梁澤華，李范珠，楊元宵，翁錦妮，許夢(mèng)捷，徐姍姍

(浙江中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，浙江 杭州 310053)

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附子細(xì)辛、芍藥甘草配伍前后對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛作用研究

梁澤華，李范珠，楊元宵，翁錦妮，許夢(mèng)捷，徐姍姍

(浙江中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，浙江 杭州 310053)

目的：研究附子細(xì)辛、芍藥甘草配伍前后對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛作用的影響。方法：鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)采用小鼠熱板法和扭體法，觀察附子細(xì)辛、芍藥甘草配伍前后對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果：對(duì)熱板所致疼痛的影響：給藥前，生理鹽水組、附子組、附子細(xì)辛組、芍藥組、芍藥甘草組四組小鼠的痛閾值比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。給藥15、30、60、90min時(shí)附子細(xì)辛組小鼠痛閾值較附子組均顯著提高，芍藥甘草組較芍藥組均顯著提高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)醋酸所致疼痛的影響：附子細(xì)辛組與附子組相比，芍藥甘草組與甘草組相比，小鼠發(fā)生扭體反應(yīng)的潛伏時(shí)間均顯著延長(zhǎng)，在15min內(nèi)的扭體發(fā)生次數(shù)明顯減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；附子細(xì)辛組扭體抑制率>附子扭體組抑制率，芍藥甘草組抑制率>芍藥組扭體抑制率。結(jié)論：相比與配伍前，附子細(xì)辛配伍后鎮(zhèn)痛作用增強(qiáng)，芍藥甘草配伍后鎮(zhèn)痛作用亦增強(qiáng)。

附子細(xì)辛；芍藥甘草；配伍；熱板法；扭體法；鎮(zhèn)痛

附子是毛茛科烏頭屬植物烏頭(AconitumcarmichaeliDebx.) 的干燥子根加工品[1]，能回陽(yáng)救逆、補(bǔ)火助陽(yáng)、散寒止痛；細(xì)辛能解表散寒、祛風(fēng)止痛、通竅、溫肺化飲。兩者均有止痛功效。附子細(xì)辛湯出自《傷寒論》，為臨床常用方劑，現(xiàn)代藥理研究證實(shí)其具有抗炎、鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)等作用，其他作用如清除身體局部產(chǎn)生的活性氧[2]。近年來(lái)，該藥新的治療用途也不斷被挖掘出來(lái)，如治療頑固性失眠[3]、抖動(dòng)癥[4]等。芍藥酸寒，能養(yǎng)血斂陰、柔肝止痛；甘草性溫，能健脾益氣、緩急止痛。二藥相伍，酸甘化陰，調(diào)和肝脾，有柔筋止痛之效。芍藥甘草湯源自于張仲景《傷寒論》，由芍藥、甘草兩味藥組成，有柔肝舒筋、緩急止痛之功效，其化學(xué)成分和藥理學(xué)的研究已有較多報(bào)道[5]。

已有相關(guān)文章說(shuō)明附子細(xì)辛和芍藥甘草有抗炎鎮(zhèn)痛的作用，而鎮(zhèn)痛作用雖經(jīng)過(guò)報(bào)道，但是較少有明確的試驗(yàn)予以證實(shí)。本實(shí)驗(yàn)用經(jīng)典的熱板法和醋酸扭體法來(lái)研究附子細(xì)辛和芍藥甘草兩個(gè)藥對(duì)配伍前后對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛作用的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與儀器

1.1 材料

附子、細(xì)辛均由浙江中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)門診部購(gòu)得，經(jīng)浙江中醫(yī)藥大學(xué)資源鑒定教研室熊耀康教授鑒定；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為清潔級(jí)健康成年ICR小鼠，體重(20±2)g，購(gòu)自上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證：SCXK(滬)2013-0016；飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(浙)2013-0184。溫度(22±2)℃，濕度50%～60%，12h光照，自由飲水，標(biāo)準(zhǔn)普通飼料喂食。

1.2 儀器

智能熱板儀，YLS-6B，山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站；電子計(jì)價(jià)秤，ACS-3型，杭州友恒稱重設(shè)備有限公司。

2 方法

2.1 藥物配制

采用常規(guī)煎煮法，稱取附子10g、細(xì)辛20g，加12倍量蒸餾水用文火煎煮45min，濾過(guò)得到濾液①，濾渣再加入10倍量蒸餾水用文火煎煮45min，濾過(guò)得到濾液②。合并濾液①和②，靜置去渣，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮為60%的水煎液。此為樣品1。稱取白芍10g，甘草10g，按上述方法制備，此為樣品2。稱取附子10g，按上述方法制備，此為樣品3。稱取白芍10g，按上述方法制備，此為樣品4。

2.2 造模方法

2.2.1 熱板法致痛模型 將雌性小鼠置于溫度設(shè)定為55.0℃的智能熱板儀上，以小鼠出現(xiàn)舔后足所需時(shí)間作為小鼠的痛閾值[6]；給藥方式為灌胃，給藥劑量0.2mL/10g。測(cè)量小鼠給藥前以及給藥后15、30、60、90min的痛閾值(超過(guò)60s的以60s計(jì))，記錄數(shù)據(jù)。

2.2.2 扭體法致痛模型 6%醋酸溶液腹腔注射，引起深的、大面積而持久的疼痛刺激，致使小白鼠產(chǎn)生“扭體”反應(yīng)，腹部?jī)?nèi)凹、軀干與后腿伸張、臀部高起。給藥劑量為0.2mL/10g，分別給藥20min后，注射6%醋酸溶液0.2mL/10g[8]，記錄15min內(nèi)小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的潛伏時(shí)間及其扭體次數(shù)。

2.2.3 分組處理 將實(shí)驗(yàn)用的50只清潔級(jí)雌性ICR小鼠隨機(jī)分為附子組、附子細(xì)辛組、芍藥組、芍藥甘草組、空白對(duì)照組共5組，每組10只。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 藥對(duì)配伍前后對(duì)熱板法所致小鼠疼痛作用的影響

根據(jù)表1和圖1所示，給藥前，空白對(duì)照組與附子組、附子細(xì)辛組、芍藥組、芍藥甘草組四組小鼠的痛閾值比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與空白對(duì)照組相比，給藥15min時(shí)附子組、附子細(xì)辛組、芍藥組、芍藥甘草組痛閾值明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，附子細(xì)辛組、芍藥甘草組痛閾值極顯著性升高(P<0.01)；給藥30min時(shí)附子組、附子細(xì)辛組、芍藥組、芍藥甘草組痛閾值均明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，附子細(xì)辛組、芍藥甘草組痛閾值極顯著性升高(P<0.01)；給藥60min時(shí)附子組、附子細(xì)辛組、芍藥組、芍藥甘草組痛閾值明顯升高(P<0.05)，附子細(xì)辛組、芍藥甘草組痛閾值極顯著性升高(P<0.01)，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；附子細(xì)辛組較附子組顯著提高，芍藥甘草組較芍藥組顯著提高(P<0.05)。給藥90min時(shí)附子組、附子細(xì)辛組、芍藥組、芍藥甘草組痛閾值均極顯著性升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；附子細(xì)辛組較附子組顯著性提高，芍藥甘草組較芍藥組顯著性提高(P<0.05)。在不同時(shí)間段，附子組、與附子細(xì)辛組痛閾值相比，芍藥組與芍藥甘草組痛閾值相比，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果說(shuō)明附子細(xì)辛和芍藥甘草藥對(duì)配伍后對(duì)鎮(zhèn)痛作用有所提高。

表1 藥對(duì)配伍后對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛作用的影響 (±s，s)

注：和空白對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

3.2 藥對(duì)配伍前后對(duì)醋酸扭體法所致疼痛的作用影響

根據(jù)表2和圖2、3結(jié)果所示，與空白對(duì)照組相比，附子組、附子細(xì)辛組、芍藥組、芍藥甘草組給藥后小鼠發(fā)生扭體反應(yīng)(腹部收縮內(nèi)凹，后肢伸展，臀部抬高，蠕動(dòng))的潛伏時(shí)間極顯著性延長(zhǎng)(P<0.01)，在15min內(nèi)的扭體發(fā)生次數(shù)極顯著性減少(P<0.01)，附子細(xì)辛組較附子組結(jié)果相比，潛伏時(shí)間顯著延長(zhǎng)，扭體發(fā)生次數(shù)顯著減少(P<0.05)，芍藥甘草組較芍藥組結(jié)果相比，潛伏時(shí)間顯著延長(zhǎng)，扭體發(fā)生次數(shù)顯著減少(P<0.05)，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)圖2、圖3。附子細(xì)辛組扭體抑制率>附子扭體組制率，芍藥甘草組抑制率>芍藥組扭體抑制率，同見(jiàn)圖2。結(jié)果說(shuō)明附子細(xì)辛和芍藥甘草藥對(duì)配伍后對(duì)鎮(zhèn)痛作用有所提高。

圖1 各藥對(duì)配伍前后對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛作用的影響

表2 藥對(duì)配伍后對(duì)小鼠醋酸扭體法鎮(zhèn)痛作用的影響 (±s)

注：與空白對(duì)照組比較，**P<0.01。

圖2 藥對(duì)配伍后對(duì)小鼠醋酸扭體法鎮(zhèn)痛作用的影響

注：扭體抑制率[7](%)=(空白組扭體反應(yīng)次數(shù)-給藥組扭體反應(yīng)次數(shù))/空白組扭體反應(yīng)次數(shù)*100%。

圖3 藥對(duì)配伍后對(duì)小鼠醋酸扭體法鎮(zhèn)痛作用的影響

4 討論

就功效而言，附子能回陽(yáng)救逆、補(bǔ)火助陽(yáng)、散寒止痛；細(xì)辛能解表散寒、祛風(fēng)止痛、通竅、溫肺化飲,兩者均有止痛功效，遂選取附子細(xì)辛作藥對(duì)。附子細(xì)辛為臨床常用藥材，現(xiàn)代藥理研究證實(shí)其具有抗炎作用、鎮(zhèn)痛作用、免疫調(diào)節(jié)作用，其他作用如清除身體局部產(chǎn)生的活性氧。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，藥對(duì)的抗炎鎮(zhèn)痛作用比附子單藥作用強(qiáng)，可能是由于附子細(xì)辛通過(guò)配伍相互產(chǎn)生協(xié)同增效作用而提高療效。白芍味苦酸而性微寒，可養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、柔肝止痛、斂陰止汗；炙甘草味甘而性平，可益氣補(bǔ)中、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛。二藥配伍，甘苦相合而氣血雙補(bǔ)，酸甘化陰而滋陰液，共奏補(bǔ)益和中、柔肝緩急、解痙鎮(zhèn)痛等功效。現(xiàn)代研究表明，中藥白芍所含的主要成分白芍苷，可與甘草產(chǎn)生協(xié)同作用，顯著抑制胃腸道平滑肌及骨骼肌收縮，對(duì)全身各部位肌肉強(qiáng)烈收縮所致的痙攣性疼痛具有明顯的緩解作用。現(xiàn)代藥理研究證實(shí)，芍藥甘草藥對(duì)具有抗炎鎮(zhèn)痛的作用。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，藥對(duì)的抗炎鎮(zhèn)痛作用比芍藥單藥作用強(qiáng)，這是由于芍藥甘草通過(guò)配伍相互產(chǎn)生協(xié)同增效作用從而提高療效。

本研究表明，與空白對(duì)照組相比，附子組、附子細(xì)辛組、芍藥組、芍藥甘草組小鼠發(fā)生舔后足跳躍反應(yīng)的痛閾值顯著升高，小鼠發(fā)生扭體反應(yīng)的潛伏時(shí)間明顯延長(zhǎng)，次數(shù)顯著降低；附子細(xì)辛組相對(duì)附子組痛閾值升高，扭體反應(yīng)的潛伏時(shí)間明顯延長(zhǎng)，次數(shù)顯著降低；附子細(xì)辛組比附子組鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)；芍藥甘草組相對(duì)芍藥組痛閾值升高，芍藥甘草組比芍藥組鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)。為其綜合開(kāi)發(fā)利用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，其鎮(zhèn)痛有效成份及機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，附子細(xì)辛藥對(duì)抗炎鎮(zhèn)痛作用比附子單藥作用強(qiáng)，可能是因?yàn)楦阶蛹?xì)辛通過(guò)配伍相互產(chǎn)生協(xié)同增效作用從而提高療效。二藥表里兼顧，陽(yáng)復(fù)表解，在內(nèi)之寒附子溫之細(xì)辛助之，在外之寒細(xì)辛疏之附子輔之，加強(qiáng)溫陽(yáng)解表、散寒止痛功效，為止痛藥對(duì)。芍藥甘草藥對(duì)抗炎鎮(zhèn)痛作用比芍藥單藥作用強(qiáng)，這是因?yàn)樯炙幐什萃ㄟ^(guò)配伍相互產(chǎn)生協(xié)同增效作用而提高療效。二藥配伍結(jié)合，能夠加強(qiáng)解痙、抗炎止痛之功效，為止痛藥對(duì)。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].第1部.北京:中國(guó)醫(yī)科技出版社,2010.

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(責(zé)任編輯：尹晨茹)

Study on Effects of the Separated and Integrative Decoction of Aconite and Asarum or Paeonia Lacliflora and Glycyrrhiza on Analgesia in Mice

Liang Zehua,Li Fanzhu,Yang Yuanxiao,Weng Jinni,Xu Mengjie,Xu Shanshan

(College of Pharmacy,Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053,China)

Objective:Research analgesic effect of Aconite and Asarum or paeonia lacliflora and glycyrrhiza in mice before and after combination.Methods:Hot-plate procedure and writhing test in mice were adopted in experimental analgesic mod-el,survey analgesic effect of Aconite and Asarum or paeonia lacliflora and glycyrrhiza in mice before and after combination.Results:the influence of the hot plate induced pain: before dosing, the pain threshold of saline group, aconite group,aconite and asarum group,paeonia lacliflora group,paeonia lacliflora and glycyrrhiza group were not statistically significant (P>0.05). When administered 15min,30min,60min and 90min,the pain threshold of aconite and asarum group increased pain than aconite group(P<0.05), the pain threshold of paeonia lacliflora and glycyrrhiza group increased pain than paeonia lacliflora group(P<0.05), which is statistically significant.The influence of the Combined decoction and decoction on pain induced by acetic acid:The aconite and asarum group compared with aconite group,The paeonia lacliflora and glycyrrhiza group compared with paeonia lacliflora group,combined group of mice was significantly longer occur writhing latency (P<0.05), within 15min, the number of writhing occurred has significantly reduced (P<0.05), which is statistically significant. Inhibition rate of aconite and asarum grouP> Inhibition rate of aconite group,Inhibition rate of paeonia lacliflora and glycyrrhiza grouP>Inhibition rate of paeonia lacliflora group.Conclusion:This study showed that, compared with the separation,the combination of aconite and asarum and the combination of paeonia lacliflora and glycyrrhiza group have the stronger analgesic effect.

Aconite and Asarum;Paeonia Lacliflora and Glycyrrhiza; Hot Plate Test;Body Torsion Test; Analgesic Effect

2014-12-10

浙江省科技廳項(xiàng)目(2012R10044-04)

梁澤華(1976-)，女，博士，浙江中醫(yī)藥大學(xué)副教授，研究方向?yàn)橹兴幣谥萍夹g(shù)與藥效結(jié)合技術(shù)。

R285.5

A

1673-2197(2015)10-0013-03

10.11954/ytctyy.201510006