王麗華 龐 棟 李巧玲 劉 霞

·實(shí)驗(yàn)研究·

厄貝沙坦對(duì)高脂飲食兔肝臟低密度脂蛋白受體活性影響

王麗華 龐 棟 李巧玲 劉 霞

目的 通過研究厄貝沙坦對(duì)高脂血癥兔肝臟低密度脂蛋白受體(LDLR)活性的影響, 來探討其對(duì)脂代謝異常的影響。方法 30只長耳兔隨機(jī)分為模型組、實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組, 各10只。實(shí)驗(yàn)開始前、實(shí)驗(yàn)?zāi)┏檠? 檢測各組血脂水平；實(shí)驗(yàn)?zāi)└闻K多點(diǎn)取材, 依據(jù)Fromowitz陽性細(xì)胞半定量分級(jí)法判斷肝組織LDLR表達(dá)。結(jié)果 模型組實(shí)驗(yàn)后TC、LDL-C、TG明顯升高, 與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)組兔治療后血清總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)明顯升高,與對(duì)照組比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；實(shí)驗(yàn)組兔治療后肝臟LDLR表達(dá)的陽性率為100%, 強(qiáng)陽性率為40%, 較模型組增加, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 厄貝沙坦雖然不能降低血漿低密度脂蛋白(LDL)水平, 但可以上調(diào)兔肝臟LDLR, 從而發(fā)揮調(diào)節(jié)脂代謝的作用。

高脂血癥；肝病理學(xué)；免疫組織化學(xué)；厄貝沙坦；低密度脂蛋白受體

高血壓、高脂血癥是冠心病的主要危險(xiǎn)因素, 既往研究顯示, 高脂血癥特別是低密度脂蛋白膽固醇水平與冠心病發(fā)生發(fā)展呈顯著正相關(guān)［1,2］。厄貝沙坦是常用的血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑, 本研究通過研究厄貝沙坦對(duì)高脂血癥兔肝臟LDLR活性的影響, 來探討其對(duì)脂代謝異常的影響?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 2.0～2.5 kg日本長耳兔, 均為雄性, 購自山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.1.2 試劑與儀器 血脂檢測所用試劑盒為四川省邁克科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)；血脂測定所用儀器為日立生化儀(美國羅氏)；LDLR主要試劑：一抗為兔抗LDLR(即用型SABC免疫組化)試劑盒, 二抗為生物素化山羊抗兔IgG(DAB顯色)試劑盒, 為武漢博士德生物工程有限公司生產(chǎn)。

1.1.3 飼料 普通飼料；高膽固醇飼料。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組與喂養(yǎng) 將日本長耳兔按體重隨機(jī)分為模型組、實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組, 每組10只。模型組給予高膽固醇飼料12周, 200 g/d, 后連給予普通飼料12周, 120～140 g/d,共24周。實(shí)驗(yàn)組喂養(yǎng)飼料與模型組相同, 同時(shí)按照75 mg/d給予厄貝沙坦灌胃, 共24周。對(duì)照組給予普通飼料24周, 200 g/d。

1.2.2 血脂測定 實(shí)驗(yàn)開始前、實(shí)驗(yàn)?zāi)┘吹?4周末, 空腹12 h以上, 耳緣靜脈抽血, 檢測各組血清血脂濃度, 包括：TC、LDL-C、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、TG。

1.2.3 肝組織LDLR表達(dá) 實(shí)驗(yàn)?zāi)? 將動(dòng)物處死, 肝臟多點(diǎn)取材, 石蠟切片脫蠟, 滴加3%H2O2后, 室溫孵育10 min。磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗, 3 min/次, 沖洗3次后, 加正常山羊血清以封閉, 室溫下孵育30 min, 去除血清后加一抗, 4℃條件下過夜。PBS沖洗3 min/次, 沖洗3次后, 滴加二抗, 37℃孵育30 min。PBS沖洗3 min/次, 沖洗3次后, 加入顯色劑顯色,蘇木素復(fù)染后封片。顯微鏡下觀察肝組織LDLR表達(dá), 結(jié)果判斷依據(jù)Fromowitz陽性細(xì)胞半定量分級(jí)法［3］。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( -x±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兔血漿脂質(zhì)水平變化 對(duì)照組兔實(shí)驗(yàn)前、后血脂水平統(tǒng)計(jì)學(xué)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。模型組兔實(shí)驗(yàn)開始血脂與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；實(shí)驗(yàn)后TC、LDL-C、TG明顯升高, 與對(duì)照組比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01), HDL-C與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。實(shí)驗(yàn)組兔實(shí)驗(yàn)開始時(shí)血脂與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；治療后TC、LDL-C、TG明顯升高, 與對(duì)照組比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；與模型組比較, 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。

表1 兔血漿脂質(zhì)水平檢測指標(biāo)( x-±s, mmol/L)

2.2 肝組織LDLR的表達(dá) 于光鏡下見藍(lán)色細(xì)胞核及胞漿內(nèi)分布不均勻的棕色顆粒, 對(duì)照組兔棕色顆粒沉著較少, 模型組兔棕色顆粒沉著增多, 實(shí)驗(yàn)組兔棕色顆粒沉著增多, 與模型組類似。對(duì)照組肝LDLR表達(dá)陽性率為100%, 強(qiáng)陽性率為20%；模型組肝臟低密度脂蛋白受體表達(dá)表達(dá)的陽性率為70%, 強(qiáng)陽性率為0, 強(qiáng)陽性率與對(duì)照組比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；實(shí)驗(yàn)組肝臟低密度脂蛋白受體表達(dá)的陽性率為100%, 強(qiáng)陽性率為40%, 與模型組比較, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

3 討論

人血液中70%的膽固醇由低密度脂蛋白和極低密度脂蛋白攜帶。LDL是機(jī)體轉(zhuǎn)運(yùn)內(nèi)源性膽固醇到全身組織的主要形式。LDL代謝的最主要途徑是受體介導(dǎo)途徑［3］, 正常情況下, LDLR途徑降解了大部分LDL, 巨噬細(xì)胞等非受體介導(dǎo)途徑清除少部分LDL。因此LDLR對(duì)于血漿LDL維持相對(duì)恒定的水平作用顯著。全身組織細(xì)胞均分布有LDLR, 而大約全身LDLR總數(shù)的3/4為肝細(xì)胞LDLR。既往研究顯示, 飲食中的膽固醇可以下調(diào)肝臟LDLRmRNA, 從而導(dǎo)致血LDL的升高［4］。丹參、肝細(xì)胞生長因子及雌激素等能提升高脂血癥大鼠肝臟LDLR的mRNA水平［5］, 從而使LDLR的抑制狀態(tài)解除, 使LDLR的表達(dá)增加, 從而使血中的LDL得以降低, 起到調(diào)控血脂水平的作用。厄貝沙坦是屬于血管緊張素受體拮抗劑的抗高血壓藥物。曾有研究提示厄貝沙坦在降低血壓的同時(shí)可能具有調(diào)節(jié)血脂代謝的作用, 分析其機(jī)制為：①姚琰等［6］研究發(fā)現(xiàn)厄貝沙坦可以改善高血壓患者的胰島素抵抗, 提高對(duì)胰島素的敏感性, 達(dá)到調(diào)節(jié)血脂的目的；②厄貝沙坦可以抑制血管平滑肌細(xì)胞(SMC)的遷移、增殖［7］,從而減少動(dòng)脈壁膽固醇的合成［8］。此外, 厄貝沙坦阻滯血管緊張素胎Ⅱ受體后, 可有效阻斷血管收縮, 并可改善紅細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)缺陷, 降低了血液粘度。本實(shí)驗(yàn)顯示, 高膽固醇飲食可以使兔肝臟低密度脂蛋白膽固醇受體的表達(dá)明顯下降,這有可能是高膽固醇血癥的代償性反應(yīng), 但這種代償反應(yīng)有限, 同時(shí)高膽固醇飲食又可以使血中LDL-C升高；厄貝沙坦雖然不能降低血漿LDL水平, 但可以上調(diào)兔肝臟LDLR, 從而發(fā)揮調(diào)節(jié)脂代謝的作用。

［1］ 劉同濤, 龐棟, 田慶印, 等.厄貝沙坦對(duì)高脂飲食兔肝臟SR-BI活性影響.中國公共衛(wèi)生, 2008(11):1363-1364.

［2］ 胡定波, 李滎娟, 湯日寧, 等.羅格列酮和厄貝沙坦對(duì)高膽固醇血癥大鼠血脂及心肌脂聯(lián)素的干預(yù)作用.中國新藥與臨床雜志, 2009(2):115-119.

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［6］ 姚琰, 王穎, 葉迎春.厄貝沙坦對(duì)2型糖尿病并發(fā)高血壓患者胰島素抵抗的影響.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2011, 30(4):472-474.

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10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.21.204

2015-03-23］

250013 濟(jì)南醫(yī)院內(nèi)科

龐棟