑相比依然有一定的市場(chǎng)。

2.2油乳佐劑油乳佐劑中含有油和乳化劑，它的作用機(jī)制是抗原包被在油相形成的微結(jié)構(gòu)內(nèi)，使之形成貯存庫(kù)而緩慢釋放，刺激機(jī)體免疫細(xì)胞產(chǎn)生抗體。油乳佐劑主要有弗氏佐劑、佐劑-65、白油Span 佐劑、MF259等。弗氏佐劑（Freund adjuvant， FA）分為弗氏完全佐劑（Freundcomplete adjuvant， FCA）和弗氏不完全佐劑（Freund incomplete adjuvant， FIA）兩種。FIA是由低黏度的礦物油及乳化劑組成的一種貯藏性佐劑；FCA是在不完全佐劑的基礎(chǔ)上加一定量的分枝桿菌而成。FCA是細(xì)胞免疫的強(qiáng)刺激劑［5］，而FIA則僅能刺激體液免疫。FCA和FIA主要不足之處：可引起局部肉芽腫和無(wú)菌性膿腫；使用礦物油佐劑的小鼠曾發(fā)生腫瘤，因此可能有致癌問(wèn)題；穩(wěn)定性差，難以長(zhǎng)期保存；有對(duì)結(jié)核菌素致敏等毒副作用［6］，故僅限用于獸用。佐劑-65在體內(nèi)可被代謝或分泌，用于人的流感疫苗安全有效，但較弗氏佐劑效果稍差。白油Span佐劑是用輕質(zhì)礦物油作油相，用Span-80或Span-85及Tween-80作為乳化劑制成的油乳佐劑，是當(dāng)前獸醫(yī)生物制品中最常用，最有效的佐劑之一。MF-59為水包角沙鯊烯乳劑配方，由角鯊烯，Tween-80，Span-85等組成，已廣泛用作于各種亞單位疫苗佐劑，可增強(qiáng)體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答，副反應(yīng)輕微［7］。

2.3微生物成分佐劑某些微生物或微生物菌體成分同抗原一起注射時(shí)，具有明顯的佐劑效應(yīng)。已經(jīng)證明有佐劑活性的微生物有分枝桿菌及其成分；革蘭氏陰性菌類及其產(chǎn)物；革蘭氏陽(yáng)性菌。此外，霍亂毒素（CT），CpGDNA等也有佐劑作用。微生物佐劑，主要是細(xì)胞壁上的肽聚糖起作用，如胞壁酰二肽（MDP）、胞壁酰三肽（MTP）、蠟質(zhì)D、海藻糖雙霉菌酸脂（TDN）等。其中對(duì)MDP研究較多，MDP是從分枝桿菌細(xì)胞壁上提取的一種免疫活性成分，與鏈球菌變異抗原混合，給大鼠口服，能刺激產(chǎn)生IgA。MDP可刺激免疫細(xì)胞如T細(xì)胞的增殖，單獨(dú)使用也可激活機(jī)體的非特異防御機(jī)制。最近研究表明，MDP能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞因子，被認(rèn)為是最有發(fā)展前途的佐劑之一［8］。其優(yōu)點(diǎn)有注射局部反映輕微，極少發(fā)生局部化膿等不良反應(yīng)，無(wú)抗原性、過(guò)敏性和致癌作用；相對(duì)分子質(zhì)量小，對(duì)生物學(xué)降解作用有抵抗力，可以口服。不良反應(yīng)是存在熱源性，在動(dòng)物體內(nèi)會(huì)引起賴特爾過(guò)敏綜合癥［9］。MTP已用在瘧疾疫苗中并取得了效果。

2.4表面活性劑類皂角苷和脂質(zhì)體都屬于表面活性劑類免疫佐劑。皂角苷是一種皂類，由皂苷元與糖類、糖醛酸等酸類物質(zhì)組成，能延長(zhǎng)抗原在動(dòng)物機(jī)體局部組織中的停留時(shí)間而提高機(jī)體的免疫應(yīng)答力，能引起白細(xì)胞釋放信號(hào)因子，激活動(dòng)物機(jī)體的免疫應(yīng)答。皂苷是一種強(qiáng)力表面活性劑，可導(dǎo)致紅細(xì)胞溶解，所以被禁止用于人類［10］。脂質(zhì)體是一種新型疫苗佐劑，是脂質(zhì)和水組成的分層球狀，主要由磷酸類脂、膽固醇、硬脂胺等組成的單層或多層雙分子夾水結(jié)構(gòu)。脂質(zhì)體作為新型的疫苗佐劑有如下優(yōu)點(diǎn)：安全性更高，副作用相對(duì)于傳統(tǒng)的鋁鹽佐劑、油佐劑??；天然定位于網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)豐富的器官，這些器官多數(shù)產(chǎn)生大量吞噬細(xì)胞，從而誘導(dǎo)激活免疫細(xì)胞，具有天然的靶向性；抗原被脂質(zhì)體包裹更穩(wěn)定，保存期更長(zhǎng)?，F(xiàn)階段脂質(zhì)體佐劑疫苗還處于實(shí)驗(yàn)室階段［11］，沒進(jìn)入大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用，跟原料和制備的成本都有關(guān)系，但今后脂質(zhì)體作為新型佐劑疫苗有廣闊的應(yīng)用前景。

2.5細(xì)胞因子類佐劑核酸疫苗作為基因工程疫苗［16］，疫苗的免疫原性差，所以添加合適的佐劑來(lái)提高疫苗的免疫作用，細(xì)胞因子就是研究最熱門最有應(yīng)用前景的核酸疫苗佐劑，它是由活化的免疫細(xì)胞和相關(guān)細(xì)胞產(chǎn)生的具有調(diào)節(jié)細(xì)胞功能的高活性、多功能蛋白質(zhì)多肽分子或糖蛋白，通過(guò)與高親和力的特異性受體相互作用，來(lái)激發(fā)機(jī)體的免疫活性物質(zhì)。細(xì)胞因子的種類也很多，根據(jù)作用機(jī)制的不同可分為增強(qiáng)細(xì)胞免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子、增強(qiáng)體液免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子、同時(shí)增強(qiáng)細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子。［17］隨著研究的深入，人們對(duì)于細(xì)胞因子類免疫佐劑的認(rèn)識(shí)還會(huì)更進(jìn)一步，基因工程類疫苗佐劑的前景會(huì)有比傳統(tǒng)佐劑更廣闊的發(fā)展前景。目前應(yīng)用于臨床且研究較多的細(xì)胞因子類佐劑主要有：白細(xì)胞介素-2、白細(xì)胞介素-12及白細(xì)胞介素-18。

3　免疫佐劑研究發(fā)展趨勢(shì)

近年來(lái)，對(duì)免疫佐劑的研究主要趨勢(shì)是多來(lái)源、多途徑開發(fā)出低毒、高效、速效、長(zhǎng)效的新型佐劑病探索其作用機(jī)理。如上所述，細(xì)胞因子代表著一類新的免疫佐劑，并已進(jìn)入臨床應(yīng)用。應(yīng)用IFN-α和IFN-γ均能增強(qiáng)疫苗的免疫原性。但細(xì)胞因子作為免疫佐劑是否可廣泛地在臨床應(yīng)用尚難以預(yù)測(cè)。部分原因是因其價(jià)格昂貴。如與其他免疫調(diào)節(jié)劑聯(lián)合使用，在合成特殊內(nèi)源性細(xì)胞因子破損的個(gè)體中，細(xì)胞因子會(huì)特別有用。相信細(xì)胞因子可能成為未來(lái)佐劑技術(shù)的重要部分［18］。

多糖類物質(zhì)作為增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的藥物進(jìn)行了大量研究，但把多糖作為免疫佐劑的研究現(xiàn)在還僅停留在實(shí)驗(yàn)室階段。事實(shí)上，多糖是一類非常重要的生物活性物質(zhì)，一些多糖分別或同時(shí)具有調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞、吞噬細(xì)胞、白細(xì)胞介素、抗體水平以增強(qiáng)免疫功能；一些多糖可經(jīng)化學(xué)修飾形成多孔微顆粒，具有濃縮和儲(chǔ)存抗原的作用。多糖微?？赡褪芪改c道的降解，可發(fā)展成口服免疫載體［19-20］。因此，以多糖類物質(zhì)為佐劑，既可發(fā)揮其增強(qiáng)免疫作用之功效，又可使其具有運(yùn)載抗原，促進(jìn)抗原遞呈的佐劑活性，可成為研究佐劑的新趨勢(shì)。

參考文獻(xiàn)

［1］ 劉悅竹， 王允超， 崔金生. 我國(guó)免疫佐劑的研究進(jìn)展［J］.山東畜牧獸醫(yī)， 2008， 29: 42-44.

［2］ 趙萍， 儲(chǔ)岳峰， 高鵬程等. 免疫佐劑的研究現(xiàn)狀及發(fā)展動(dòng)態(tài)［J］. 中國(guó)畜禽種業(yè)， 2008， 13: 66-68.

［3］ 柳鐘勛. 免疫佐劑在疫苗中的應(yīng)用［J］. 國(guó)外醫(yī)學(xué). 藥學(xué)分冊(cè)，1992（4）: 225-229.

［4］ SIVAKUMAR S M， SAFHI M M， KANNADASAN M， et al.Vaccine adjuvants-currentstatus and prospects on controlled releaseadjuvancity［J］. Saudi Pharmaceutical J， 2011， 19（4）: 197-206.

［5］ 李瑤瑤， 明恒強(qiáng). 我國(guó)免疫佐劑的研究現(xiàn)狀［J］. 獸藥與飼料添加劑， 2009（5）: 11-14.

［6］ 陳群， 梅世榮. 獸醫(yī)常用佐劑的探討［B］. 畜牧獸醫(yī)， 2013（4）.

［7］ 任銳， 呂雪峰， 孟憲奎. 獸用疫苗佐劑的研究及應(yīng)用現(xiàn)狀［J］. 吉林畜牧獸醫(yī)， 2011（5）: 37-38.

［8］ Moschos S A， Bramwell V W， Somavarapu S， et al.Comparative immunomodulatoryproperties of a chitosan-MDP adjuvant combination following intranasal or intramuscular immunisation［J］. Vaccine， 2005， 23 （16）: 1923-1930.

［9］ Bessler W G， Jung G. Synthetic lipopeptides as novel adjuvants［J］. Res Immunol， 1992， 143（5）: 548-553， discussion579-580.

［10］ Kensil C R. Saponins as vaccine adjuvants［J］. Crit Rev Ther Drug Carrier Syst， 1996，13（1-2）: 1-55.

［11］ 潘杭君. 免疫佐劑的研究進(jìn)展［J］. 中國(guó)獸藥雜志， 2004，28（1）: 32-37.

［12］ 孫紅祥， 潘杭君. 免疫佐劑作用機(jī)理的研究進(jìn)展［J］. 中國(guó)獸藥雜志， 2005， 10: 22-27.

［13］ 潘杭君， 孫紅祥. 免疫佐劑的研究進(jìn)展［J］. 中國(guó)獸藥雜志， 2004，38（1）: 32-37.

［14］ 宋小平， 林秀玉， 斯崇文等. 豬苓多糖與乙型肝炎疫苗等合用對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞功能的影響［J］. 中華醫(yī)學(xué)雜志， 1996， 76（5）: 385-387.

［15］ 崔昱. 馬齒莧多糖的抗腫瘤活性［J］. 山東師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）， 2002，17（1）: 73-76.

［16］ 白春楊. 基因疫苗免疫佐劑的研究進(jìn)展［J］. 國(guó)外畜牧學(xué)（豬與禽），2011（3）: 105-106.

［17］ Sessler W G，. Jung G..Synthetic lipopepitides as nvel adjuvants［J］. Red immunol engineering， 1992，143（5）: 548.

［18］ 龔曉明， 吳耀妹. 免疫佐劑研究的現(xiàn)狀與趨勢(shì)［J］. 中國(guó)獸藥雜志，1996（1）: 41-44.

［19］ Hioe C E， Qiu H， Chend P D， et al. Comparison of adjuvant formulations for cytotoxic T cell induction using synthetic peptides［J］. Vaccine， 1996， 14（5）: 412-418.

［20］ Barr I G and Nitchell G F. ISCOMs （immunostimulationg complexes）: he first decade［J］. Immunol Cell Biol， 1996， 74（1）: 825.

中圖分類號(hào)：S853.73+3

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1007-1733（2015）02-0062-03

收稿日期：（2015-02-05）