吳坤芳，蔡玉玲

（海南省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，海南?？?70311）

紅細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)元特異性烯醇化酶檢測(cè)

吳坤芳，蔡玉玲

（海南省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，海南?？?70311）

神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron－specific enolase，NSE）是參與糖酵解途徑的烯醇化酶中的一種，存在于神經(jīng)組織和神經(jīng)內(nèi)分泌組織中。常人血清NSE水平為5－15ng／ml，而紅細(xì)胞內(nèi)NSE及其同工酶的含量測(cè)定尚未見(jiàn)報(bào)道，我們現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析如下。

1 .材料和方法

1.1 樣本 收集在我院做健康體檢且體檢各項(xiàng)指標(biāo)均在生物參考區(qū)內(nèi)人員20名，男、女各10名。男性最大年齡81歲，最小29歲，平均44.6歲。女性最大年齡55歲，最小22歲，平均41歲。

1.2 方法 抽取血清2ml和紅細(xì)胞懸液10ml（1 ml全血加9ml生理鹽水）。紅細(xì)胞懸液用生理鹽水洗滌3次（2 000r／10分鐘），配成一定比例的紅細(xì)胞懸液混均在Sysmex－XE2100血球儀測(cè)血常規(guī)，取紅細(xì)胞、血紅蛋白、平均紅細(xì)胞體積、血小板數(shù)。然后取20μl加380μl蒸餾水溶血后行NSE測(cè)定，血清和紅細(xì)胞懸液離心（3 000r／5分鐘）取上清液行NSE測(cè)定。所有實(shí)驗(yàn)在2小時(shí)內(nèi)完成。

1.3 儀器和試劑 NSE測(cè)定使用Roche、cobas－C601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，Sysmex－XE2100血球儀檢測(cè)血常規(guī)，試劑和定標(biāo)本液均采用原公司產(chǎn)品，質(zhì)控為伯樂(lè)公司提供。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 取均值和標(biāo)準(zhǔn)差。按計(jì)算平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度和平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量的方法，計(jì)算平均紅細(xì)胞內(nèi)NSE濃度和平均紅細(xì)胞內(nèi)NSE含量。根據(jù)男、女平均紅細(xì)胞內(nèi)NSE濃度與血清平均NSE濃度計(jì)算其相差倍數(shù)。根據(jù)紅細(xì)胞內(nèi)NSE平均含量與血紅蛋白平均含量計(jì)算溶血每產(chǎn)生1g／L Hb測(cè)出多少μg／L的NSE。男、女之間平均紅細(xì)胞內(nèi)NSE濃度與溶血每產(chǎn)生1g／L Hb就可以產(chǎn)生多少μg／L的NSE，采用配對(duì)t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 紅細(xì)胞洗滌3次后，90%以上的血小板已被清除，達(dá)到洗滌的目的。溶血NSE值為20μl紅細(xì)胞懸液加入380μl蒸餾水溶血后所測(cè)NSE值減上清液檢測(cè)的NSE值再乘上稀釋倍數(shù)20。

2.2 平均紅細(xì)胞內(nèi)NSE濃度是血清濃度的817倍，其中男性為726倍、女性為922倍，女性高。但是平均紅細(xì)胞內(nèi)NSE濃度男、女之間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，t值為0.336。平均紅細(xì)胞內(nèi)NSE含量與紅細(xì)胞大小有關(guān)系，大細(xì)胞含量較小細(xì)胞多。男性溶血每產(chǎn)生1g／L Hb就可以產(chǎn)生24.84μg／L的NSE，女性溶血每產(chǎn)生1g／L Hb就可以測(cè)出27.83 μg／L的NSE，男性比女性低，（t＝1.25），差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.3 平均紅細(xì)胞內(nèi)NSE含量為（747.46±115.9）×10－12μg，平均紅細(xì)胞內(nèi)NSE濃度為（8.61± 1.48）×103μg／L。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 男、女性血清及紅細(xì)胞內(nèi)NSE含量和濃度檢測(cè)結(jié)果（x—±s）

3 討論

NSE是烯醇化酶的一種同工酶，其特異地存在于神經(jīng)元、神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)，其他臟器及腦脊液中的分布水平不及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的1%。由于NSE是神經(jīng)元損傷的敏感性和特異性生化標(biāo)志物，近年來(lái)有關(guān)顱腦損傷后血清與腦脊液中NSE活性改變的研究受到越來(lái)越多的關(guān)注，大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床研究表明，NSE活性改變與疾病的早期診斷、病情變化、臨床預(yù)后密切相關(guān)。NSE檢測(cè)作為腫瘤標(biāo)志物可提高肺癌診斷的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性［1］。血清NSE濃度是反映新生兒HIE嚴(yán)重程度的敏感生化指標(biāo)，NSE濃度變化趨勢(shì)是新生兒HIE預(yù)后評(píng)估的有效指標(biāo)之一［2］。NSE濃度變化趨勢(shì)可預(yù)示腦組織損傷程度［3］。

紅細(xì)胞和血小板內(nèi)有其同工酶，與NSE存在部分交叉免疫反應(yīng)［4］。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)：平均紅細(xì)胞內(nèi)NSE的濃度為8.61±1.48×103μg／L，是正常人群血清平均濃度10.54±2.63μg／L的817倍。女性溶血每產(chǎn)生1g／LHb就可以測(cè)出27.83μg／L的NSE，男性溶血每產(chǎn)生1g／L Hb就可以測(cè)出24.84 μg／L的NSE，女性高于男性是因?yàn)榕约t細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白低于男性，（t＝1.25），差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。溶血濃度與NSE測(cè)定值程正相關(guān)。這與鄒自英報(bào)道：溶血每產(chǎn)生1g／LHb可以測(cè)出34.53μg／L的 NSE［5］，結(jié)果相似。NSE測(cè)定的生物參考區(qū)為0－16.3μg／L，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)稍有溶血NSE檢測(cè)值就可能超出測(cè)定的生物參考區(qū)，如果不注意標(biāo)本的留取和送檢而造成紅細(xì)胞損傷就會(huì)造成錯(cuò)誤的檢測(cè)結(jié)果，誤導(dǎo)臨床診斷和治療。

紅細(xì)胞內(nèi)NSE濃度是清血濃度的817倍。它比AST（10倍）、ALT（7倍）、K＋（23倍）、CK（69倍）［6］，高很多倍。從檢測(cè)平均紅細(xì)胞內(nèi)NSE含量和濃度說(shuō)明血清NSE檢測(cè)對(duì)標(biāo)本的要求極高，紅細(xì)胞稍有損傷就可出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，所以應(yīng)禁止有溶血的標(biāo)本進(jìn)行NSE水平測(cè)定。

［1］李佩青，周 偉，張喆，等.血清神經(jīng)元特異性烯醇化酶與圍產(chǎn)兒缺氧缺血性腦病相關(guān)性研究［J］.中國(guó)婦幼保健，2013、15：2402.

［2］郝立成，張 雙，李樹華.血清BDNF及NSE檢測(cè)在驚厥兒童中的臨床應(yīng)用價(jià)值［J］.中國(guó)婦幼保健，2013，5：783.

［3］姜艷紅，劉 冰，呂曉嫻.電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)神經(jīng)元特異性烯醇化酶影響因素分析［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2012，09：1944.

［4］張亞松，肖登巖，麥富巨.溫度、時(shí)間及溶血對(duì)全血標(biāo)本中NSE測(cè)定的影響［J］.醫(yī)學(xué)臨床研究，2008，7（25）：1193.

［5］鄒自英，黃 海，袁成良.標(biāo)本保存時(shí)間和溶血對(duì)神經(jīng)元特異性烯醇化酶測(cè)定的影響［J］.西南國(guó)防醫(yī)藥，2006，6：610.

［6］GUDER WG.Thrombocytes as aninterfering factor in chinical chemisty［J］.Clin chem.Clin Biochem，2002，28（6），445.

2014－09－18）

1007－4287（2015）10－1762－02