李 超，袁寶軍，張淑青，佟艷艷，王菊惠，張會芬

（開灤總醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北唐山063000）

血液細(xì)菌感染患者中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)、CRP及WBC水平變化

李 超，袁寶軍＊，張淑青，佟艷艷，王菊惠，張會芬

（開灤總醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北唐山063000）

目的探討中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)、C－反應(yīng)蛋白（CRP）、白細(xì)胞（WBC）及中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞絕對值比值（N／L）在血液細(xì)菌感染患者中的水平變化及臨床意義。方法 采用流式細(xì)胞術(shù)檢測105例血液細(xì)菌培養(yǎng)陽性患者（陽性組）、66例血液細(xì)菌培養(yǎng)陰性患者（陰性組）及50例健康體檢人員（正常組）外周血中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)、免疫比濁法測定血清CRP水平及血液分析儀檢測WBC數(shù)及N／L比值。結(jié)果 與正常組比較，陽性組和陰性組中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)、CRP、WBC水平及N／L比值明顯升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。陽性組中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)、CRP水平及N／L比值明顯高于陰性組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05）。與G－菌組比較，G＋菌組中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)、N／L比值明顯降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。陽性組患者中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)與CRP呈輕度正相關(guān)（rs＝0.377，P＜0.05）。結(jié)論 中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)、CRP及N／L比值均為較好的血液細(xì)菌感染指標(biāo)；中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)和N／L比值可能有助于G＋菌與G－菌的鑒別。

中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)；C－反應(yīng)蛋白；白細(xì)胞；血液細(xì)菌感染

（Chin J Lab Diagn，2015，19：1693）

細(xì)菌感染是威脅人類健康、導(dǎo)致人類死亡的主要原因之一。血液白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、白細(xì)胞分類、C－反應(yīng)蛋白（CRP）等均作為反映感染性質(zhì)和嚴(yán)重程度的指標(biāo)［1，2］。近年來研究發(fā)現(xiàn)，中性粒細(xì)胞表面CD64分子在細(xì)菌感染時(shí)表達(dá)升高，可作為早期細(xì)菌感染良好的檢測指標(biāo)［3－5］。本研究通過觀察105例血液細(xì)菌培養(yǎng)陽性患者外周血中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)、WBC、中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞絕對值比值（N／L）及血清CRP水平變化，探討其在血液細(xì)菌感染中的價(jià)值。

1 對象和方法

1.1 對象 本次研究對象來自2011年5月－2014年5月本院收治的疑似血液感染患者，105例血液細(xì)菌培養(yǎng)陽性患者（陽性組），男性61例，女性44例，年齡46－70（57.73±11.47）歲，為不同部位2次或多次血培養(yǎng)陽性且為同一種細(xì)菌感染者，經(jīng)鑒定革蘭氏陽性（G＋）菌（G＋菌組）包括：表皮葡萄球菌、溶血性葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、草綠色鏈球菌、肺炎鏈球菌及停乳鏈球菌等。革蘭氏陰性（G－）菌（G－菌組）包括：銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、陰溝腸桿菌、溫和氣單胞菌、流感嗜血桿菌及粘質(zhì)沙雷菌等。66例排除血液細(xì)菌感染的發(fā)熱患者（陰性組），男性39例，女性27例，年齡40－74（57.19±18.16）歲。50例健康查體人員（正常組），男性30例，女性20例，年齡55－72（平均53.75±7.65）歲。所選對象均無自身免疫性疾病、外傷及外科手術(shù)等組織損傷。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組年齡及性別差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性（P＞0.05）。

1.2 試劑和儀器 異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記的抗CD14單克隆抗體，藻紅蛋白（PE）標(biāo)記的抗CD64單克隆抗體，同型對照IgG1FITC／IgG2aPE雙色單克隆抗體，以上試劑均購自美國BD Biosciences。血培養(yǎng)瓶和微生物鑒定卡片購自法國梅里埃公司。血清CRP檢測試劑盒購自日本關(guān)東化學(xué)株式會社。所用儀器為：美國BD公司的FACSCalibur流式細(xì)胞儀、日立7180型全自動(dòng)生化分析儀、Sysemex XT－1800全自動(dòng)五分類細(xì)胞分析儀、法國梅里埃公司的Bace／Alert3D全自動(dòng)血培養(yǎng)儀和VITEK2compact微生物鑒定儀。

1.3 標(biāo)本采集 所有研究對象均在高熱寒戰(zhàn)時(shí)及抗生素治療前抽取靜脈血注入血培養(yǎng)瓶中，立刻送檢，同時(shí)，采集靜脈血2ml于乙二胺四乙酸K2抗凝管保存，采集后6h內(nèi)處理分析。另外4ml靜脈血于干燥管，靜置1h，3 000r／min低溫離心10min（離心半徑為17.5cm），提取血清后置－70℃冰箱保存，統(tǒng)一測定。

1.4 檢測方法 （1）中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)檢測：取2支流式試管，各取100μl抗凝全血，分別加入熒光標(biāo)記CD14FITC／CD64PE，IgG1FITC／ IgG2aPE單克隆抗體各20μl，室溫避光孵育20 min，加紅細(xì)胞裂解液2ml，渦旋混勻，避光10min，300g／min離心5min，棄上清，用磷酸鹽緩沖液清洗2次，加入含1%多聚甲醛的PBS 0.5ml。置流式細(xì)胞儀按常規(guī)進(jìn)行分析。以前向角、側(cè)向角光信號及FL1（CD14－FITC）熒光信號分別對淋巴細(xì)胞群、單核細(xì)胞群及中性粒細(xì)胞群進(jìn)行設(shè)門，相應(yīng)熒光標(biāo)記的同型對照染色細(xì)胞為陰性對照，同時(shí)調(diào)節(jié)電壓，閾值，各通道之間的熒光補(bǔ)償，以淋巴細(xì)胞作為內(nèi)部陰性對照，單核細(xì)胞作為內(nèi)部陽性對照，分析各細(xì)胞群CD64平均熒光強(qiáng)度，計(jì)算中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)。每個(gè)樣品收集10000個(gè)細(xì)胞。檢測前使用BD Calibrite三色Beads校準(zhǔn)流式細(xì)胞儀，嚴(yán)格按照說明書操作。用cellquest軟件分析結(jié)果。（2）血清CRP和WBC檢測嚴(yán)格按照操作說明書操作。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。對于正態(tài)分布的計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x—±s）表示，多組計(jì)量資料比較采用單因素方差分析F檢驗(yàn)，多個(gè)均數(shù)之間兩兩比較采用q檢驗(yàn)；偏態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)（M）、四分位數(shù)間距（Q）表示，兩組間比較采用Mann－Whitney U檢驗(yàn)，多組間比較采用Kruskal－Wallis H檢驗(yàn)，多組間兩兩比較Nemenyi檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血液細(xì)菌培養(yǎng)陽性患者中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)、CRP及WBC水平

與正常組比較，血液細(xì)菌培養(yǎng)陽性組和陰性組中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)、CRP、WBC水平及N／L比值明顯升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。陽性組中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)、CRP水平及N／L比值明顯高于陰性組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05），WBC水平變化不明顯，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 血液細(xì)菌培養(yǎng)陽性患者中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)、CRP及WBC水平（以M和Q表示）

2.2 G＋菌感染患者中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)、CRP及WBC水平

與G－菌組比較，G＋菌組中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)、N／L比值明顯降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），CRP與WBC水平雖略有減低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 G＋菌感染患者中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)、CRP及WBC水平（以M和Q表示）

2.3 血液細(xì)菌培養(yǎng)陽性患者中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)、CRP及WBC間相關(guān)分析

結(jié)果顯示，陽性組患者外周血中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)與CRP呈正相關(guān)（P＜0.05），與其他指標(biāo)間均無相關(guān)性。

3 討論

CD64是相對分子量為72000的跨膜糖蛋白，是IgG的Fc段高親和力受體，屬免疫球蛋白超家族的成員，主要分布于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及樹突細(xì)胞表面。中性粒細(xì)胞表面CD64在靜息時(shí)微量表達(dá)，當(dāng)機(jī)體感染或內(nèi)毒素入侵時(shí)可在刺激后4－6小時(shí)立即升高［6］。大量表達(dá)的CD64可通過抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒作用、細(xì)胞吞噬作用、免疫復(fù)合物作用及釋放細(xì)胞因子等清除病原微生物［7］。本研究結(jié)果顯示，陽性組和陰性組中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)明顯高于正常組，并且陽性組高于陰性組，表明當(dāng)機(jī)體受到細(xì)菌感染后，中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)開始升高，隨著病情的加重，細(xì)菌由感染部位進(jìn)入血液，呼吸爆發(fā)活動(dòng)增強(qiáng)，中性粒細(xì)胞進(jìn)一步活化，CD64指數(shù)增加［8］，中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)可能有助于血液細(xì)菌感染的早期診斷［9］，本研究結(jié)果還顯示，G＋菌組中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)低于G－菌組，認(rèn)為中性粒細(xì)胞CD64的活化對G－菌感染刺激更為敏感，可能與G＋菌和G－菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，抗原性及毒性有關(guān)。中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)在鑒別G＋菌與G－菌感染時(shí)可作為參考指標(biāo)。

CRP是一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，由肝臟合成，急性感染時(shí)，CRP水平升高，6－12小時(shí)到達(dá)高峰，病情好轉(zhuǎn)隨機(jī)下降，是細(xì)菌感染的敏感指標(biāo)［2］。WBC是人類非特異性免疫的重要組成部分，在機(jī)體免疫防御和抵抗病原菌侵襲過程中發(fā)揮重要作用［10］。本研究結(jié)果顯示，陽性組和陰性組CRP、WBC及N／L比值均明顯高于正常組，且陽性組CRP和N／L比值高于陰性組，表明機(jī)體受到細(xì)菌刺激后，免疫防御增強(qiáng)，CRP、WBC及N／L比值均增加，但CRP和N／L比值增加明顯，可能隨著細(xì)菌侵襲入血液，CRP和 N／L比值能更好反映細(xì)菌感染性程度，CRP和N／L比值在反映病情嚴(yán)重程度方面優(yōu)于WBC。值得注意的是，在G＋菌組和G－菌組比較中發(fā)現(xiàn)，N／L比值在G＋菌組明顯低于G－菌組，N／L比值不僅可作為細(xì)菌感染的檢測指標(biāo)，而且可能有助于血液感染中G＋菌與G－菌的鑒別。

此外，相關(guān)性分析顯示，陽性組患者中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)與CRP呈正相關(guān)，2項(xiàng)指標(biāo)的聯(lián)合檢測可能對早期診斷血液感染價(jià)值更大。但中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)測定需要昂貴儀器，技術(shù)含量高，而N／L比值測定儀器價(jià)廉、方法簡單、易于操作和推廣，聯(lián)合檢測CRP和N／L比值可能更適用于基層。

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Changes of neutrophil CD64 index，C－reaction protein and white blood cell levels in patients with blood bacterial infection

LI Chao，YUAN Bao－jun，ZHANG Shu－qing，et al.（Department of Clinical Laboratory，Kai Luan General Hospital，Tangshan063000，China）

ObjectiveTo explore the changes and significance of neutrophil CD64index，C－reaction protein（CRP），white blood cell（WBC）and ratio of neutrophil and lymphocyte（N／L）in patientis with blood bacterial infection.Methods The levels of peripheral blood neutrophil CD64index，WBC and serum CRP were determined in 105patients with positive blood culture（positive group），66patients with negative blood culture（negative group）and 50healthy controls（normal group）by Flow cytometer，hematology analyzer and immunoturbidimetry.Results Compared with healthy controls，CD64index，WBC，CRP and N／L values in positive group and negative group patients were significantly increased（all P＜0.01），CD64index，CRP and N／L values in positive group patients were significantly higher than that in negative group（P＜0.01，P＜0.05）.CD64index and N／L values in Gram positive patients were significantly decreased compared with Gram negative patients（P＜0.05）.There was a slight positive correlation between CD64index and CRP in positive group patients（rs＝0.377，P＜0.05）.Conclusion CD64index，CRP and N／L are sensitive indexes for patientis with blood bacterial infection.CD64index and N／L ratio may be useful for distinguishing between Gram positive or Gram negative infections.

neutrophil CD64index；C－reaction protein；white blood cell；blood bacterial infection

R515.3

A

李超（1976－），女，副主任技師，主要從事臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)及研究。

2014－10－17）

1007－4287（2015）10－1693－04

＊通訊作者