劉 艷，林建姣，胡紅松，劉榮火，章任兵

(深圳市龍崗區(qū)人民醫(yī)院消化內(nèi)科1、病理科2，廣東 深圳 518172)

結(jié)腸癌組織中Cofilin-1蛋白的表達(dá)及臨床病理意義

劉 艷1，林建姣1，胡紅松1，劉榮火1，章任兵2

(深圳市龍崗區(qū)人民醫(yī)院消化內(nèi)科1、病理科2，廣東 深圳 518172)

目的探討結(jié)腸癌組織中Cofilin-1蛋白的表達(dá)及其與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)60例結(jié)腸癌組織、40例癌旁正常組織、26例轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織標(biāo)本中Cofilin-1蛋白的表達(dá)水平，并結(jié)合臨床病理參數(shù)進(jìn)行分析。結(jié)果Cofilin-1蛋白在結(jié)腸癌組織、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中表達(dá)率分別為76.7%、61.5%，均明顯高于癌旁正常組織中的32.5%表達(dá)率。Cofilin-1在結(jié)腸癌組織、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中的表達(dá)率明顯高于癌旁正常組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；Cofilin-1蛋白的表達(dá)水平與結(jié)腸癌組織分化程度、Dukes分期、漿膜侵犯及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)，而與性別、年齡、腫瘤大小無(wú)明顯相關(guān)(P＞0.05)；Cofilin-1與結(jié)腸癌預(yù)后密切相關(guān)(P＜0.05)。結(jié)論檢測(cè)Cofilin-1蛋白的表達(dá)有助于判斷結(jié)腸癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后。

絲切蛋白-1；結(jié)腸癌；轉(zhuǎn)移;預(yù)后

結(jié)腸癌是結(jié)腸黏膜上皮和腺體在環(huán)境或遺傳等多種致癌因素作用下發(fā)生的惡性病變，預(yù)后不良。近年來(lái)結(jié)腸癌的發(fā)病率與死亡率有逐年上升的趨勢(shì)，腫瘤轉(zhuǎn)移是結(jié)腸癌高死亡率的主要原因[1-2]?，F(xiàn)有的治療方法包括手術(shù)切除、化療都沒(méi)有改變結(jié)腸癌的自然發(fā)生發(fā)展過(guò)程。因此，尋找治療結(jié)腸癌的新方法勢(shì)在必行，腫瘤的基因治療是目前的研究熱點(diǎn)。絲切蛋白(Cofilin)是一種肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白，能誘導(dǎo)片狀偽足形成，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和遷移。Cofilin-1是其1型[3]。目前Cofilin-1在腫瘤中表達(dá)與臨床病理的關(guān)系研究不多，與結(jié)腸癌的關(guān)系報(bào)道更是少見(jiàn)。本實(shí)驗(yàn)利用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)結(jié)腸癌組織、癌旁正常組織和和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織標(biāo)本中Cofilin-1蛋白的表達(dá)情況，并探討其臨床病理意義，以期為腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制和結(jié)腸癌的早期診斷及治療提供更多的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2007年4月至2012年4月腸鏡或術(shù)后病理證實(shí)的60例臨床資料完整且保存完好的結(jié)腸癌患者術(shù)后石蠟標(biāo)本作為研究對(duì)象，術(shù)前均未進(jìn)行放化療。其中男性37例，女性23例；年齡28～75歲，平均48.5歲。病理確診高/中分化33例，低分化27例；腫瘤直徑≤5 cm者36例，＞5 cm者24例；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例，侵及漿膜28例。并取40例患者正常黏膜組織(遠(yuǎn)離癌組織5 cm以上)及26例患者的轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織同時(shí)納入研究。以電話及門診復(fù)查方式進(jìn)行隨訪，隨訪日始至手術(shù)日，截至2014年6月。

1.2 試劑 兔抗人Cofilin-1多克隆抗體、SP檢測(cè)試劑盒及DAB染色試劑盒購(gòu)于武漢博士德生物技術(shù)有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 組織蠟塊切片，HE染色，觀察組織形態(tài)特點(diǎn).按照試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行免疫組織化學(xué)SP法染色，5μm連續(xù)切片。設(shè)正常結(jié)腸組織為對(duì)照組，切片常規(guī)脫蠟至水，高溫高壓進(jìn)行抗原修復(fù)，一抗1：200 4℃孵育過(guò)夜，DAB顯色，蘇木精對(duì)比染色，磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 免疫組化結(jié)果由兩名醫(yī)師記錄，并獨(dú)立閱片，每例切片選擇10個(gè)高倍視野(10× 40倍)。Cofilin-1蛋白在細(xì)胞質(zhì)中呈棕黃色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)，按染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞百分比綜合評(píng)分。染色強(qiáng)度：0分：無(wú)染色；1分：弱陽(yáng)性；2分：中度陽(yáng)性；3分：強(qiáng)陽(yáng)性。按陽(yáng)性細(xì)胞百分比：1分：1%～25%；2分：26%～50%；3分：51%～75%；4分：76%～100%。然后按照陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)×染色強(qiáng)弱計(jì)算總分，總分＜4分為陰性，≥4分為陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料及率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)腸癌組織、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織和癌旁正常組織Cofilin-1蛋白表達(dá)水平比較 Cofilin-1蛋白在60例結(jié)腸癌組織、26例轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中表達(dá)率分別為76.7%、61.5%，均明顯高于40例癌旁正常組織的32.5%。Cofilin-1在結(jié)腸癌組織、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中的表達(dá)率明顯高于癌旁正常組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 Cofilin-1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá) 圖像Cofilin-1蛋白表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色，見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 癌旁正常組織Cofilin-1的表達(dá)（SP，×400）

圖2 結(jié)腸癌組織Cofilin-1的表達(dá)（SP，×400）

2.3 Cofilin-1蛋白表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系 Cofilin-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)在結(jié)腸癌組織分化程度、Dukes分期、漿膜侵犯及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而與患者性別、年齡、腫瘤大小間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表1。

表1 Cofilin-1蛋白表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系(例)

2.4 Cofilin-1蛋白在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系 60例患者隨訪3年以上，有2例失訪。58例患者中有33例存活，3年生存率為56.9%。生存組結(jié)腸癌組織中Cofilin-1陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于死亡組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.73，P＜0.05)，見(jiàn)表2。

表2 Cofilin-1蛋白表達(dá)與結(jié)腸癌患者預(yù)后的關(guān)系[例（%）]

3 討 論

腫瘤的轉(zhuǎn)移過(guò)程相當(dāng)復(fù)雜，由多種因素和多種步驟共同參與。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，Cofilin-1蛋白在此過(guò)程中扮演了重要角色。Cofilin屬于肌動(dòng)蛋白解聚因子家族，由5個(gè)α螺旋、5個(gè)β折疊及C末端的一個(gè)短β鏈構(gòu)成，呈現(xiàn)一個(gè)折疊結(jié)構(gòu)，富集于運(yùn)動(dòng)前沿如細(xì)胞褶皺處和偽足[4]。Cofilin蛋白有兩種亞型，即Cofilin-1和Cofilin-2。Cofilin-1定位于11q13染色體。Cofilin在去磷酸化的形式下激活，繼而與肌動(dòng)蛋白絲(F肌動(dòng)蛋白)結(jié)合，實(shí)現(xiàn)對(duì)F肌動(dòng)蛋白的剪切；同時(shí)增加肌動(dòng)蛋白單體(G肌動(dòng)蛋白)從纖維末端的解離速度，使F與G肌動(dòng)蛋白加速解聚，從而重構(gòu)細(xì)胞前端的偽足和片層結(jié)構(gòu)，調(diào)節(jié)細(xì)胞向前“邁步”[3，5]。通過(guò)上述一系列細(xì)胞功能轉(zhuǎn)換，Cofilin實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、運(yùn)動(dòng)方向的確定、胞核分裂、轉(zhuǎn)移速度及侵襲性的重要調(diào)控作用[6]。

研究發(fā)現(xiàn)，Cofilin-1在食管癌、胃癌、肺癌、卵巢癌、原發(fā)性乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌細(xì)胞及神經(jīng)膠質(zhì)瘤中都有較高表達(dá)，且在腫瘤早期即能檢測(cè)到[7-8]。通過(guò)對(duì)胃腸內(nèi)分泌細(xì)胞腫瘤標(biāo)本進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，Cofilin-1與腫瘤侵襲深度明顯相關(guān)，其可能是預(yù)測(cè)胃腸內(nèi)分泌細(xì)胞腫瘤預(yù)后的分子標(biāo)記[9]。Wang等[10]發(fā)現(xiàn)，Cofilin-1與食管癌病理學(xué)分類、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)，其表達(dá)水平有助于評(píng)價(jià)食管癌患者的預(yù)后。易曉雷等[11]發(fā)現(xiàn)Cofilin-1在原發(fā)性肝癌轉(zhuǎn)移組及低分化組中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)腫瘤轉(zhuǎn)移組及高+中分化組，提示Cofilin蛋白表達(dá)與肝癌進(jìn)展及預(yù)后密切相關(guān)。國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)在SW620細(xì)胞(結(jié)腸癌細(xì)胞系)中，活化的Cofilin-1的表達(dá)與CD44的表達(dá)呈顯著的正相關(guān)，而CD44分子與結(jié)腸癌細(xì)胞的侵襲性密切關(guān)聯(lián)[12]。另有研究發(fā)現(xiàn)，凝血因子X(jué)a可通過(guò)LIMK1介導(dǎo)Cofilin-1失活抑制癌細(xì)胞遷移[13]。通過(guò)小干擾RNA技術(shù)，使得Cofilin表達(dá)下降，發(fā)現(xiàn)可以抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)及侵襲[14]。這些研究均提示Cofilin-1蛋白的表達(dá)活性與腫瘤細(xì)胞的侵襲性密切相關(guān)。

Cofilin-1與結(jié)腸癌相關(guān)性的研究目前為止比較少見(jiàn)。本研究結(jié)果提示：Cofilin-1在結(jié)腸癌組織、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中的表達(dá)率明顯高于癌旁正常組織；Cofilin-1蛋白的表達(dá)與結(jié)腸癌患者的年齡、性別、腫瘤大小無(wú)關(guān)，而與組織學(xué)分級(jí)、Dukes分期、漿膜侵犯及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)；Cofilin-1的表達(dá)與患者生存預(yù)后密切相關(guān)；上述結(jié)果均說(shuō)明其在腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要的作用。其作用機(jī)制及細(xì)胞內(nèi)信號(hào)調(diào)節(jié)等方面還不是很清楚，可能是Cofilin通過(guò)一系列的調(diào)控因素，如酪氨酸激酶、上皮生長(zhǎng)因子、磷酸肌醇、原肌球蛋白、細(xì)胞外鈣等介導(dǎo)了肌動(dòng)蛋白的聚合，改變了細(xì)胞的正常功能，從而促進(jìn)結(jié)腸腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移，確切機(jī)制還有待于進(jìn)一步的研究。因此，檢測(cè)Cofilin-1蛋白可能成為預(yù)測(cè)早期結(jié)腸癌預(yù)后的重要指標(biāo)，控制腫瘤細(xì)胞中Cofilin蛋白的異常表達(dá)可能成為臨床抗腫瘤轉(zhuǎn)移的治療及判斷預(yù)后的重要策略。

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Expression and clinicopathological significance of Cofilin-1 protein in colonic cancer.

LIU Yan1,LIN Jian-jiao1, HU Hong-song1,LIU Rong-huo1,Zhang Ren-bing2.Department of Gastroenterology1,Department of Pathology2, Longgang District People's Hospital of Shenzhen,Shenzhen 518172,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression of Cofilin-1 protein and its clinicopathological significance in colonic cancer.MethodsThe expression of Cofilin-1 protein in 60 colonic cancer specimens,40 adjacent normal tissues,26 lymph node metastasis tissues was detected by SP method.Meanwhile,the relationship between the expression of Cofilin-1 and the clinical pathologic factors was analyzed.ResultsThe positive rate of Cofilin-1 expression was 76.7%in colonic cancer specimens,61.5%in lymph node metastasis tissues,which were significantly higher than 32.5%in adjacent normal tissues(P＜0.05).Positive expression of Cofilin-1 protein was significantly associated with histology grading,Dukes stage,serosal invasion and lymph node metastasis(P＜0.05),but not with gender,age and the size of tutor(P＞0.05).Cofilin-1 was closely related to the prognosis of colonic cancer(P＜0.05).ConclusionThe detection of Cofilin-1 protein can help judge the invasion,metastasis and prognosis of colonic cancer.

Cofilin-1 protein;Colonic cancer;Metastasis;Prognosis

R735.3+5

A

1003—6350（2015）21—3130—03

2015-03-06)

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.21.1139

林建姣。E-mail：yilianyiyu@163.com