寧 成，徐秀蓉，胡 耀

(成都大學(xué)附屬醫(yī)院 腎臟內(nèi)科，四川 成都 610000)

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大黃總蒽醌對結(jié)腸和腎臟水通道蛋白表達調(diào)節(jié)效應(yīng)研究

寧 成，徐秀蓉，胡 耀

(成都大學(xué)附屬醫(yī)院 腎臟內(nèi)科，四川 成都 610000)

目的：探討大黃總蒽醌對大鼠結(jié)腸和腎臟AQP2、AQP4表達的調(diào)節(jié)效應(yīng)。方法：選取33只SD大鼠為研究對象，隨機均分為對照組、給藥A組、給藥B組各11只。對照組大鼠給予同體積生理鹽水，給藥A、B組大鼠予以大黃總蒽醌，監(jiān)測三組大鼠的AQP2、AQP4表達情況。結(jié)果：①給藥A組大鼠結(jié)腸AQP2、APP4表達均顯著低于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；②給藥B組大鼠24h尿量顯著高于對照組(P<0.05)，尿Na+含量顯著低于對照組(P<0.05)，Na+差異不明顯(P>0.05)；給藥B組大鼠腎臟AQP2、APP4表達均顯著低于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：大黃總蒽醌對結(jié)腸和腎臟水通道蛋白表達具有重要影響，可用于治療相關(guān)疾病。

大黃總蒽醌；結(jié)腸；腎臟；蛋白表達；調(diào)節(jié)效應(yīng)

作為傳統(tǒng)的瀉下藥物，大黃還具有利尿作用，被廣泛應(yīng)用于腎病臨床中。大黃提取物(大黃總蒽醌)對結(jié)腸、腎臟代謝具有一定影響[1]，為探討大黃總蒽醌對大鼠結(jié)腸和腎臟AQP2、AQP4表達的調(diào)節(jié)效應(yīng)，本研究選取33只大鼠為研究對象，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取33只雄性大鼠為研究對象，體重195～225g，均健康。將其隨機均分成對照組、給藥A組、給藥B組，每組各11只。

1.2 方法

1.2.1 給藥方法 給藥A、B組：每日給予每只大鼠2 500mg/kg大黃總蒽醌，同時以2mL生理鹽水對藥物進行稀釋，每天灌胃1次，連續(xù)給藥5天。對照組大鼠每天給予等體積生理鹽水。

1.2.2 檢測方法 給藥A組大鼠取距直腸5cm結(jié)腸，采用矢狀剖開，并包好存于-80℃的冰箱中；給藥B組大鼠取腎臟部位；對照組大鼠按上述方法取結(jié)腸和腎臟部位。采用免疫組化法對結(jié)腸和腎臟AQP2、APP4進行監(jiān)測，所有操作均嚴格按照相關(guān)標準執(zhí)行。

1.3 觀察指標

①比較對照組與給藥A組大鼠結(jié)腸AQP2、APP4表達情況；②比較對照組與給藥B組大鼠腎臟AQP2、APP4表達情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 對照組與給藥A組大鼠結(jié)腸AQP2、APP4表達免疫組化染色比較

經(jīng)統(tǒng)計結(jié)果顯示，給藥A組大鼠結(jié)腸AQP2、APP4表達量均顯著低于對照組，組間比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，詳見表1。

表1 對照組與給藥A組大鼠結(jié)腸AQP2、APP4表達免疫組化染色比較 (±s)

2.2 對照組與給藥B組血尿、腎臟AQP2、APP4表達免疫組化染色比較

經(jīng)統(tǒng)計結(jié)果顯示，給藥B組大鼠24h尿量顯著高于對照組(P<0.05)，尿Na+比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而Na+差異不明顯(P>0.05)；同時給藥B組大鼠腎臟AQP2、APP4表達均顯著低于對照組，組間比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，詳見表2和表3。

表2 對照組和給藥B組大鼠血尿情況比較 (±s)

表3 對照組與給藥B組大鼠腎臟AQP2、APP4表達免疫組化染色比較 (±s)

3 討論

3.1 大黃總蒽醌對結(jié)腸AQP2、APP4表達的影響

在祖國醫(yī)學(xué)中很早就記錄了大黃的“瀉下”作用，如《神龍本草經(jīng)》《藥性論》《本草正義》等。現(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示，大黃對小鼠結(jié)腸壁膜Na+-K+-ATP酶具有抑制作用，其主要作用機制為抑制腸道對水、Na+的重吸收，進而間接增強腸蠕動，加快腸內(nèi)物質(zhì)消化，出現(xiàn)“下泄”現(xiàn)象[2-3]。近年來，學(xué)者發(fā)現(xiàn)AQPs是細胞膜上的一種轉(zhuǎn)運蛋白，與水的通透有重要關(guān)系[4]。結(jié)腸組織中表達的水通道蛋白比較多，主要包括AQP1、AQP4和AQP87。其中，AQP2主要負責結(jié)腸上皮細胞管腔膜，AQP4則主要負責結(jié)腸上皮細胞基底膜。相關(guān)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，應(yīng)激喜腹瀉大鼠模型與AQP4表達下調(diào)存在密切關(guān)系，腸道菌群失調(diào)也會造成AQP2表達改變[5]。由此可見，在結(jié)腸水分吸收的過程中，AQPs發(fā)揮著重要作用。

本研究中，給藥A組大鼠給予大劑量大黃總蒽醌藥物，對照組僅給予等體積生理鹽水，給藥A組大鼠結(jié)腸AQP2、APP4表達量均顯著低于對照組(P<0.05)，提示大黃總蒽醌對結(jié)腸AQP2、APP4表達具有下調(diào)作用，但大黃對AQP2、APP4表達量的具體調(diào)節(jié)機制還尚未明確，結(jié)腸對水分的吸收還存在不確定性，有可能是多個AQPs協(xié)同作用的結(jié)果，同時也有可能是大黃產(chǎn)生瀉下效應(yīng)的作用靶點之一，因此后期還需要加強研究。

3.2 大黃總蒽醌對腎臟AQP2、APP4表達的影響

大黃性寒味苦，具有涼血、瀉火、活血祛瘀、利尿等功效，一直被廣泛應(yīng)用于多種疾病的治療中，尤其是胃腸疾病、慢性腎功能衰竭等，且取得了良好的效果。中醫(yī)治療“瀉下”的方法主要包括通便、逐水、下積[6]。其中，逐水的途徑有兩種，分別是腸道和腎臟，后者則為中醫(yī)中的利尿作用，且中醫(yī)中也有很多關(guān)于這方面的記載，如《藥性論》《本草正義》等。

本研究結(jié)果表明，給藥A組大鼠結(jié)腸AQP2、APP4表達均顯著低于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；給藥B組大鼠24h尿量顯著高于對照組(P<0.05)，尿Na+含量顯著低于對照組(P<0.05)，Na+差異不明顯(P>0.05)；給藥B組大鼠腎臟AQP2、APP4表達均顯著低于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果提示大黃總蒽醌對結(jié)腸和腎臟水通道蛋白表達具有重要影響，可用于治療消化和泌尿系統(tǒng)相關(guān)疾病。

[1] 劉青.大黃總蒽醌及其衍生物對LoVo、NRK細胞AQP2、AQP4表達的調(diào)節(jié)效應(yīng)與機制[D].西安:第四軍醫(yī)大學(xué),2009.

[2] 劉青,李鋒,任秦有,等.大黃酚對LoVo細胞AQP2表達的調(diào)節(jié)效應(yīng)[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2009,16(9):849-852.

[3] 劉青,李鋒,任秦有,等.大黃總蒽醌含藥血清對NRK細胞AQP2與AQP4表達的調(diào)節(jié)效應(yīng)[J].中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志,2009,30(9):812-815,849.

[4] 劉青,李鋒,李軍昌,等.大黃總蒽醌含藥血清對LoVo的AQP4表達的調(diào)節(jié)效應(yīng)[J].中國中藥雜志,2009,16(24):3247-3250.

[5] 張進文.大黃蒽醌類成分結(jié)腸靶向給藥的泄下作用及藥代動力學(xué)研究[D].蘭州:蘭州大學(xué),2010.

[6] 劉青,李鋒,任秦有,等.大黃素對體外培養(yǎng)NRK細胞水通道蛋白2表達的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2010,21(8):871-874.

(責任編輯：尹晨茹)

Research on Water Channel Protein Expression Regulation Effect of Rhubarb Total Anthraquinone in Colon and Kidney

Ning Cheng,Xu Xiurong,Hu Yao

(Kidney Internal Medicine ,Affiliated Hospital of Chengdu University,Chengdu 610000,China)

Objective:To investigate the correlation between the total rhubarb anthraquinones in rats colon and kidney AQP2, the regulation of AQP4 expression effect.Methods:select 33 SD rats as the research object, random are divided into three groups, namely the control group, for group A and group B, each group of each 11. Control group to give the same volume of physiological saline, dosing A, B group of rhubarb total anthraquinone, monitoring AQP2, AQP4 expression of three groups of rats.Results:(1)to rats colon AQP2, APP4 expression of group A were significantly lower than control group (P<0.05); (2) for group B in the rat of the 24h urine is significantly higher than control group (P<0.05), urine Na+significantly lower than that of control group (P<0.05), Na+difference (P>0.05); And give medicine group B in the rat kidney AQP2, APP4 expression were significantly lower than control group (P<0.05).Conclusion:rhubarb total anthraquinone in colon and kidney water channel protein expression influence, in the treatment of related diseases need to refer to its functions.

Rhubarb Anthraquinone; Colon; Kidney；Protein Expression；Regulating Effect

2015-01-19

寧成(1982-)，女，成都大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)師，研究方向為慢性腎臟疾病及血液凈化。

R285.5

A

1673-2197(2015)10-0016-02

10.11954/ytctyy.201510007