華 杰

（應(yīng)城市人民醫(yī)院檢驗科，湖北孝感432400）

風濕性心臟病患者外周血細胞因子和Treg細胞檢測的意義

華 杰

（應(yīng)城市人民醫(yī)院檢驗科，湖北孝感432400）

風濕性心臟?。╮heumatic heart disease，RHD）為一種自身免疫性疾病，由A組乙型溶血性鏈球菌感染導致風濕熱后遺癥，主要病理基礎(chǔ)為受累心臟瓣膜發(fā)生彌漫性纖維化，瓣口狹窄，或關(guān)閉不全，引發(fā)心臟血流動力學紊亂，占心臟外科疾病約30%［1］。RHD患者體內(nèi)存在有對心肌、心內(nèi)外膜、血管平滑肌起反應(yīng)的抗體，發(fā)生鏈球菌感染時可激發(fā)機體發(fā)生自身免疫反應(yīng)，出現(xiàn)相應(yīng)病變。RHD患者免疫功能顯著低于正常人［2］。鏈球菌M蛋白為一種超抗原，可大量激活機體內(nèi)T細胞、自身反應(yīng)性T細胞，誘發(fā)RHD［3］。筆者回顧性分析32例RHD患者的臨床資料，以探討IL－10、TGF－β1等外周血細胞因子的血清濃度與CD4＋、CD25＋、Foxp3＋Treg水平在RHD發(fā)生發(fā)展中的意義，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年2月－2013年10月我院診治的RHD患者32例，男18例，女14例，年齡39－69歲，平均年齡（45.2±6.3）歲。所有患者均經(jīng)過超聲心動圖與瓣膜術(shù)后病檢確診RHD，紐約心臟病學會心功能分級為Ⅱ－Ⅳ級，排除合并肝腎功能不全、冠心病、急慢性感染、惡性腫瘤、甲狀腺功能亢進、糖尿病、近期使用免疫調(diào)節(jié)制劑、近期有風濕活動及其他自身免疫性疾病患者。合并單純二尖瓣狹窄患者13例，二尖瓣狹窄并關(guān)閉不全患者15例，二尖瓣及主動脈瓣狹窄并關(guān)閉不全患者4例。選擇同期健康查體人員32例為對照組，兩組患者在年齡、性別、生活環(huán)境等方面比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

1.2 方法 選擇美國BioLegend公司生產(chǎn)的Foxp3－APC單克隆抗體、熒光抗體鼠抗人CD4－FITC、CD25－PE，選擇美國R＆D公司生產(chǎn)的IL－10、TGF－β1的ELISA試劑盒。抽靜脈血10ml，經(jīng)肝素抗凝。5ml離心后取血清，采用ELISA法檢測IL－10、TGF－β1；5ml用淋巴細胞分離液分離單個核細胞（PBMC），計數(shù)細胞后，將細胞濃度調(diào)整至1×106／ml。取細胞懸液100μl，加入20μl CD4－FITC、CD25－PE抗體，室溫避光反應(yīng)20min，離心棄上清，加入固定破膜液1ml，室溫孵育20min，加入20μl Foxp3－APC抗體，避光反應(yīng)30min，染色緩沖液洗滌離心，流式細胞儀檢測，以CD4設(shè)門分析CD4＋CD25＋Foxp3＋細胞亞群，每份計數(shù)為104個細胞，以CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg細胞占CD4＋T淋病細胞比例表示結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計學方法 使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，計量資料采用均數(shù)±標準差（x—±s）表示，兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗，以P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者IL－10、TGF－β1濃度比較 經(jīng)上述檢測分析，觀察組IL－10及TGF－β1濃度均顯著低于對照組（P＜0.01）。詳見表1。

IL－10觀察組組別n TGF－β1 32 25.6±4.5 7.3±2.9對照組32 32.6±4.4 13.2±2.6 T 6.29 8.56 P 0.000.00

2.2 兩組患者Treg細胞比較 經(jīng)上述檢測及對比分析，觀察組CD4＋CD25＋細胞／淋巴細胞比值及CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg／CD4＋T細胞比值均顯著高于對照組（P＜0.01）。詳見表2。

表2 兩組患者Treg細胞比較

表2 兩組患者Treg細胞比較

細胞觀察組32例組別例數(shù)CD4＋CD25＋細胞／淋巴細胞CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg／CD4＋T 5.8±0.6 2.9±0.3對照組32例2.7±0.8 1.4±0.3 T 17.53 20.00 P 0.0000.000

3 討論

風濕性心臟病為一種自身免疫性疾病導致的結(jié)果，與多種細胞因子共同作用有關(guān)。IL－10是一種抗炎因子，由多種細胞分泌，具有抑制多種炎癥因子與自身抗體合成的作用［4］。本研究中觀察組IL－10顯著低于對照組（P＜0.05）。提示當心臟的瓣膜出現(xiàn)自身免疫炎癥時，因機體內(nèi)抗炎因子IL－10含量降低使炎性因子持續(xù)存在，瓣膜局部長期受炎性因子的侵蝕出現(xiàn)病變，形成心臟瓣膜病。TGF－β主要有TGF－β1、TGF－β2、TGF－β3三種類型。各種淋巴細胞、樹突狀細胞、單核細胞及血小板可分泌合成TGF－β1，有研究發(fā)現(xiàn)RHD伴心衰患者心肌中TGF－β1表達顯著增強，與左室大小密切相關(guān)［5］。在離體受損瓣膜中內(nèi)皮基質(zhì)細胞、浸潤的成纖維細胞、巨噬細胞中均發(fā)現(xiàn)有TGF－β增加，對纖維化、鈣化、膠原沉積具有促進作用［6］。本研究表明觀察組患者體內(nèi)TGF－β1顯著低于對照組（P＜0.01）。提示RHD與血清中TGF－β1含量關(guān)系不大，但心臟瓣膜炎癥時，因局部淋巴細胞浸潤，TGF－β1表達增加的淋巴細胞可通過局部旁分泌TGF－β1，到達局部心肌、瓣膜組織中，因此僅表現(xiàn)為局部TGF－β1升高導致瓣膜發(fā)生病變。

Treg細胞對自身免疫性疾病的發(fā)生具有抑制作用，當CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg細胞減少時，機體的細胞免疫功能低下，體液免疫功能增強，此時B細胞被活化，機體產(chǎn)生大量抗體出現(xiàn)自身損害，即發(fā)生自身免疫性疾?。?］。同時因致病因子的不斷擴散、長期持續(xù)存在，使疾病不斷反復發(fā)作［8］。有研究證實［9］類風濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性硬化癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、白塞病、原發(fā)性干燥綜合征等風濕性疾病患者體內(nèi)Treg細胞比例均比健康人低［10］。本研究中進一步證實了RHD患者體內(nèi)Treg細胞顯著低于健康人（P＜0.05）。提示機體更易發(fā)生自身免疫性疾病，RHD患者病程較長，且易反復，可能與Treg細胞減少與致病因子擴散且長期存在有關(guān)?；颊咝呐K瓣膜受自身抗體的長期攻擊，持續(xù)的免疫炎性反應(yīng)使瓣膜增厚、攣縮，最終出現(xiàn)心臟瓣膜性疾?。?1］。TGF－β可刺激T細胞產(chǎn)生大量Treg，TGF－β1降低［12］，T細胞產(chǎn)生Treg細胞減少，RHD患者體內(nèi)CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg也相應(yīng)減少。同時Treg細胞主要通過分泌IL－10、TGF－β1發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，RHD患者體內(nèi)CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg細胞減少，同時血清中IL－10、TGF－β1濃度也相應(yīng)減低。說明RHD患者免疫異常與IL－10、TGF－β1的降低及Treg細胞的減少均有關(guān)。

綜上所述，IL－10、TGF－β1等外周血細胞因子血清濃度及CD4＋、CD25＋、Foxp3＋Treg等調(diào)節(jié)性T細胞的檢測能夠反映RHD患者的免疫功能，對于患者病情的評估及預(yù)后的評價均具有重要意義。

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2014－07－22）

1007－4287（2015）10－1752－02