張 穎，姜 鴻，尤獻(xiàn)民

(遼寧省中醫(yī)藥研究院，遼寧 沈陽(yáng) 110034)

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HPLC測(cè)定棗仁安神顆粒中木蘭花堿含量

張 穎，姜 鴻，尤獻(xiàn)民*

(遼寧省中醫(yī)藥研究院，遼寧 沈陽(yáng) 110034)

目的：建立HPLC法測(cè)定棗仁安神顆粒中木蘭花堿的含量。方法：采用Ultimate XB-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相A：0.2% 磷酸-0.2% 三乙胺水溶液，B：乙腈，梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)278nm，流速1.0mL·min-1。結(jié)果：所建立的HPLC含量測(cè)定方法線性關(guān)系良好 (r=1)，平均回收率為104.1%，RSD=1.0%。結(jié)論：該分析方法快速、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于棗仁安神顆粒的質(zhì)量控制。

棗仁安神顆粒；木蘭花堿；高效液相色譜法

棗仁安神顆粒由酸棗仁(炒)、丹參和五味子(醋)三味中藥組成，具有補(bǔ)心養(yǎng)肝、安神益智的功效，主治由心肝血虛、神經(jīng)衰弱引起的失眠、健忘、頭暈、頭痛等癥[1]。文獻(xiàn)報(bào)道[2-3]，炎癥對(duì)睡眠的影響有因果關(guān)系，在炎癥急性期反應(yīng)中，機(jī)體能產(chǎn)生多種炎性細(xì)胞因子，而該過程同時(shí)伴有睡眠結(jié)構(gòu)的改變[4]。前期藥理研究表明，棗仁安神顆粒連續(xù)灌胃7天能顯著影響小鼠全腦IL-1β和TNF-α含量。因此，本實(shí)驗(yàn)選用酸棗仁中具有抗炎作用的木蘭花堿為指標(biāo)[5]，建立高效液相色譜法測(cè)定棗仁安神顆粒中木蘭花堿含量的方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀：四元泵、DAD 二級(jí)管陣列檢測(cè)器。木蘭花堿對(duì)照品(≥98%)，成都曼思特生物科技有限公司，批號(hào)：MUST-14051706，乙腈、甲醇、磷酸、三乙胺為色譜純；水為重蒸水；供試品(遼寧省中醫(yī)藥研究院藥學(xué)室提供，批號(hào)分別為：20130501、20130502、20130503)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Ultimate XB-C18(4.6mm×200mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈、0.2% 磷酸-0.2%三乙胺水溶液，梯度洗脫(見表1)；流速：1.0mL·min-1；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：278nm。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取木蘭花堿對(duì)照品9.2mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液(木蘭花堿濃度為0.092mg·mL-1)。精密吸取上述對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0和6.0mL，置于10mL量瓶，加0.2%磷酸-三乙胺混合水溶液至刻度，搖勻，得到木蘭花堿濃度為9.2、18.4、27.6、36.8、46.0和55.2μg·mL-1的對(duì)照品溶液。

表1 流動(dòng)相梯度

2.2.2 供試品溶液 取批號(hào)為20130501的本品20g，研細(xì)，取1.0g，精密稱定，置50mL 具塞錐形瓶中，精密加甲醇20mL，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，過0.45μm濾膜，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液 按處方比例取藥材，除去酸棗仁，按工藝制備陰性樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下制備陰性供試液。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

精密吸取陰性供試液、供試品溶液及木蘭花堿對(duì)照品溶液，分別注入液相色譜儀中，記錄色譜，見圖1。結(jié)果表明：陰性供試液色譜圖中，在與木蘭花堿對(duì)照品相同保留時(shí)間處未見相應(yīng)色譜峰干擾，表明該實(shí)驗(yàn)方法專屬性良好。

圖1 木蘭花堿HPLC圖譜

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取各對(duì)照品溶液20μL，注入液相色譜儀中，以木蘭花堿峰面積對(duì)其相應(yīng)質(zhì)量濃度作線性回歸，得回歸方程y=29.67x-7.087，r=1，表明木蘭花堿在9.2～55.2μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

取棗仁安神顆粒(批號(hào)為20130501)，制備供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積值，得木蘭花堿峰面積RSD為0.3%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，室溫下放置，分別在0、2、4、8、12和24h注入液相色譜儀中，測(cè)定，計(jì)算RSD為 2.8%。表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取批號(hào)為20130501的本品20g，研細(xì)，取1.0g，平行6份，精密稱定，按“2.2.2”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)方法制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液20μL，注入液相色譜儀中，測(cè)定，計(jì)算RSD為2.9%，表明重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收試驗(yàn)

取批號(hào)為20130501的本品20g，研細(xì)，取0.5g，平行6份，分別精密加入含木蘭花堿對(duì)照品的甲醇溶液20mL，按“2.2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液。分別精密吸取供試品溶液20μL注入液相色譜儀中，測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果木蘭花堿的平均加樣回收率為104.1%，RSD為1.0%。

2.9 樣品測(cè)定

取不同批號(hào)的3批樣品20g，研細(xì)，取1.0g，精密稱定，按“2.2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，精密吸取各批號(hào)供試品溶液20μL，分別注入液相色譜儀中，測(cè)定，結(jié)果見表2。

表2 三批樣品中木蘭花堿含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)許多免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)可作用于中樞系統(tǒng)而影響睡眠過程，在睡眠過程中免疫功能會(huì)出現(xiàn)規(guī)律性的變化，免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)在腦內(nèi)的含量也隨睡眠過程而發(fā)生變化。前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，棗仁安神顆粒連續(xù)灌胃7天能顯著降低小鼠全腦IL-1β和TNF-α含量，但與有些報(bào)道[6]結(jié)果相反?？刂蒲装Y發(fā)生是否為棗仁安神顆粒改善睡眠作用的一個(gè)有效途徑，值得探討。因此，本研究選擇了具有抗炎作用的木蘭花堿作為該制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)。

[1] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部. 部頒標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-2164-96[S]. Z11-105.

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(責(zé)任編輯：魏 曉)

Determination of Magnoflorine in Zaoren-anshen Granule by HPLC

Zhang Ying，Jiang Hong,You Xianmin*

(Liaoning Academy of Chinese Medicine,Shenyang 110034，China)

Objective:To establish the determination method of the concent of magnoflorine in Zaoren-anshen granule by HPLC.Methods:The column was Ultimate XB-C18(5μm，4.6mm×250mm), the detection wavelength was at 278 nm, the mobile phase was the mixture of acetonitrile-0.2% phosphoric acid-0.2% triethylamine. The gradient elution was carried out with a flow rate of 1.0mL·min-1．Results:A good linear correlation of magnoflorine was observed, r=1, the average recovery was 104.1% with RSD of 1.0%. Conclusion:The method can be used as the quality control method of this preparation.

Zaoren-anshen Granule; Magnoflorine; HPLC

2014-08-25

遼寧省科技廳博士啟動(dòng)基金項(xiàng)目(20121099)

張穎(1979-)，女，遼寧省中醫(yī)藥研究院副研究員，研究方向?yàn)橹兴幩幮镔|(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量評(píng)價(jià)。

尤獻(xiàn)民(1964-)，男，遼寧省中醫(yī)藥研究院研究員，研究方向?yàn)橹兴幮滤庨_發(fā)。

R284.2

A

1673-2197(2015)01-0025-03

10.11954/ytctyy.201501013