葛 方，鄭 琢，蕭 偉，王振中，黃文哲，楊中林*

(1.中國藥科大學(xué) 天然藥物活性物質(zhì)與功能國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 210009；2.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇 連云港 222001)

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遠(yuǎn)志及其炮制品解酒作用研究

葛 方1，鄭 琢1，蕭 偉2，王振中2，黃文哲2，楊中林1*

(1.中國藥科大學(xué) 天然藥物活性物質(zhì)與功能國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 210009；2.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇 連云港 222001)

目的：研究遠(yuǎn)志及其炮制品(甘草炙和蜜炙)對(duì)急性酒精中毒小鼠的防醉解酒作用。方法：ICR小鼠給藥30min后，灌胃給予52°白酒誘導(dǎo)建立小鼠急性酒精中毒模型，并對(duì)小鼠共濟(jì)失調(diào)發(fā)生潛伏期、攀附時(shí)間及醉酒率進(jìn)行觀察，并檢測(cè)肝組織乙醇脫氫酶(ADH)的活性。結(jié)果：遠(yuǎn)志及其炮制品水提液可顯著改善急性酒精中毒小鼠的醉酒情況，其中甘草炙遠(yuǎn)志高劑量組可顯著延長共濟(jì)失調(diào)發(fā)生潛伏期，延長小鼠攀附時(shí)間，降低醉酒率，并提高肝組織乙醇脫氫酶(ADH)活性。結(jié)論：甘草炙遠(yuǎn)志高劑量組具有顯著的解酒效果。

遠(yuǎn)志；炮制品；急性酒精中毒；解酒；乙醇脫氫酶

急性酒精中毒是指短時(shí)間內(nèi)飲入過量的酒，出現(xiàn)先興奮后抑制的狀態(tài)，中毒后主要出現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制，進(jìn)而造成對(duì)呼吸和循環(huán)系統(tǒng)的影響。急性酒精中毒輕者可引起身體不適，影響正常工作；重者可造成臟器功能損害，甚至危及生命[1]。我國酒文化源遠(yuǎn)流長，醉酒已成為一種普遍現(xiàn)象，急性酒精中毒的發(fā)病率亦隨之增加，并已成為顯著的公共衛(wèi)生問題。中醫(yī)藥治療醉酒方法優(yōu)勢(shì)獨(dú)到，研究中藥材的解酒功效具有顯著應(yīng)用價(jià)值。

遠(yuǎn)志為遠(yuǎn)志科植物遠(yuǎn)志(PolygalatenuifoliaWilld.)或卵葉遠(yuǎn)志(PolygalasibiricaL.)的干燥根[2]，具有益智、抗衰老和腦保護(hù)等廣泛藥理作用，并具有解酒、利膽利尿、消腫、保護(hù)肝臟的作用[3-5]。但目前尚無遠(yuǎn)志不同炮制品解酒作用比較的相關(guān)研究。經(jīng)考證，遠(yuǎn)志炮制方法較多，本文主要對(duì)生遠(yuǎn)志、甘草炙遠(yuǎn)志、蜜炙遠(yuǎn)志三種藥材的解酒作用進(jìn)行初步探究。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器

BS124S型萬分之一電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)，80-2型低速離心機(jī)(江蘇金壇市金城國勝實(shí)驗(yàn)儀器廠)，TU-1900雙光束紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)，Tissue-Tearor型手持高速組織勻漿機(jī)(北京市世安科興科技開發(fā)有限公司)，Epoch型酶標(biāo)儀(美國BioTek)，KD-160型鼠稱(TANITA公司)，HH-6型恒溫水浴鍋(常州國華電器有限公司)；96孔細(xì)胞培養(yǎng)板(Costar公司)，10μL、50μL、200μL和1 000μL的移液器(大龍醫(yī)療設(shè)備(上海)有限公司)，垂直金屬(孔徑0.6cm×0.6cm，長寬50cm×50cm)。

常用器具：手術(shù)器械、離心管、離心管架、燒杯、移液槍頭、注射器、小鼠灌胃針等。

1.2 試劑

遠(yuǎn)志(南京同仁堂藥店，批號(hào)：141204)，甘草(南京同仁堂藥店，批號(hào)：141207)；海王金樽(深圳市海王健康科技發(fā)展有限公司)，52℃紅星二鍋頭(北京紅星股份有限公司)；ADH試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20150113)，考馬斯亮藍(lán)試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20150109)。

1.3 動(dòng)物

ICR小鼠(上海杰思捷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司)，雄性，體重23～30g。小鼠飼養(yǎng)于(22±2)℃恒溫環(huán)境，給予12/12h間隔的明暗周期。飼養(yǎng)期間，給予充足食物和水。

1.4 實(shí)驗(yàn)樣品液制備

1.4.1 遠(yuǎn)志不同炮制品制備 根據(jù)2010版《中國藥典》相關(guān)記載進(jìn)行炮制。

1.4.2 遠(yuǎn)志不同炮制品水提液的制備 (1)生遠(yuǎn)志高劑量組水提液的制備：稱取生遠(yuǎn)志粗粉8.109 0g，加水浸泡2h，以水作為溶劑，加27倍量(分別為10倍量、9倍量、8倍量)，煎煮3次(分別為2h、1.5h、1h)，抽濾，合并濾液，常壓濃縮至30mL；加1%的CMC-Na溶液定容至60mL，即得濃度為0.135 15g生藥/mL的藥液，給藥劑量為2.703 0g生藥/kg。

(2)生遠(yuǎn)志低劑量組水提液的制備：稱取生遠(yuǎn)志粗粉4.054 5g，制備方法同上，即得濃度為0.0675 75g生藥/mL的藥液，給藥劑量為1.351 5g生藥/kg。

按上述方法制備甘草炙遠(yuǎn)志高劑量組水提液、甘草炙遠(yuǎn)志低劑量組水提液、蜜炙遠(yuǎn)志高劑量組水提液、蜜炙遠(yuǎn)志低劑量組水提液。

1.5 陽性藥的配制

取2片海王金樽(2.0g)，研成細(xì)粉，精密稱取1.35g，加0.5%的CMC-Na溶液20mL，超聲混勻，得濃度為0.067 5g/mL的藥液，給藥劑量為1.35g/kg。

1.6 實(shí)驗(yàn)方法

1.6.1 動(dòng)物分組 ICR小鼠，雄性，體重23～30g，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，按體重隨機(jī)分為空白組、模型組、陽性組、生遠(yuǎn)志高劑量組、生遠(yuǎn)志低劑量組、甘草炙遠(yuǎn)志高劑量組、甘草炙遠(yuǎn)志低劑量組、蜜炙遠(yuǎn)志高劑量組、蜜炙遠(yuǎn)志低劑量組各11只。

1.6.2 小鼠急性酒精中毒模型建立 各組小鼠實(shí)驗(yàn)前禁食(不禁水)12h?？瞻捉M及模型組小鼠按0.2mL/10g的標(biāo)準(zhǔn)給予0.5%的CMC-Na溶液，同時(shí)各給藥組按0.2mL/10g的標(biāo)準(zhǔn)給予相應(yīng)藥液；給藥30min后，空白組按0.14mL/10g的標(biāo)準(zhǔn)給予生理鹽水，其他各組小鼠均按0.14mL/10g的標(biāo)準(zhǔn)灌胃給予52°紅星二鍋頭[6]。

1.7 實(shí)驗(yàn)各組藥液解酒防醉作用考察

1.7.1 實(shí)驗(yàn)各組藥液對(duì)急性酒精中毒小鼠運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性的影響——攀附實(shí)驗(yàn) 給酒后，將小鼠立即放在垂直懸掛金屬網(wǎng)(孔徑0.6cm×0.6cm，長寬50cm×50cm)的正中間(距上下左右邊緣各25cm)，金屬網(wǎng)距桌面20cm。

(1)記錄小鼠在金屬網(wǎng)上的攀附時(shí)間t1，即從小鼠放金屬網(wǎng)上開始計(jì)時(shí)直至小鼠從金屬網(wǎng)上掉落所持續(xù)的攀附時(shí)間，單位為秒(s)，記為共濟(jì)失調(diào)發(fā)生潛伏期。若小鼠持續(xù)攀附時(shí)間超過15min，均按15min記錄[7]。

(2)于給酒后0.5h、給酒后1.5h和給酒后3h分別重復(fù)上述操作。記錄小鼠在金屬網(wǎng)上的攀附時(shí)間，對(duì)于攀附時(shí)間超過10min的小鼠，其攀附時(shí)間均記為10min(即600s)。

1.7.2 實(shí)驗(yàn)各組藥液對(duì)急性酒精中毒小鼠翻正反射的影響——醉酒率 結(jié)合實(shí)驗(yàn)操作可行性，以小鼠1min內(nèi)能否進(jìn)行3次翻正反射為醉酒標(biāo)準(zhǔn)[7]，記錄給酒后0.5h、給酒后1.5h和給酒后3h的醉酒率。

1.7.3 實(shí)驗(yàn)各組藥液對(duì)急性酒精中毒小鼠肝中乙醇脫氫酶(ADH)的影響 于給酒灌胃6h后，將各組小鼠脫頸椎處死，取肝臟。肝臟取出后，在肝臟相同部位精密稱取0.2g肝組織，按重量(g)∶體積(mL)=1∶9加9倍體積的生理鹽水，制成10%的勻漿液，按試劑盒說明書測(cè)定乙醇脫氫酶(ADH)的活性。

1.8 統(tǒng)計(jì)方法

3.5 3 0 歲以上的男性開始關(guān)注心臟問題,且隨年齡增加,選擇心臟檢查的項(xiàng)目增多,此現(xiàn)象符合醫(yī)學(xué)建議。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 各組藥液對(duì)急性酒精中毒小鼠共濟(jì)失調(diào)發(fā)生潛伏期的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，小鼠灌胃給予52°白酒建立急性酒精中毒模型，與空白組比較，模型組差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說明造模成功；與模型組比較，陽性組(海王金樽組)、甘草炙遠(yuǎn)志高劑量組和蜜炙遠(yuǎn)志高劑量組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，生遠(yuǎn)志高劑量組差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。說明生遠(yuǎn)志高劑量組、甘草炙遠(yuǎn)志高劑量組和蜜炙遠(yuǎn)志高劑量組均有較好的解酒效果，有效延長急性酒精中毒小鼠的共濟(jì)失調(diào)發(fā)生潛伏期，延緩小鼠進(jìn)入醉酒昏睡期。結(jié)果見表1。

2.2 各組藥液對(duì)急性酒精中毒小鼠攀附時(shí)間的影響

小鼠灌胃給予52°白酒建立急性酒精中毒模型，與空白組比較，模型組差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說明造模成功。給酒后0.5h，與模型組比較，甘草炙遠(yuǎn)志高劑量組攀附時(shí)間增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；蜜炙遠(yuǎn)志高劑量組小鼠攀附時(shí)間有一定增加，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。給酒后1.5h，與模型組比較，各組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。給酒后3h，與模型組比較，甘草炙遠(yuǎn)志高劑量組攀附時(shí)間顯著增加(P<0.01)；生遠(yuǎn)志高劑量組、生遠(yuǎn)志低劑量組攀附時(shí)間有一定增加，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見表2。

表1 各組藥液對(duì)急性酒精中毒小鼠共濟(jì)失調(diào)

發(fā)生潛伏期的影響

組別共濟(jì)失調(diào)發(fā)生潛伏期(s)空白組900.000±0.000模型組294.83±26.531▲▲陽性組409.80±35.194*生遠(yuǎn)志高劑量組533.45±66.587**生遠(yuǎn)志低劑量組368.00±37.010甘草炙遠(yuǎn)志高劑量組425.90±37.505*甘草炙遠(yuǎn)志低劑量組244.60±10.358蜜炙遠(yuǎn)志高劑量組450.90±72.844*蜜炙遠(yuǎn)志低劑量組271.82±24.976

注：與空白組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.3 各組藥液對(duì)急性酒精中毒小鼠翻正反射的影響——醉酒率

與空白組比較，模型組醉酒率較高，說明造模成功。與模型組比較，生遠(yuǎn)志高劑量組和甘草炙遠(yuǎn)志高劑量組醉酒率較低，且給酒1.5h后，生遠(yuǎn)志高劑量組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以各項(xiàng)醉酒只數(shù)和醉酒率表示，結(jié)果見表3。

2.4 各組藥液對(duì)急性酒精中毒小鼠肝中乙醇脫氫酶(ADH)的影響

表2 各組藥液對(duì)急性酒精中毒小鼠攀附時(shí)間的影響 ±s，n=11)

注：與空白組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

表3 各組藥液對(duì)急性酒精中毒小鼠醉酒率的影響 ±s，n=11)

注：與空白組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與模型組比較，*P<0.05。

表4 各組藥液對(duì)急性酒精中毒小鼠肝中ADH活力的影響 ±s，n=11)

注：與空白組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果綜合分析

2.5.1 各藥效指標(biāo)試驗(yàn)結(jié)果 通過分析各藥效指標(biāo)試驗(yàn)結(jié)果，按頻次統(tǒng)計(jì)匯總。綜合行為學(xué)指標(biāo)及生化指標(biāo)(肝組織ADH活力)各組方出現(xiàn)頻次顯示，甘草炙遠(yuǎn)志高劑量組具有顯著的解酒效果。見表5。

2.5.2 各組方藥液對(duì)急性酒精中毒小鼠解酒效果的權(quán)重分析 對(duì)6個(gè)組方藥液急性酒精中毒小鼠共濟(jì)失調(diào)發(fā)生潛伏期(A)、給酒0.5h后攀附時(shí)間(B)、給酒1.5h后攀附時(shí)間(C)、給酒3h后攀附時(shí)間(D)和肝組織中ADH活力(E)的結(jié)果進(jìn)行權(quán)重分析，其解酒防醉效果趨勢(shì)一致，均為數(shù)值越大解酒防醉效果越好。權(quán)重方法為：[A×0.3+(B+C+D)×0.1+E×0.4]，其中權(quán)重結(jié)果數(shù)據(jù)越大，解酒效果越好。結(jié)果表明，生遠(yuǎn)志高劑量組和甘草炙遠(yuǎn)志高劑量組解酒效果顯著。結(jié)果見表6。

根據(jù)表5、表6數(shù)據(jù)綜合分析得出，甘草炙遠(yuǎn)志高劑量組具有顯著的解酒效果。

表5 各組藥液對(duì)急性酒精中毒小鼠各藥效指標(biāo)總結(jié) ±s，n=11)

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

表6 各組藥液對(duì)急性酒精中毒小鼠解酒效果權(quán)重分析 ±s，n=11)

3 討論

乙醇為強(qiáng)親神經(jīng)性毒物，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響顯著[12]。急性酒精中毒過程中可出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)功能異常，如步態(tài)蹣跚、共濟(jì)失調(diào)等癥狀。當(dāng)乙醇攝入體內(nèi)后，經(jīng)胃腸吸收入血，在肝臟進(jìn)行代謝，通過血液進(jìn)入全身循環(huán)，在肝臟中乙醇主要被乙醇脫氫酶(ADH)系氧化，少部分由微粒體的乙醇氧化系統(tǒng)(MEOS)酶系和過氧化物體系的過氧化氫酶系統(tǒng)代謝消化。本研究中，主要采用小鼠急性酒精中毒模型，觀察小鼠共濟(jì)失調(diào)發(fā)生潛伏期、不同時(shí)間點(diǎn)攀附時(shí)間和醉酒率，以此考察遠(yuǎn)志及其炮制品的抗神經(jīng)毒作用；檢測(cè)模型小鼠肝組織中ADH活性，以此來考察遠(yuǎn)志及其炮制品促進(jìn)乙醇代謝的作用。實(shí)驗(yàn)采用52°白酒成功誘導(dǎo)小鼠急性酒精中毒模型，與空白組比較，模型組差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，遠(yuǎn)志及其炮制品均具有延長共濟(jì)失調(diào)發(fā)生潛伏期、延長攀附時(shí)間、降低醉酒率和提高ADH活性的解酒效果，尤其是甘草炙遠(yuǎn)志，其高劑量組解酒防醉效果顯著(P<0.05)。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，遠(yuǎn)志具有抑制吸收乙醇[4]、清除自由基抗氧化[9-10]、消除水腫和利尿[5]等作用。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，遠(yuǎn)志及其炮制品可有效提高小鼠肝組織ADH活性，促進(jìn)乙醇代謝，進(jìn)一步抑制乙醇的吸收，降低乙醇的神經(jīng)毒作用，從而顯著延長小鼠共濟(jì)失調(diào)發(fā)生潛伏期，延長給酒后不同時(shí)間點(diǎn)小鼠在垂直金屬網(wǎng)的攀附時(shí)間，降低醉酒率。經(jīng)炮制后遠(yuǎn)志(尤其是甘草炙遠(yuǎn)志)解酒防醉效果加強(qiáng)，可能是由于化學(xué)成分發(fā)生變化，但確切有效物質(zhì)群有待研究，有關(guān)遠(yuǎn)志解酒作用的研究報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)對(duì)遠(yuǎn)志及其炮制品的解酒防醉作用進(jìn)行初步探索，為遠(yuǎn)志防治急性酒精中毒提供參考依據(jù)。

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(責(zé)任編輯：李嵐春)

Study on the Anti-alcoholism Effect ofPolygalatenuifoliaWilld.and its Processed Products

Ge Fang1,Zheng Zhuo1,Xiao Wei2,Wang Zhenzhong2,Huang Wenzhe2,Yang Zhonglin1*

(1.State Key Laboratory of Natural Products and Functions,China Pharmaceutical University,Nanjing 210009, China;2.Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co.,LTD,Lianyungang 222001,China)

Objective:To study the anti-alcoholism effect ofPolygalatenuifoliaWilld.and its processed products which were processed by glycyrrhizae and refined honey.Methods:Water extractions were administrated to ICR mice,30 minutes later,acute alcoholism model was established by alcohol gavage (52%U/U).Then we observed the ataxia incubation period,cling time and the rate of alcoholism;And the serum Alcohol dehydrogenase (ADH) activity was detected.Results:The water extraction ofPolygalatenuifoliaWilld. and its processed products could improve the hangover significantly.Especially the high dose of Polygala tenuifolia processed by glycyrrhizae could apparently extend the ataxia incubation period and the cling time,reduce the rate of alcoholism and enhance ADH activity.Conclusion:The high dose ofPolygalatenuifoliaprocessed by glycyrrhizae had a significant effect of anti-alcoholism.

PolygalatenuifoliaWilld.;Processed Product;Acute Alcoholism;Anti-alcoholism;Alcohol Dehydrogenase

2015-04-03

葛方(1989-)，女，中國藥科大學(xué)碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幹苿W(xué)。E-mail：GFcpu1989@163.com

楊中林(1950-)，女，滿族，中國藥科大學(xué)教授，研究方向?yàn)橹兴幣谥婆c中藥制劑。E-mail：yzl1950@126.com

R283.1

A

1673-2197(2015)16-0012-04

10.11954/ytctyy.201516006