劉 芳 ，高 新

（1.遼寧省阜新市中心血站，阜新 123000；2.阜新市第二人民醫(yī)院，阜新 123000）

冷凝集素是冷反應(yīng)型抗紅細(xì)胞抗體，可與自身紅細(xì)胞發(fā)生凝集，相關(guān)試驗證實高效價冷凝集素可造成血型鑒定和交叉配血困難［1，2］。除冷凝集素綜合征外，自身免疫性疾病、血液系統(tǒng)疾病、感染性疾病和腫瘤性疾病均可造成冷凝集素效價增高。如何排除高效價冷凝集素干擾，確保血型鑒定和交叉配血對降低輸血治療風(fēng)險有重要的臨床意義。本研究探析高效價冷凝集素所致血型鑒定困難的處理方法，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 基本資料以收集的2011 年10 月～2014 年10 月200 例因冷凝集素導(dǎo)致的血型鑒定困難患者為觀察對象，年齡23～58 歲，平均（40.6±3.6）歲，男性112 例，女性88 例，患者情況：貧血72 例，肺炎62 例，系統(tǒng)性紅斑狼瘡30 例，不明原因發(fā)熱20 例，淋巴瘤16 例。

1.2 儀器和試劑儀器：離心機(jī)，水浴箱，顯微鏡，冰箱；試劑：單克隆抗體-A、抗-B、抗-D 和抗人球蛋白試劑，ABO 反定型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞、不規(guī)則抗體鑒定標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司），聚凝胺試劑（上海貝索生物技術(shù)有限公司）

1.3 方法

1.3.1 冷凝集素效價測定抽取5mL 靜脈血，分離血清，取0.5mL 血清，用生理鹽水倍比稀釋，加等體積經(jīng)過洗滌的正常人O 型2%紅細(xì)胞懸液，搖勻，置于4℃冰箱過夜，以最高稀釋倍數(shù)肉眼觀察可見凝集者為冷凝集素檢測效價。

1.3.2 血型鑒定取靜脈血5 mL，分離血清和紅細(xì)胞，正定型：取三支試管標(biāo)以抗-A、抗-B、抗-D，5%紅細(xì)胞懸液（生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3 次制得）加入各1 滴，后加入抗-A、抗-B、抗-D 血型分型試劑2 滴，3000 轉(zhuǎn)/min，離心15s，觀察結(jié)果。反定型：取試管三支標(biāo)以Ac、Bc、Oc，分別加入患者血清各2 滴，后加入ABO 血型分型試劑1 滴，3000 轉(zhuǎn)r/min，離心15s，觀察結(jié)果。

1.3.3 交叉配血鹽水介質(zhì)法：①取2 支試管，標(biāo)明主、次側(cè)，主側(cè)管各滴1 滴供血者紅細(xì)胞懸液和受血者血清，混勻，次側(cè)管中各滴1 滴供血者血清和受血者紅細(xì)胞懸液。②1000r/min 離心1 min，觀察結(jié)果，同型配血，主側(cè)、次側(cè)均不凝集提示符合，出現(xiàn)凝集提示不符。凝聚胺法：① 取2 支試管（標(biāo)明主、次側(cè)），主側(cè)管分別加受血者血清和供血者5%紅細(xì)胞懸液各1 滴，混勻，次側(cè)管反之。②分主次側(cè)管中分別加0.6 mL 低離子溶液，混勻，各滴加凝聚胺液2 滴，混勻，1000r/min 離心10s，觀察管底紅細(xì)胞聚集情況，若試管反應(yīng)物未凝集，重新檢測。③將2 滴懸浮液加入2 試管中，混勻，觀察結(jié)果。60s 內(nèi)凝聚散開提示符合配血結(jié)果；若凝集未散開，提示不符合配血結(jié)果。

1.3.4 洗滌和吸收洗滌：100 mL 生理鹽水置于37 度水浴箱30min，從中取8mL 生理鹽水于試管中，加入0.5mL 紅細(xì)胞，搖勻，3000 轉(zhuǎn)/min 離心5 min，去上清，反復(fù)洗滌至顯微鏡觀察無紅細(xì)胞凝集，然后進(jìn)行正定型檢測。吸收：取正常2 mL O 型紅細(xì)胞，生理鹽水洗滌3 次，最后用吸水紙吸干上清液，加入等量血清置于4 度冰箱吸收120 min，3000 轉(zhuǎn)r/min 離心5 min，取上清作反定型和交叉配血。

2 結(jié)果

2.1 血型鑒定結(jié)果高效價冷凝集素標(biāo)本洗滌吸收前200 例抗-A、抗-B、抗-D、Ac、Bc、Oc 均為陽性，洗滌吸收處理后確定血型，A 型26%，B 型34%，AB 型35%，O 型5%，見表1。

表1 200例高效價冷凝集素標(biāo)本處理前后的血型鑒定結(jié)果

2.2 交叉配血結(jié)果高效價冷凝集素處理前自身對照、鹽水介質(zhì)、聚凝胺介質(zhì)中主側(cè)、次側(cè)交叉配血結(jié)果均為陽性，處理后主側(cè)、次側(cè)交叉配血結(jié)果均為陰性，見表2。

表2 200例高效價冷凝集素標(biāo)本處理前后的交叉配血結(jié)果

3 討論

冷凝集素以免疫球蛋白（IgM）形式存在于血清中，是紅細(xì)胞自身免疫學(xué)冷抗體，該物質(zhì)在4℃活性最高。相關(guān)研究 表明冷凝激素可直接作用紅細(xì)胞抗原，健康人血清冷凝集素效價較低（<1∶16），室溫下無活性，對紅細(xì)胞不會造成影響。病理條件如肺炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、貧血、腫瘤性疾病等，患者血清冷凝集素的含量上升，效價多超過1∶64，20℃的活性較強(qiáng)，影響紅細(xì)胞功能，可能出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，對人體造成不同程度傷害 。另外高效價冷凝集素還會導(dǎo)致血型鑒定困難，給交叉配血造成不利影響。ABO 血型鑒定和交叉配血是臨床輸血的基礎(chǔ)，循環(huán)血量不足、貧血或失血過多的患者均需要接受輸血治療，輸血前首先保證供血者和受血者的血型需相同，然后才可進(jìn)行交叉配血，確定完全一致后方可輸血。這就要求臨床上加強(qiáng)對血型鑒定的重視，大量報道［5，6］指出高效價冷凝集素可導(dǎo)致血型鑒定困難，是影響輸血的重要因素。本研究中的200 例患者血清冷凝集素均為高效價，在未接受洗滌和吸收前，經(jīng)鹽水法無法鑒定獲得準(zhǔn)確的血型，正反定型不相符，該結(jié)果說明高效價冷凝集素會導(dǎo)致血型鑒定困難。200 例患者洗滌吸收前的交叉配血結(jié)果均為凝集，說明高效價冷凝集素會導(dǎo)致交叉配血困難。根據(jù)凝集反應(yīng)理論，供血者和受血者進(jìn)行交叉配血試驗要確保兩者血液混合不發(fā)生凝集，從而確保安全輸血。

血型的正確鑒定是交叉配血的基礎(chǔ)，而要確定高效價冷凝集素患者的血型，就要將該因素進(jìn)行排除，以保證血型鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性。溫度是控制冷凝集素活力的關(guān)鍵點，相關(guān)報道 指出溫度低于31℃，冷凝集素可作用紅細(xì)胞抗原，發(fā)生紅細(xì)胞凝集反應(yīng)，隨著溫度的升高，冷凝集素的活力消失。感染、腫瘤、自身免疫和血液系統(tǒng)疾病體內(nèi)冷凝集素升高可能和紅細(xì)胞抗原性改變有關(guān) 。200 例高效價冷凝集素的血樣經(jīng)洗滌和吸收處理后再進(jìn)行血型鑒定和交叉配血，均獲得了準(zhǔn)確結(jié)果。處理血樣的目的就是排除高效價冷凝集素的干擾，進(jìn)而確保血型鑒定和交叉配血。筆者認(rèn)為，當(dāng)檢查血型時出現(xiàn)正反定型不符的情況首先要考慮冷凝集素效價過高情況，冷凝集素效價檢測可以證實。檢驗人員在工作中難免遇到該類病例，在進(jìn)行血型鑒定時要注意：①溫度因素，高效價冷凝集素多出現(xiàn)于春冬季節(jié)，實驗室檢測可將樣本置于37℃水浴箱后再檢測。②高效價冷凝集素導(dǎo)致配血不和，主要是主側(cè)管凝集（多為弱凝集），孵育加溫后基本消除，注意鑒別。③正反定型結(jié)果不符時，需進(jìn)一步選擇定型試驗，聚凝胺法、吸收放散試驗等。④輸血患者，術(shù)前須測定冷凝集素效價，必須確保輸入同型紅細(xì)胞血液，且輸入過程中要保溫緩緩滴入，以保證輸血的安全有效。以往多數(shù)報道［9，10］僅選擇1 例患者進(jìn)行報告，本研究擴(kuò)大了研究例數(shù)，進(jìn)步說明洗滌和吸收處理可有效排除高效價冷凝集素，為該類血型的準(zhǔn)確鑒別提供技術(shù)保障。

綜上所述，高效價冷凝集素會導(dǎo)致血型鑒定困難，影響交叉配血結(jié)果，臨床工作中應(yīng)仔細(xì)對待分析異常結(jié)果，正確分析原因，保證臨床檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，以減少醫(yī)療糾紛的發(fā)生。

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