王黎，王文娟，高蘇亞

(西安醫(yī)學院 藥學院，陜西 西安 710021)

竹節(jié)參別名竹節(jié)三七、竹節(jié)人參、竹根七等，為五加科人參屬植物竹節(jié)參Panax japonicus C. A.Mey.的干燥根莖，始載于《本草綱目拾遺》，是人參屬當中的一野生品種，民間將蒸熟的肉質根作滋補藥，生曬根莖作止血藥具有滋補強壯、散瘀止痛、止血祛痰等功效，臨床上常用于病后虛弱、勞嗽咳血、跌打損傷等［1-2］。其化學成分以皂苷類為主，齊敦果酸為主要苷元［3］。目前，中國藥典收載該藥還未有含量測定項，僅對有效成分進行了薄層色譜鑒別。本文采用反相高效液相色譜法對竹節(jié)參中皂苷類成分齊敦果酸的含量進行快速測定，為竹節(jié)參藥材的質量控制與評價提供了一定依據(jù)。

1 實驗部分

1.1 原料與儀器

齊敦果酸對照品(98%);竹節(jié)參藥材(產(chǎn)地云南)，經(jīng)西安醫(yī)學院生藥教研室馮永輝副教授鑒定為正品竹節(jié)參Panax japonicus C.A.Mey;甲醇，色譜純;水為三重蒸餾水。

P-680 型高效液相色譜儀;UV-170 型紫外檢測器;BSA224S-CW 型電子天平;SB-5200DT 型超聲波清洗機。

1.2 溶液的制備

1.2.1 對照品溶液的制備 精密稱定齊敦果酸對照品2.36 mg 于2 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成1.18 mg/mL 對照品溶液，0.45 μm 微孔濾膜過濾，制備對照品溶液。

1.2.2 供試品溶液的制備［4］精密稱取干燥后的竹節(jié)參藥材粉末1.0 g，以研缽研為粉末后，過60 目篩，置于具塞錐形瓶中，向其中加入50 mL 甲醇，稱定重量，于功率250 W，頻率50 kHz 的超聲中放置40 min，稱定后用甲醇補足所減失重量，搖勻，濾過;精密量取續(xù)濾液10 mL，回收溶劑至干，加25%鹽酸20 mL、三氯甲烷25 mL 至殘渣中，加熱水解1.0 h，再用三氯甲烷振搖提取2 次，每次25 mL，合并提取液，回收溶劑至干，殘渣加甲醇溶解并轉移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，0.45 μm 微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。

2 結果與討論

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

色譜柱為Kromasil C18柱(150 mm ×4. 6 mm，5 μm)，流動相為乙腈-水(93 ∶7)，檢測波長為215 nm，流速為1.0 mL/min，理論塔板數(shù)以齊墩果酸色譜峰計不低于5 000，見圖1。

圖1 反相高效液相色譜圖Fig.1 RP-HPLC chromatogram

2.2 線性實驗

精密吸取齊墩果酸對照品溶液2，4，6，8，10，15，20 μL，按上述色譜條件進樣，測定其峰面積值，以峰面積積分值的常用對數(shù)(lgY)為縱坐標，以標準品進樣量的常用對數(shù)(lgX)為橫坐標進行回歸分析(Y=7.415 7X－0.811 5，r=0.999 8)，結果表明，齊墩果酸在2.36 ～23.60 μg/mL 范圍內濃度與峰面積呈良好的線性關系。

2.3 精密度實驗

取齊敦果酸對照品溶液，按上述色譜條件以進樣量20 μL 重復進樣6 次，取得齊墩果酸峰面積測定結果平均值為117.612，RSD 為1.00%。

2.4 穩(wěn)定性實驗

取竹節(jié)參供試品溶液，分別放置于0，2，4，6，8 h按上述色譜條件進樣10 μL 進行測定，齊敦果酸峰面積的RSD 為0.91%，表明該樣品溶液在8 h 內測定穩(wěn)定。

2.5 重復性實驗

精密稱取同一批待測竹節(jié)參藥材粉末5 份，分別按1.2.2 節(jié)方法制備為供試品溶液，按上述色譜條件進樣10 μL 進行測定，所得齊敦果酸峰面積的RSD 為0.63%，表明本方法重復性良好。

2.6 回收率實驗

精密稱定竹節(jié)參藥材粉末0.2 g(已知齊墩果酸含量48.28 mg/g)6 份，分別按已知含量的80%，100%，120%加入齊墩果酸對照品溶液，按1.2.2 節(jié)方法制備樣品溶液并測定，計算得齊墩果酸平均回收率為98.86%，RSD 為0.41%，結果見表1。

表1 竹節(jié)參中齊墩果酸回收率實驗(n=6)Table 1 Recoveries of Oleanolic acid in Panax japonicus

2.7 樣品含量測定

取竹節(jié)參藥材待測樣品按1.2.2 節(jié)方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進樣20 μL 進行測定，按外標法計算含量，結果表明該產(chǎn)地云南的竹節(jié)參藥材中齊墩果酸平均含量為48. 277 mg/g，結果見表2。

表2 待測云南產(chǎn)竹節(jié)參中齊墩果酸含量測定結果Table 2 The assay results of Oleanolic acid in Panax japonicus

3 討論

3.1 檢測波長的優(yōu)化

采用UV 檢測器對齊墩果酸對照品溶液進行全波長掃描，在210 nm 處出現(xiàn)最大吸收，但210 nm 檢測時基線不平穩(wěn)、溶劑峰干擾大、檢測器響應值小。為了優(yōu)化檢測效果、減少干擾、提高信噪比，選擇在215 nm 處檢測，基線平穩(wěn)且峰形滿意。

3.2 流動相的優(yōu)化

分別以甲醇-0.2%乙酸水溶液、甲醇-1%乙酸水溶液、甲醇-0.2%磷酸水溶液、甲醇-水為流動相來進行測定，結果此四種流動相體系所得的峰對稱度較差，然后將其中的甲醇改為乙腈，當選用乙腈-水的流動相體系時，峰形較好。以乙腈-水的體積比分別為86∶14、88∶12、90∶10、93∶7 作流動相進行測定，發(fā)現(xiàn)流動相比例為86∶14 時峰形對稱度較差，88∶12 時對照品后有一小峰且無法分開，90∶10 時峰形對稱度有所改善但保留時間不夠穩(wěn)定(在6.0 ～7.5 min 之間波動)，93∶7 時不僅峰形對稱度高且分離效果較好、基線平穩(wěn)，故將最終的流動相確定為乙腈-水(93∶7)。

4 結論

本文建立了以高效液相色譜法測定竹節(jié)參中三萜苷元齊墩果酸含量的方法，系統(tǒng)適用性實驗表明選擇乙腈-水的流動相體系符合中藥材主要成分含量測定的要求;方法學考察表明該法快速準確、簡單易行、重現(xiàn)性好，為竹節(jié)參藥材的質量評價提供了一定依據(jù)。

［1］ 王慧清. 中藥材產(chǎn)銷［M］. 成都:四川科學技術出版社，2004:320-322.

［2］ 國家藥典委員會.中國藥典2005 年版［M］.北京:化學工業(yè)出版社，2005:93.

［3］ 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會. 中華本草［M］.第五卷.上海:上?？茖W技術出版社，1999:832-834.

［4］ 袁丁，何毓敏，魯科明，等. 中藥竹節(jié)參中總皂苷和齊墩果酸的含量測定［J］. 西北藥學雜志，2008，23(5):279-280.