周松林，趙煥閣，林映瑩，黃用豪

(1.海南醫(yī)學(xué)院 熱帶病重點實驗室，海南 ?？?71101； 2.南京師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，江蘇 南京 210046)

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小果酸漿總苦味素對慢性皮炎的治療作用及機制研究

周松林1,2，趙煥閣1，林映瑩1，黃用豪1

(1.海南醫(yī)學(xué)院 熱帶病重點實驗室，海南 ?？?71101； 2.南京師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，江蘇 南京 210046)

目的：探討海南小果酸漿總苦味素(Total Physailins of Physalis minima, TPPM)對小鼠慢性皮炎/濕疹的防治作用。方法：采用5%二硝基氯苯(2, 4-dinitrochlorobenzene, DNCB)外涂于小鼠背部致敏，5天后用0.1% DNCB 于小鼠右耳內(nèi)側(cè)反復(fù)激發(fā)，每周3次，共5周，引起慢性皮炎模型，給藥組于激發(fā)后涂抹TPPM。結(jié)果：用藥5周后，TPPM能明顯減輕鼠耳腫脹度，減少結(jié)痂動物數(shù)及浸潤炎癥細(xì)胞數(shù)，且能降低小鼠血清中升高的IgE水平以及升高血清中降低的IL-2水平。結(jié)論：TPPM能有效抑制小鼠慢性皮炎、濕疹，其作用機制可能與降低IgE水平以及升高IL-2水平有關(guān)。

慢性皮炎；濕疹；小果酸漿總苦味素

過敏性皮炎(Atopic Dermatitis，AD)是一種慢性皮膚炎性疾病，為臨床常見病、多發(fā)病，易復(fù)發(fā)，現(xiàn)發(fā)病呈上升趨勢[1]。其臨床特征表現(xiàn)為皮膚出現(xiàn)瘙癢、紅斑、水皰，后期出現(xiàn)皮膚干燥、苔蘚樣硬化、脫屑等[1-2]?，F(xiàn)在主要采用H1受體拮抗劑、糖皮質(zhì)激素等進行局部或全身藥物治療，但由于其副作用使其應(yīng)用受到限制[3-5]。酸漿(Physalis alkekengi)為茄科植物酸漿屬的干燥宿萼或帶果實的宿萼[6]，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，名酸醬，其后歷代本草多有收載，明·李時珍《本草綱目》中記載燈籠草利濕除熱、清肺治咳、利濕化痰、治疽，《本草綱目拾遺》[7]中云：“燈籠草，……經(jīng)霜乃紅，京師呼為紅姑娘。按此草主治雖多，惟咽喉是其專治，用之功最捷?！院?、治咽喉腫如神?！蔽覈釢{屬約5種，南北均產(chǎn)，海南1種，即小果酸漿(Physalis minima)，海南低海拔地區(qū)常見，生于曠野、荒地及路旁等處[8]。酸漿全草含有酸漿苦味素A-T(Physailin A-T)等苦味素類化合物、黃酮類以及甾醇類化合物等[9-13]。海南黎族民間常利用小果酸漿治療小孩濕疹，為更準(zhǔn)確地反映小果酸漿對慢性皮炎/濕疹的藥物治療作用，本文采用二硝基氯苯(2,4-dinitrochlorobenzene, DNCB)反復(fù)刺激小鼠耳部建立慢性皮炎/濕疹模型[14]，并觀察了小果酸漿總苦味素對慢性皮炎/濕疹的治療作用，現(xiàn)報道如下。

1 材料與試劑

1.1 試劑與藥品

二硝基氯苯(北京市興津化工廠，分析純，批號20120402)；氫化可的松注射液(predisone,西安利君制藥股份有限公司，批號120709)；小果酸漿總苦味素(Total Physailins of Physalis minima, TPPM,本試驗室自行提取)；小鼠血清IL-2、Ig E ELISA試劑盒(南京凱基生物有限公司)，丙酮、二甲亞砜(國產(chǎn)分析純)。

1.2 試驗動物

昆明種小鼠，清潔級，海南醫(yī)學(xué)院動物室提供，8周齡，體重16～18g。

2 方法

2.1 分組與給藥[14]

實驗前7天，購買昆明種小鼠適量(飼養(yǎng)條件：溫度(25±1)℃，濕度(40±5)%，自由進食飲水，SPF條件)，隨機分成6組：正常對照組、模型組、陽性藥物控制組(氫化可的松組 pre 5mg/kg)、TPPM 30mg/kg、60mg/kg和120mg/kg組。實驗前一天剔除小鼠背部和腹部兩側(cè)的毛發(fā)。DNCB用丙酮/花生油(3∶1) 溶解配制，氫化可的松用二甲亞砜/95%乙醇/花生油(5∶3∶92)溶解配制，TPPM用丙酮/乙醇/無菌雙蒸水(1∶1∶1)溶解配制。實驗0天，用50μL 5% DNCB刺激小鼠腹部兩側(cè)皮膚，分別用10μL 5% DNCB刺激小鼠的背部和右耳，實驗第5天，繼續(xù)用同樣劑量的0.1%DNCB刺激小鼠的腹部兩側(cè)、背部和右耳；共5周，每周3次，每次刺激后1h，陽性藥控組口服給藥5mg/kg的氫化可的松，各用藥組于致敏當(dāng)天給予灌胃給藥，每天1次，正常對照組和模型組灌以等體積的丙酮/乙醇/無菌雙蒸水。

2.2 小鼠左右耳重量差及病理組織切片

末次激發(fā)后24h處死實驗動物，用直徑8mm的金屬打孔器在耳中部打孔，用電子天平稱得每個組織塊重量，計算左右耳重量差。同時將右耳片泡在10%的福爾馬林中過夜，然后制成石蠟塊，HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察。

2.3 小鼠血清中IL-2、Ig E值檢測

小鼠經(jīng)眼球摘除取血1mL，1 500rmp離心20min，取出血清置于微量離心管內(nèi)，80℃冰箱保存?zhèn)溆?，采用放射免疫測定法測定血清IL-2、Ig E值，步驟按IL-2與Ig E試劑盒說明進行。

2.4 統(tǒng)計學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 對小鼠兩耳質(zhì)量差異的影響

各組小鼠右耳都出現(xiàn)了不同程度的增厚及腫脹，其中陽性對照組腫脹最為明顯，三泡草組、氫化可的松組小鼠耳片質(zhì)量與陽性對照組比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P≤0.05)。具體見表1。

表1 各組小鼠左右耳朵質(zhì)量差異及小鼠血清中Ig E與IL-2含量比較 (±s)

3.2 對小鼠右耳病理變化的影響

陽性對照組小鼠鼠耳表皮角化過度，表皮增厚，真皮層大量炎性細(xì)胞浸潤，真皮血管明顯擴張；TPPM和Pre組表皮輕度角化，表皮稍增厚，真皮層炎性細(xì)胞浸潤較陽性對照組明顯減少(見圖1)。

3.3 對小鼠血清中Ig E與IL-2含量變化的影響

與正常對照組相比，模型組小鼠血清中Ig E明顯升高，IL-2含量降低，而TPPM(30、60和120mg/kg)和Pre 5mg/kg組能有明顯降低小鼠血清中Ig E上升情況，升高小鼠降低的IL-2水平，具體數(shù)據(jù)見表1與圖2。

圖1 光學(xué)顯微鏡下觀察小鼠右耳組織病理變化情況(HE染色，×200)

注：a: 正常組；b: 模型組；c: pre 5mg/kg group；d:TPPM 30mg/kg；e: TPPM 60mg/kg；f: TPPM 120mg/kg。

圖2 各組小鼠血清中Ig E與 IL-2的含量變化

4 討論

慢性皮炎是一種慢性免疫性皮膚疾病，是發(fā)生在皮膚上的一種Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)，是由T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫，正常情況下T細(xì)胞活化后產(chǎn)生的TH1細(xì)胞和TH2細(xì)胞處于動態(tài)平衡，而且TH1細(xì)胞與TH2細(xì)胞通過分泌不同細(xì)胞因子彼此相互抑制。但在許多復(fù)雜因素的刺激下, TH1細(xì)胞與TH2細(xì)胞失去平衡，越來越多的研究結(jié)果顯示濕疹患者外周血和皮損中TH2/TH1細(xì)胞亞群失衡，TH2細(xì)胞功能亢進，皮損和外周血TH2細(xì)胞表達或分泌的IL-4、IL-5和IL-13水平升高，從而導(dǎo)致血清中Ig E上升；而TH1細(xì)胞表達或分泌的IFN-γ和IL-2降低[15-16]。本實驗也證實了小鼠慢性皮炎/濕疹模型中血清Ig E急劇上升以及IL-2的水平下降，同時TPPM對抑制小鼠慢性皮炎也有一定作用。

酸漿全株含有豐富的苦味素及黃酮類物質(zhì)[9-13]，也有不少報道其成分具有抗過敏及抗炎癥活性[17-19]，之前我們報道小果酸漿乙醇粗提物具有一定的抑制小鼠皮炎的作用[20]，但效果不是很明顯，本次試驗通過對小果酸漿總苦味素分離，再測定其對小鼠慢性皮炎/濕疹的作用，結(jié)果表明苦味素對TH細(xì)胞某些細(xì)胞因子有一定的作用，TPPM通過抑制血清中Ig E升高，并促進已經(jīng)降低的IL-2含量增加，從而使TH1/ TH2細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子重新處于平衡狀態(tài)來抑制炎癥作用的發(fā)生。綜上所述，TPPM能夠明顯減輕由DNCB誘導(dǎo)昆明種小鼠產(chǎn)生的慢性皮炎/濕疹癥狀。

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(責(zé)任編輯：尹晨茹)

Investigation of the Treatment and Mechanism of Total Physailins of Physalis minima on Atopic Dermatitis

Zhou Sonlin1,2,Zhao Huangge1,Lin Yinying1,Huang Yonghao1

(1.Hainan Provincial Key Laboratory of Tropical Medicine,Hainan Medical College,Haikou 571199,China; 2.College of Life Sciences, Nanjing Normal University, Nanjing 210046,China)

Objective:To explore the effects total physailins of Physalis minima(TPPM), a traditional Chinese folk medicine, on chronic dermatitis in mice induced by 2,4-dinitrochlorobenzene (DNCB).Methods:Therty-six mice were randomly divided into six group. Twenty-five microliters of 0.1% DNCB in acetone/olive oil (3∶1) was applied to each side of right ears and dorsal skin three times with 7d intervals in 5 weeks. Mice in different groups were applied prednisolone and TPPM respectively after each challenge. Weight difference of two ears, pathological change of right ear and dermal inflammatory cell number, and examine the content of total serum Ig E and IL-2 levels were used to assess the effects of the drugs.Results:after the 5 weeks challenge, weight differences of two ears in the TPPM group and prednisolone group were significantly decreased as compared with that in the others, and also led to the remarkable suppression of the development of dermatitis, as determined by a histological examination and the serum Ig E levels, and rose the serum IL-2 level.Conclusion:TPPM has an obvious effect in treatment of chronic dermatitis in mice.

Atopic Dermatitis;Total Physailins of Physalis minima

2014-12-22

海南省自然科學(xué)基金(808157)；海南大型儀器共享補貼基金(120313)

周松林(1979-)，男，海南醫(yī)學(xué)院熱帶病重點實驗室助理研究員，研究方向為天然藥物。

R285.5;R246.7

A

1673-2197(2015)10-0010-03

10.11954/ytctyy.201510005