伊 凡 何小艷 郭紅梅 曾韋蘋 柳 靜 曾斌芳

(1 新疆醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院，烏魯木齊，830011；2 新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院，烏魯木齊，830000；3 新疆中醫(yī)學(xué)院，烏魯木齊，830011)

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養(yǎng)陰活胃合劑對(duì)CAG大鼠胃黏膜細(xì)胞TLRs及相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響

伊 凡1何小艷1郭紅梅2曾韋蘋1柳 靜1曾斌芳3

(1 新疆醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院，烏魯木齊，830011；2 新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院，烏魯木齊，830000；3 新疆中醫(yī)學(xué)院，烏魯木齊，830011)

目的：觀察養(yǎng)陰活胃合劑對(duì)CAG大鼠胃黏膜細(xì)胞TLRs及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響，揭示養(yǎng)陰活胃合劑治療CAG的治療途徑與作用靶點(diǎn)，分別從分子水平、蛋白水平闡述養(yǎng)陰活胃合劑治療CAG的作用機(jī)制，并通過(guò)測(cè)定炎癥因子的變化情況觀察養(yǎng)陰活胃合劑在抗炎方面的作用。方法：將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為6組：空白對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組及中藥低劑量組、中劑量組、高劑量組，每組16只。除空白對(duì)照組常規(guī)飼養(yǎng)、自由進(jìn)食水之外，其余5組將2 g水楊酸鈉加入100 mL的30%乙醇溶液中，給大鼠灌胃，1次/d，3 mL/次，配合隔日喂食不禁水法建立大鼠萎縮性胃炎模型，模型復(fù)制成功后中藥治療低、中、高劑量組分別喂飼養(yǎng)陰活胃合劑水煎劑0.74 g/kg·d、1.48 g/kg·d和2.22 g/kg·d。12周后測(cè)定血清中白細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、干擾素-β(IFN-β)誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(NOS2)四種炎癥因子含量，測(cè)定TLRs及其下游轉(zhuǎn)導(dǎo)元件mRNA及蛋白的含量。結(jié)果：養(yǎng)陰活胃合劑能夠改善大鼠胃黏膜病理狀態(tài)，使病變胃黏膜趨于正常。與空白對(duì)照組比較，各組炎癥因子及TLRs及其下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)元件蛋白及mRNA含量均明顯升高(P<0.05)，證明模型復(fù)制成功。與模型組相比，中藥高劑量組TNF-α、IL-6、NOS2含量均明顯降低，陽(yáng)性藥物對(duì)照組及各中藥劑量組對(duì)TLRs及其下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)元件蛋白及mRNA含量均有不同程度的降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而各養(yǎng)陰活胃劑量組之間比較，中藥中劑量組IFN-β降低，中藥高劑量組TLRs及其下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)元件蛋白及mRNA含量均有不同程度下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：1)養(yǎng)陰活胃合劑可以通過(guò)調(diào)控TLR樣受體及其下游轉(zhuǎn)導(dǎo)元件基因及蛋白水平，降低因TLRs通路激活所釋放的炎癥因子對(duì)胃黏膜的損傷，從而達(dá)到治療慢性萎縮性胃炎的目的。2)養(yǎng)陰活胃合劑可降低慢性萎縮性胃炎大鼠血清中炎癥因子水平，而抑制炎性反應(yīng)可能有助于慢性萎縮性胃炎病情的改善。

慢性萎縮性胃炎；養(yǎng)陰活胃合劑；TLRs受體；轉(zhuǎn)導(dǎo)元件；炎性因子

慢性萎縮性胃炎(Chronic Atrophic Gastritis，CAG)是慢性胃炎諸多分類中的一種，是指胃黏膜上皮細(xì)胞遭受反復(fù)損害而導(dǎo)致鏡下胃黏膜產(chǎn)生病理性改變的疾病，具體病理表現(xiàn)為胃黏膜固有腺體減少，伴或不伴纖維替代、腸腺化生和/或假幽門腺化生的一種慢性胃部疾病[1]。1978年世界衛(wèi)生組織將本病歸為癌前狀態(tài)或癌前疾病的范疇，而在CAG基礎(chǔ)上伴有上皮化生(Intestinal Metaplasia，IM)或異型增生(Dysplasia，Dys)等病理表現(xiàn)者，轉(zhuǎn)癌率高達(dá)4%～12%[2]。歷代醫(yī)家多將本病歸屬于“痞滿”“噯氣”“胃脘痛”和“嘈雜”等范疇?，F(xiàn)代醫(yī)家普遍認(rèn)為CAG的發(fā)生是多種致病因素綜合作用的結(jié)果，但對(duì)CAG的發(fā)病機(jī)制尚無(wú)準(zhǔn)確闡述。目前大多認(rèn)為本病的發(fā)生與幽門螺旋桿菌(Helicobacter Pylori，Hp)感染[3]、膽汁返流[4]、免疫因素、低維生素飲食[5]、年齡及遺傳因素有關(guān)[6]。近期研究結(jié)果表明，CAG的發(fā)病除與上述致病因素相關(guān)外，與胃黏膜營(yíng)養(yǎng)因子缺乏、血管活性因子與胃黏膜微循環(huán)的改變、維生素缺乏、Toll樣受體(TLRs)啟動(dòng)的炎性信號(hào)通路等[7]均有一定相關(guān)性，并且CAG患者胃黏膜某些基因的表達(dá)與健康人群存在一定差異，提示CAG患者胃黏膜細(xì)胞在某些基因表達(dá)水平上處于相對(duì)不穩(wěn)定狀態(tài)，并且與免疫機(jī)制的參與有關(guān)[8]。

TLRs(Toll-like Receptor，TLR)是一類新近發(fā)現(xiàn)的模式識(shí)別受體(Pattern Recognition Receptor，PRR)，參與人體先天性免疫，在天然免疫反應(yīng)中發(fā)揮著極為重要的作用，它是人體抵御外來(lái)侵襲的第一道屏障[9]。免疫系統(tǒng)通過(guò)釋放多種細(xì)胞因子和化學(xué)因子來(lái)保護(hù)臟器抵御不同的損傷，而TLRs又能通過(guò)激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路而釋放大量的炎性因子，產(chǎn)生一系列疾病。微生物感染機(jī)體時(shí)，TLRs啟動(dòng)的炎性信號(hào)通路誘導(dǎo)相關(guān)基因表達(dá)，產(chǎn)生炎性反應(yīng)[10]。研究發(fā)現(xiàn)，大鼠消化系黏膜上結(jié)構(gòu)性表達(dá)主要有TLR2及TLR4，其中TLR4主要在遠(yuǎn)端結(jié)腸和胃表達(dá)，而TLR2主要在近端結(jié)腸上表達(dá)，髓樣分化因子88(MyD88)是TLRs轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中關(guān)鍵的轉(zhuǎn)接分子，是TLRs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的關(guān)鍵靶分子，并且它在整個(gè)消化系統(tǒng)表達(dá)一致[11]。由MyD88承接的轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑稱為MyD88依賴途徑，是幾乎所有TLRs(TLR3除外)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的共同通路，這一信號(hào)通路能調(diào)節(jié)多種炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)TNF-α、IL-1、IL-6等炎性細(xì)胞因子大量釋放，最終對(duì)相關(guān)臟器受到損傷[12-13]。Myd88非依賴途徑由β干擾素TIR結(jié)構(gòu)域銜接蛋白(TRIF)聯(lián)接，主要存在于TLR3和TLR4通路中，TLR3可以直接綁定TRIF，而TLR4則是以TRIF相關(guān)接頭分子(TRAM)作為橋梁間接招募TRIF從而釋放大量炎癥因子，產(chǎn)生炎性反應(yīng)[14-15]。

本課題采用現(xiàn)代藥理學(xué)的先進(jìn)方法和技術(shù)，在養(yǎng)陰活胃合劑藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)和臨床療效的基礎(chǔ)之上，以治療慢性萎縮性胃炎的常用藥物維酶素為陽(yáng)性對(duì)照，觀察在養(yǎng)陰活胃合劑的作用下，CAG大鼠胃黏膜細(xì)胞TLRs及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路會(huì)產(chǎn)生怎樣的變化，以揭示養(yǎng)陰活胃合劑治療CAG的治療途徑與作用靶點(diǎn)，分別從基因水平、蛋白水平闡述養(yǎng)陰活胃合劑治療CAG的作用機(jī)制，并通過(guò)測(cè)定炎癥因子的變化情況觀察養(yǎng)陰活胃合劑在抗炎方面的作用，揭示其防治CAG的科學(xué)內(nèi)涵。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)(SPF)成年雄性Wistar大鼠96只，質(zhì)量150～200 g(由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[使用許可證號(hào)：SYXK(新)2003-0001])。

1.2 儀器 主要試劑與儀器：DAB顯色試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司，批號(hào)：BD205)，TRAM1(A-15)：Sc-87481，Anti-TRIF Antibody(ab13810)，Anti-NF-κB antibody(ab16502)，TRNzol總RNA提取試劑(田根生化科技有限公司，批號(hào)DP405-2)，2×Taq PCR Master Mix(田根生化科技有限公司,批號(hào)：KT201-02)，TGL18C冷凍離心機(jī)(長(zhǎng)沙市英泰儀器有限公司)，BIO-RAD實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(No.785BR04374)，相關(guān)檢測(cè)試劑盒(武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司生產(chǎn))。

1.3 受試藥物 中藥養(yǎng)陰活胃合劑(阿魏、蘆根、海螵蛸、茯苓、砂仁、莪術(shù)、炙甘草、雞內(nèi)金、炙遠(yuǎn)志、白術(shù)、旋覆花等)由新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)藥研究院提供。維酶素片(湖北綠金子藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)：120901)。

2 方法

2.1 造模 將96只實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為6組：空白對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性藥物(維酶素)對(duì)照組及中藥高劑量組、中藥中劑量組、中藥低劑量組，每組16只。大鼠標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，空白對(duì)照組大鼠自由進(jìn)食水、常規(guī)飼養(yǎng)，其余5組大鼠均予以造模因素復(fù)制CAG大鼠模型，具體方法如下：將2 g水楊酸鈉加入100 mL的30%乙醇溶液中灌胃，1次/d，1 mL/100 g，并于灌胃前1 h禁水、禁食，復(fù)制CAG大鼠模型，所有大鼠在施加造模因素的同時(shí)配合隔日禁食不禁水法[25]。模型復(fù)制12周后結(jié)束，每組隨機(jī)處死2只大鼠，取胃黏膜病理以判斷CAG模型是否復(fù)制成功，參照《2000年全國(guó)慢性胃炎研討會(huì)》制定的病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

2.2 給藥 模型復(fù)制成功后，空白對(duì)照組喂飼生理鹽水，模型組繼續(xù)施以上述造模因素，中藥治療低、中、高劑量組分別喂飼養(yǎng)陰活胃合劑水煎劑0.74 g/kg·d、1.48 g/kg·d和2.22 g/kg·d，根據(jù)人與動(dòng)物之間給藥劑量換算標(biāo)準(zhǔn)，灌胃量如下：低劑量：1.8 mL/kg·d，中劑量：3.6 mL/kg·d，高劑量：7.2 mL/kg·d。對(duì)照組予維酶素0.86 g/kg·d灌胃，共12周。

2.3 檢測(cè)指標(biāo) 胃黏膜病理采用蘇木素-伊紅(HE)染色法，胃黏膜TLRs及其下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)元件MyD88、TRAF6、TRIF、TRAM、 mRNA測(cè)定采用Real-time PCR法，胃黏膜TLRs及其下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)元件MyD88、TRAF6、TRIF、TRAM蛋白表達(dá)的測(cè)定采用免疫組織化學(xué)法，炎癥因子TNF-α、IFN-β、IL-6、NOS2的測(cè)定采用ELISA法，采用逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA使用Thermo反轉(zhuǎn)錄試劑盒，上下游引物序列見表1。

表1 上下游引物序列

圖1 空白對(duì)照組(HE×200倍) 圖2 模型組(HE×200倍)

圖3 陽(yáng)性藥物對(duì)照組(HE×200倍) 圖4 中藥高劑量組(HE×200倍)

圖5 中藥中劑量組(HE×200倍) 圖6 中藥低劑量組(HE×200倍)

3 結(jié)果

3.1 病理組織學(xué)改變

HE染色結(jié)果顯示空白對(duì)照組大鼠胃黏膜上皮完整，固有膜內(nèi)血管纖維間質(zhì)正常，細(xì)胞呈單柱狀，可見排列整齊的腺體，黏膜固有層可見少量嗜酸性粒細(xì)胞散在，無(wú)增生和化生現(xiàn)象，肌層無(wú)明顯變化(圖1)。模型組大鼠胃黏膜上皮表面可見壞死上皮細(xì)胞；腺體有不同程度的萎縮或不完全型增生，腺體間隙增寬，腸化；黏膜變薄，黏膜固有層內(nèi)見較多炎性細(xì)胞，毛細(xì)血管充血，血管擴(kuò)張，肌層變薄(圖2)。陽(yáng)性藥物對(duì)照組大鼠胃黏膜較薄，可見腺體數(shù)量減少，排列稀疏，間質(zhì)有淋巴細(xì)胞局灶性浸潤(rùn)(圖3)。中藥高劑量組胃黏膜較陽(yáng)性藥物對(duì)照組完整，腺體排列較整齊，可見散在淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，未見腸化(圖4)。中藥中劑量組胃黏膜較陽(yáng)性藥物對(duì)照組完整，腺體數(shù)量略有減少，腺體排列較整齊，間質(zhì)有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，未見腸化(圖5)。中藥低劑量組胃黏膜較薄，腺體數(shù)量減少，排列較稀疏，可見不同程度的萎縮，固有層可見散在淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，未見腸化(圖6)。

3.2 胃黏膜TLR2、TLR4 mRNA及蛋白的測(cè)定 與空白對(duì)照組相比，模型組TLR2、TLR4蛋白及m RNA含量均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明大鼠胃黏膜在酒精刺激下，TLR2及TLR4基因及蛋白表達(dá)水平均有明顯升高；與模型組相比，陽(yáng)性藥物對(duì)照組、中藥高劑量組、中藥中劑量組及中藥低劑量組TLR2、TLR4 mRNA及蛋白含量均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明以上干預(yù)因素對(duì)CAG大鼠胃黏膜的TLR2及TLR4含量有下調(diào)作用；與陽(yáng)性藥物對(duì)照組相比，中藥高劑量組TLR2蛋白及mRNA含量均降低，中藥高劑量TLR4 mRNA含量降低，中藥中劑量組TLR4蛋白含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明高劑量養(yǎng)陰活胃合劑對(duì)TLR2、TLR4蛋白及mRNA含量的下調(diào)作用優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照藥物維酶素，而中劑量養(yǎng)陰活胃合劑對(duì)TLR4蛋白的下調(diào)作用更明顯；養(yǎng)陰活胃各劑量組之間比較，中藥高劑量組對(duì)TLR2、TLR4 mRNA及蛋白的下調(diào)作用更為明顯。見表2。

3.3 胃黏膜TRIF、TRAM mRNA及蛋白的測(cè)定 與空白組比較，TRIF、TRAM mRNA及蛋白含量均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明造模因素造成大鼠胃黏膜TRIF、TRAM基因及蛋白含量升高；與模型組相比，中藥高劑量組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組TRIF及TRAM mRNA含量明顯降低，中藥中劑量組TRIF蛋白含量明顯降低，中藥高劑量組TRAM蛋白含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明中藥養(yǎng)陰活胃合劑和維酶素均可對(duì)TRIF及TRAM mRNA產(chǎn)生下調(diào)作用；與陽(yáng)性藥物對(duì)照組相比，中藥中劑量組TRIF蛋白含量明顯降低，中藥高劑量組TRAM蛋白含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明中劑量養(yǎng)陰活胃合劑對(duì)TRIF蛋白調(diào)控更明顯，高劑量養(yǎng)陰活胃合劑對(duì)TRAM蛋白的調(diào)控更加明顯，而中藥養(yǎng)陰活胃合劑對(duì)TRIF及TRAM mRNA的調(diào)控與陽(yáng)性藥物維酶素相當(dāng)；與中藥高劑量組相比，其他兩個(gè)劑量組對(duì)TRIF、TRAM mRNA及TRAM蛋白的調(diào)控不及高劑量養(yǎng)陰活胃合劑，而中劑量養(yǎng)陰活胃合劑對(duì)TRIF蛋白的調(diào)控優(yōu)于高劑量。見表3。

3.4 胃黏膜MyD88、TRAF6 mRNA及蛋白的測(cè)定 與空白組比較，MyD88、TRAF6mRNA及蛋白含量均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明造模因素造成大鼠胃黏膜MyD88、TRAF6基因及蛋白的水平升高；與模型組相比，陽(yáng)性藥物對(duì)照組、中藥高劑量組、中藥中劑量組、中藥低劑量組MyD88、TRAF6mRNA含量降低，中藥高劑量組、中藥中劑量組及中藥低劑量組MyD88蛋白含量降低，中藥高劑量組及中藥中劑量組TRAF6蛋白含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明養(yǎng)陰活胃合劑水煎劑和陽(yáng)性對(duì)照藥物維酶素對(duì)MyD88、TRAF6mRNA及蛋白水平均有不同程度的下調(diào)作用；與陽(yáng)性藥物對(duì)照組相比，中藥高劑量組MyD88、TRAF6mRNA含量降低，中藥高劑量組MyD88蛋白含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明高劑量養(yǎng)陰活胃合劑對(duì)MyD88、TRAF6 mRNA的調(diào)控優(yōu)于維酶素，對(duì)MyD88蛋白的調(diào)控亦優(yōu)于維酶素；各不同劑量的中藥對(duì)以上轉(zhuǎn)導(dǎo)元件的影響以中藥高劑量組更加明顯。見表4。

3.5 炎癥因子IFN-β、TNF-α、IL-6、NOS2的測(cè)定 模型組大鼠血清IL-6、TNF-α、IFN-β及NOS2與空白對(duì)照組大鼠相比均有所升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，證明模型復(fù)制成功，大鼠有明顯的炎癥存在；而養(yǎng)陰活胃合劑可使大鼠血清中4種炎癥因子均有所降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中又以養(yǎng)陰活胃合劑高劑量組降低更為明顯，說(shuō)明養(yǎng)陰活胃合劑可降低CAG大鼠血清中炎癥因子水平。見表5。

4 討論

目前有關(guān)CAG的流行病學(xué)資料較少，但目前比較一致的看法是本病在胃癌高發(fā)地如東亞、東歐、南美等地區(qū)多發(fā)，且患病人群變異性較大，CAG及腸化的患病率相對(duì)較高，且無(wú)明顯性別差異；我國(guó)自開展電子胃鏡和纖維胃鏡檢查以來(lái)，CAG檢出率出現(xiàn)上升趨勢(shì)，占胃鏡受檢患者總數(shù)的7.5%～13.8%，而在全世界范圍內(nèi)老年人發(fā)病率更高，且發(fā)病率與年齡呈正相關(guān)，國(guó)際衛(wèi)生組織調(diào)查發(fā)現(xiàn)20～50歲患病率僅10%左右，而51～65歲則高達(dá)50%以上[16-17]。

表2 CAG大鼠胃黏膜TLR2、TLR4 mRNA及蛋白的影響

注：n為各組大鼠數(shù)量；與空白對(duì)照組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，▲P<0.05；與高劑量組比較◆P<0.05。

表3 CAG大鼠胃黏膜TRIF、TRAM mRNA及蛋白的影響

注：n為各組大鼠數(shù)量；與空白對(duì)照組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，▲P<0.05；與高劑量組比較◆P<0.05。

表4 CAG大鼠胃黏膜TRAF6、MyD88 mRNA及蛋白的影響

注：n為各組大鼠數(shù)量；與空白對(duì)照組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，▲P<0.05；與高劑量組比較◆P<0.05。

表5 CAG大鼠血清IFN-β、TNF-α、IL-6、NOS2的影響

注：n為各組大鼠數(shù)量；與空白對(duì)照組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，▲P<0.05；與高劑量組比較◆P<0.05。

本課題中空白對(duì)照組大鼠胃黏膜上皮完整，細(xì)胞排列整齊，無(wú)上皮細(xì)胞脫落或缺損，固有層腺體排列整齊，形狀規(guī)則，僅見少量散在淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，黏膜平滑肌呈環(huán)形排列，黏膜下層及漿膜層少數(shù)血管擴(kuò)張充血。模型組大鼠胃黏膜上皮表面可見壞死脫落的上皮細(xì)胞，腺體不同程度的萎縮減少及腸上皮化生，局部腺體有異常增生，表現(xiàn)為腺體形狀不規(guī)則，呈囊泡狀及異性增生，腺體排列較緊密，層次增多，固有膜見散在淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，毛細(xì)血管明顯擴(kuò)張充血，肌層變薄。陽(yáng)性藥物對(duì)照組胃黏膜較薄，腺體數(shù)量減少，排列稀疏，間質(zhì)有淋巴細(xì)胞局灶性浸潤(rùn)。中藥高劑量組胃黏膜較陽(yáng)性藥物對(duì)照組完整，腺體排列較整齊，可見散在淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，未見腸化。中藥中劑量組和中藥低劑量組可見胃黏膜較薄，腺體數(shù)量減少，排列較稀疏，可見不同程度的萎縮，固有層可見散在淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，未見腸化。本研究結(jié)果提示養(yǎng)陰活胃合劑能夠改善大鼠胃黏膜病理狀態(tài)，使病變胃黏膜趨于正常。結(jié)果表明，養(yǎng)陰活胃合劑可以使慢性萎縮性胃炎大鼠胃黏膜病理趨于正常，并且能夠下調(diào)胃黏膜TLR2、TLR4 mRNA及蛋白水平，并且能夠使TLRs轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中下游轉(zhuǎn)導(dǎo)元件mRNA及蛋白含量降低，尤其抑制了MyD88依賴型通路中的轉(zhuǎn)導(dǎo)元件mRNA及蛋白的表達(dá)，使炎癥因子水平降低，達(dá)到治療慢性萎縮性胃炎的目的。

CAG是一種以胃黏膜變薄甚至萎縮、固有腺體減少或消失為病理特征的慢性胃病，病理檢查可見伴有腸上皮化生、不典型增生等特征，因本病臨床癥狀不典型，故臨床診療過(guò)程中與慢性淺表性胃炎難以區(qū)別，但本病危害較淺表性胃炎更重，特別是胃黏膜萎縮并伴有腸上皮化生或不典型增生者有發(fā)展成胃癌的傾向[26]。CAG是多種病理因素綜合作用的結(jié)果，西醫(yī)目前對(duì)本病的治療以對(duì)癥治療、消除病因?yàn)橹?，尚無(wú)明確報(bào)道指出某種藥物能夠使已經(jīng)萎縮的胃黏膜恢復(fù)正常。中醫(yī)藥是前代醫(yī)家留給我們的寶貴財(cái)富，中醫(yī)在其整體觀念、辨證論治的思維方法指導(dǎo)下，對(duì)本病的治療有著獨(dú)到的優(yōu)勢(shì)。祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)以四診合參、辨證施治為診療特點(diǎn)，因人而異，辨證論治，在對(duì)癥治療CAG消除癥狀方面有著獨(dú)到的優(yōu)勢(shì)。導(dǎo)師曾斌芳教授結(jié)合多年臨床經(jīng)驗(yàn)，在中醫(yī)養(yǎng)陰活血、化痰和胃原則下，結(jié)合多年臨床經(jīng)驗(yàn)，精選蘆根、白術(shù)、雞內(nèi)金、烏賊骨、莪術(shù)、牡丹皮、旋覆花、炙遠(yuǎn)志、砂仁、茯苓、炙甘草等藥，組成用于治療CAG所致的胃痛、胃痞的養(yǎng)陰活胃合劑，臨床療效頗佳。組方中蘆根“性甘、味寒，歸肺、胃經(jīng)”，功能清熱除煩、生津止嘔、利尿。既可養(yǎng)陰、治療“燥化”癥狀，又可用于和胃降逆，故為君藥；臣藥配伍莪術(shù)、牡丹皮、海螵蛸取其活血滋陰之意，同時(shí)配伍白術(shù)、茯苓益氣健脾，化濕助運(yùn)；佐以旋覆花、炙遠(yuǎn)志疏理肝氣，化痰通絡(luò)，雞內(nèi)金、砂仁、阿魏健脾和胃，消食化積，炙甘草為方中使藥，起到調(diào)和諸藥的作用。

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(2015-07-07收稿 責(zé)任編輯：張文婷)

Effects of Yangyin Huowei Mixtureture on TLRs Cells and Signal Transduction Pathway in Rats with Chronic Atrophic Gastritis

Yi Fan1, He Xiaoyan1, Guo Hongmei2, Zeng Weiping1, Liu Jing1, Zeng Binfang2

(1GraduateSchollofXinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China; 2AffiliatedHospitalofTraditionalChineseMedicine,Urumqi830000,China; 3CollegeofTraditionalChinesemedicine,Urumqi830011,China)

Objective:To observe the effect of Yangyin Huowei mixture on gastric mucosal cells and TLRs signal transduction pathway of rats with Chronic Atrophic Gastritis(CAG). In addition, to reveal the mechanism of Yangyin Huowei mixture in the treatment of CAG from molecular level and protein level and its anti inflammation changes from inflammatory factors.Methods:To randomly divide the experimental rats into 6 groups: blank control group, model group, positive drug group, low dose of Chinese medicine group, medium dose group, and high dose group, with 16 rats in each group. Except for the blank control group, which was given conventional breeding and free access to food and water, the other groups were given 2 g sodium salicylate adding into 100 mL 30% ethanol solution, 1 time a day, each time 3 mL. With feeding on alternate days without water, the establishment of CAG rats model were successfully reproduced. Yangyin Huowei mixture of water decoction of 0.74 g/kg/d, 1.48 g/kg/d, and 2.22 g/kg/d were given respectively to low dose of Chinese medicine group, medium dose group, and high dose group. After 12 weeks, to determine the level of serum IL-6, TNF-α, IFN-β and NOS2 inflammatory factor and measure the original TLRs and downstream transduction mRNA and protein content.Results:Yangyin Huowei mixture can improve CAG and gastric mucosa lesion. Compared with blank control group, inflammatory factor, TLRs and its downstream signal transduction proteins and mRNA content in each group were significantly increased (P<0.05), which proved that the models were reproduced successfully. Compared with model group, TNF-α, IL - 6, NOS2 levels of high dose group were significantly lower, and in positive drug control group and the traditional Chinese medicine dose group, TLRs and its downstream signal transduction proteins and mRNA content also reduced, besides, the difference was statistically significant(P<0.05). In the comparison among Chinese medicine groups, IFN-β decreased in middle-dose group, and in high dose group, TLRs and its downstream signal transduction proteins and mRNA content declined, and the difference was statistically significant(P<0.05).Conclusion:(1) Yangyin Huowei mixture can improve original sample TLR receptors and their downstream transduction genes and protein level, reduce the release of inflammatory factor by TLRs pathway activation, and thus to treat CAG. (2) Yangyin Huowei mixture can reduce the serum level of inflammatory factors of CAG, and this may contribute to the improvement of CAG.

Yangyin Huowei mixture; Chronic atrophic gastritis; TLRs receptor; Original transduction; Inflammatory cytokines

國(guó)家自然科學(xué)基金“養(yǎng)陰活胃合劑治療慢性萎縮性胃炎作用機(jī)制研究”(編號(hào)：81160431)

伊凡(1989—)，男，在讀碩士，研究方向：中醫(yī)肝膽脾胃疾病的研究

曾斌芳，男，博士，教授，主任醫(yī)師，博士研究生導(dǎo)師，研究方向：中醫(yī)肝膽脾胃疾病的研究

R285.5

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.12.027