李 麗，尉 莉，馬 琳

β受體阻滯劑對(duì)體外培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生及凋亡的影響

李 麗，尉 莉，馬 琳

李 麗

目的 了解普萘洛爾、阿替洛爾、醋丁洛爾及噻嗎洛爾對(duì)體外培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞增生及凋亡的影響。方法 對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，分別加入9種濃度的4種藥物，設(shè)立陰性及陽(yáng)性對(duì)照，采用cell counting kit-8（CCK-8）法檢測(cè)細(xì)胞增生，Annexin-V FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。結(jié)果 ①同一藥物不同濃度之間抑制率比較：普萘洛爾和阿替洛爾結(jié)果一致，各個(gè)濃度之間抑制率P均＜0.05；醋丁洛爾和噻嗎洛爾結(jié)果一致，3.125 μmol/L與12.5 μmol/L及12.5 μmol/L與50 μmol/L抑制率P均＞0.05，其余濃度間抑制率P均＜0.05。②同一濃度的不同藥物之間抑制率比較：在200、100、50 μmol/L 3種濃度時(shí)，普萘洛爾與阿替洛爾、醋丁洛爾及噻嗎洛爾抑制率比較P均＜0.05，后3種藥物抑制率比較P均＞0.05；在25 μmol/L濃度時(shí)，普萘洛爾與醋丁洛爾抑制率比較P均＜0.05；其余藥物抑制率比較P均＞0.05。在12.500、6.250、3.125、1.562 5、0.781 3 μmol/L這5種濃度中，同一濃度的不同藥物抑制率比較P均＞0.05。③對(duì)細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)：普萘洛爾、阿替洛爾與陰性對(duì)照組凋亡率比較P均＜0.05；阿替洛爾、普萘洛爾、醋丁洛爾和噻嗎洛爾與二氯化鈷組凋亡率比較P均＜0.05；而阿替洛爾、普萘洛爾、醋丁洛爾和噻嗎洛爾4種藥物凋亡率比較P均＞0.05。結(jié)論 4種藥物均可抑制細(xì)胞增生，普萘洛爾作用最強(qiáng)，且隨著藥物濃度增加抑制作用也明顯增強(qiáng)；4種藥物均可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，但彼此之間無(wú)明顯差異。

β受體阻滯劑；增生，人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞；血管瘤

[J Pract Dermatol, 2015, 8(6):411-414]

嬰兒血管瘤是嬰兒期最常見(jiàn)的良性腫瘤，由胚胎期間的血管組織增生而形成，以血管內(nèi)皮細(xì)胞異常增生為特點(diǎn)，發(fā)生在皮膚和軟組織的良性腫瘤。自從2008年Léauté-Labrèze[1]發(fā)現(xiàn)普萘洛爾對(duì)嬰兒血管瘤有很好的療效后，已有臨床隨機(jī)對(duì)照研究證明普萘洛爾治療嬰兒血管瘤安全而有效[2]。目前，普萘洛爾已成為治療高風(fēng)險(xiǎn)級(jí)別嬰兒血管瘤的一線藥物[3]。由于普萘洛爾為非選擇性β1及β2受體阻滯劑，其β1受體阻斷作用可引起心率減慢、低血壓，β2受體阻斷可誘發(fā)支氣管平滑肌收縮和支氣管哮喘，另外還可能引起低血糖等不良反應(yīng)。故已有學(xué)者在臨床上嘗試使用其他β受體阻滯劑，如阿替洛爾為選擇性β1受體阻滯劑，用于對(duì)普萘洛爾耐受性較差的血管瘤患兒，取得了很好的療效，且不良反應(yīng)較少[4]。醋丁洛爾為選擇性β1受體阻滯劑，也具有一定的內(nèi)源性擬交感活性，可以減少對(duì)心臟的抑制作用，臨床應(yīng)用更安全。有研究報(bào)道，口服普萘洛爾治療血管瘤停藥后復(fù)發(fā)，采用醋丁洛爾取得了良好的療效，并且未見(jiàn)明顯的不良反應(yīng)[5]。同時(shí)已有大量文獻(xiàn)報(bào)道外用噻嗎洛爾治療淺表型嬰兒血管瘤取得了很好的療效[6]。

盡管有大量臨床研究報(bào)道[7]，但關(guān)于這4種β受體阻滯劑在抑制細(xì)胞增生及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡方面的作用有無(wú)差別尚不清楚。本研究擬通過(guò)體外人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells , HUVEC）培養(yǎng)、加入100 μmol/L二氯化鈷對(duì)細(xì)胞進(jìn)行刺激后使其迅速增生，從而模擬體內(nèi)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞增生模式，觀察不同濃度普萘洛爾、阿替洛爾、醋丁洛爾及噻嗎洛爾干預(yù)下HUVEC的增生及凋亡。

1 資料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 細(xì)胞株 HUVEC由南京凱基生物科技發(fā)展有限公司提供。完全培養(yǎng)基為90% RPMI-1640+10% FBS，于37℃、5%CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。試驗(yàn)細(xì)胞加入100 μmol/L二氯化鈷進(jìn)行刺激24 h，使其迅速增生；陰性對(duì)照細(xì)胞不加入二氯化鈷及藥物，陽(yáng)性對(duì)照細(xì)胞只加入二氯化鈷，不加入藥物。1.1.2 主要試劑 普萘洛爾、阿替洛爾、醋丁洛爾、噻嗎洛爾、二氯化鈷、青霉素/鏈霉素溶液、0.25% Tripsin-EDTA（南京凱基生物科技發(fā)展有限公司），RPMI-1640（美國(guó) GIBCO），F(xiàn)BS（美國(guó)ExCell Biology），cell counting Kit-8（日本 DOJINDO Laborataries），LDH 試劑盒，Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（南京凱基生物科技發(fā)展有限公司）。

1.1.3 主要儀器與設(shè)備 超凈工作臺(tái)（蘇州凈化 SWCJ-1FD），CO2培養(yǎng)箱（日本 SANYO XD-101），生物倒置顯微鏡（日本OLYMPUS Ⅸ51），臺(tái)式低速離心機(jī)（上海醫(yī)療器械股份有限公司醫(yī)療設(shè)備廠80-2），酶標(biāo)儀（美國(guó)BioTek ELx800），流式細(xì)胞儀（美國(guó) Becton-Dickinson FACS Calibur）。

1.2 方法

1.2.1 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增生 細(xì)胞消化、計(jì)數(shù)，配制成濃度為5×104個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中每孔加入100 μl細(xì)胞懸液；用完全培養(yǎng)基稀釋藥物至所需濃度，每孔加入200 μl相應(yīng)的含藥培養(yǎng)基，同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照組及陽(yáng)性對(duì)照組；將96孔板每孔加入10 μl CCK-8，進(jìn)行CCK-8染色，λ=450 nm，測(cè)定A值；計(jì)數(shù)各組的抑制率，抑制率(%)=(陰性對(duì)照組－試驗(yàn)組)÷陰性對(duì)照組×100%。

1.2.2 Annexin-V FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡 將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞消化接種到6孔板中，次日待細(xì)胞貼壁后，根據(jù)組別設(shè)置加入相應(yīng)的含藥培養(yǎng)基，同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照組；藥物作用24 h后，用0.25%胰酶（不含EDTA）消化收集細(xì)胞；用PBS洗滌細(xì)胞2次（離心2 000 r/min，共5 min）收集5×105細(xì)胞；加入500 μl的Binding Buffer懸浮細(xì)胞；加入5 μl Annexin V-FITC混勻后，加入5 μl propidium iodide，混勻；室溫，避光，反應(yīng)5～15 min；用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（Ex=488 nm；Em=530 nm）細(xì)胞凋亡。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析及卡方檢驗(yàn)，以P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同濃度β受體阻滯劑作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞24 h后對(duì)細(xì)胞增生的影響（表1）

2.1.1 不同濃度β受體阻滯劑對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的抑制作用 9個(gè)濃度組的普萘洛爾、阿替洛爾、醋丁洛爾及噻嗎洛爾均對(duì)增生的血管內(nèi)皮細(xì)胞有一定的抑制作用，隨著濃度的增加，抑制率逐漸上升，濃度越高，對(duì)細(xì)胞增生的抑制作用越強(qiáng)，具有劑量依賴抑制關(guān)系。2.1.2 同一濃度的不同藥物之間抑制率比較 在200、100、50 μmol/L 3種濃度時(shí)，均表現(xiàn)為普萘洛爾抑制作用最強(qiáng)，與阿替洛爾、醋丁洛爾及噻嗎洛爾的抑制作用比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，后三者之間抑制率無(wú)明顯差異。在25 μmol/L濃度時(shí)，普萘洛爾與醋丁洛爾抑制率之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在12.5、6.25、3.125、 1.562 5、0.781 3 μmol/L這5種濃度中，同一濃度的不同藥物之間抑制率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.1.3 二氯化鈷對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的刺激作用 二氯化鈷作為陽(yáng)性對(duì)照，7個(gè)濃度組的二氯化鈷對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞有一定的刺激增生作用，隨著濃度的增加，刺激率逐漸上升，具有劑量依賴刺激關(guān)系。

2.2 不同濃度β受體阻滯劑及二氯化鈷作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞24 h后對(duì)細(xì)胞凋亡的影響

流式儀檢測(cè)結(jié)果顯示，陰性對(duì)照組細(xì)胞凋亡率為8.40%，100 μmol/L二氯化鈷凋亡率為5.86%，200 μmol/L阿替洛爾凋亡率為18.50 %，200 μmol/L普萘洛爾凋亡率為18.57 %，醋丁洛爾 200 μmol/L凋亡率為15.08 %，噻嗎洛爾 200 μmol/L凋亡率為17.05 %。與陰性對(duì)照組比較，阿替洛爾和普萘洛爾與陰性對(duì)照組的細(xì)胞凋亡率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與二氯化鈷組比較，阿替洛爾、普萘洛爾、醋丁洛爾和噻嗎洛爾與二氯化鈷組的細(xì)胞凋亡率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而阿替洛爾、普萘洛爾、醋丁洛爾和噻嗎洛爾4種藥物之間的細(xì)胞凋亡率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖1）。

表1 不同濃度β受體阻滯劑作用24 h對(duì)二氯化鈷誘導(dǎo)后的內(nèi)皮細(xì)胞增生的影響 （±s）

表1 不同濃度β受體阻滯劑作用24 h對(duì)二氯化鈷誘導(dǎo)后的內(nèi)皮細(xì)胞增生的影響 （±s）

注：普萘洛爾、阿替洛爾、醋丁洛爾及噻嗎洛爾4種藥物同一濃度之間比較結(jié)果：與普萘洛爾組比較，*P＜0.05；與阿替洛爾組比較，★P＜0.05；與醋丁洛爾組比較，■P＜0.05。相同藥物不同濃度比較：與陰性組比較，▲P＜0.05；與0.781 3 μmol/L組比較，◆P＜0.05，與3.125 μmol/L組比較，☆P＜0.05；與12.5 μmol/L組比較，◇P＜0.05；與50 μmol/L組比較，△P＜0.05

濃度(μmol/L )普萘洛爾 阿替洛爾 醋丁洛爾 噻嗎洛爾 二氯化鈷實(shí)際（A值） 抑制率（%） 實(shí)際（A值） 刺激增生率（%）200 0.591±0.017▲◆☆◇△51.94 0.915±0.013*▲◆☆◇△30.23 0.876±0.025*▲◆☆◇△28.70 0.812±0.012*▲◆☆◇24.43 1.347±0.05 11.51 100 0.713±0.01 41.99 0.954±0.002* 27.31 0.931±0.013* 24.27 0.829±0.011*22.84 1.395±0.041 15.45 50 0.816±0.011▲◆☆◇33.60 1.042±0.007*▲◆☆ 20.58 0.996±0.026*▲◆☆◇18.99 0.855±0.027*▲◆☆◇20.36 1.371±0.008 13.52 25 0.951±0.027 22.59 1.086±0.048 17.25 1.052±0.04*14.40 0.907±0.023 15.58 1.357±0.003 12.31 12.5 1.012±0.015▲◆☆17.66 1.098±0.01▲◆☆16.34 1.096±0.025▲◆10.79 0.961±0.025▲◆10.52 1.276±0.019 5.60 6.25 1.075±0.033 12.50 1.165±0.016 11.20 1.108±0.013 9.82 0.982±0.021 8.57 1.245±0.003 3.06 3.125 1.126±0.043▲8.38 1.216±0.023▲7.29 1.132±0.027▲7.89 0.997±0.025▲7.20 1.233±0.006 2.10 1.562 5 1.156±0.018 5.94 1.232±0.03*6.12 1.186±0.033 3.53 1.012±0.01 5.74 0.781 3 1.169±0.033 4.88 1.252±0.034 4.60 1.222±0.052 0.60 1.023±0.019 4.72陰性對(duì)照組 1.216±0.036 0 1.302±0.053 0 1.229±0.059 0 1.074±0.051 0 1.208±0.006 0 （%） 實(shí)際（A值） 抑制率（%） 實(shí)際（A值） 抑制率（%） 實(shí)際（A值） 抑制率

圖1 β受體阻滯劑及二氯化鈷作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞24 h后對(duì)細(xì)胞凋亡的影響

3 討論

普萘洛爾目前被認(rèn)為是治療重癥嬰兒血管瘤的一線藥物[3]。雖然其療效確切，但機(jī)制仍未明了。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，普萘洛爾可以通過(guò)低氧誘導(dǎo)性因子-1α-血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-A (HIF-1α-VEGF-A)軸發(fā)揮其對(duì)血管瘤的抑制作用，普萘洛爾引起HIF-1α通路抑制血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞VEGF-A的表達(dá)[8]。另外，信號(hào)肽介導(dǎo)通路包括PI3/Akt和p38/MAPK，能減少內(nèi)皮細(xì)胞的遷移、血管發(fā)生和最終的凋亡，最后直接引起細(xì)胞毒性效應(yīng)。Tazi等[9]研究得出普萘洛爾能使內(nèi)皮一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)活性和表達(dá)分別降低47%和75%，低水平的eNOS能直接降低一氧化氮(nitric oxide, NO)的產(chǎn)生，從而導(dǎo)致血管收縮和降低血管緊張度。另外，eNOS的降低能減少血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞的增生和長(zhǎng)期控制血管瘤增生。另有研究顯示，普萘洛爾可通過(guò)抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞由G0期向G1期的轉(zhuǎn)變而導(dǎo)致細(xì)胞周期停滯，并可抑制內(nèi)皮細(xì)胞遷移、分化成毛細(xì)血管樣管狀結(jié)構(gòu)，從而抑制血管生成[10]。故本藥在增生期及消退期均可能對(duì)血管瘤有治療作用。以上的發(fā)現(xiàn)初步闡述了普萘洛爾治療嬰兒血管瘤的可能機(jī)制，也為今后應(yīng)用普萘洛爾及其他β受體阻滯劑治療嬰兒血管瘤機(jī)制的進(jìn)一步深入研究打下了良好的基礎(chǔ)。同時(shí)也有學(xué)者在嘗試使用其他β受體阻滯劑治療嬰兒血管瘤，如阿替洛爾、醋丁洛爾、噻嗎洛爾等，均取得了一定的療效。但不同的β受體阻滯劑在抑制細(xì)胞增生及促進(jìn)凋亡方面是否存在差異，以及藥物濃度與增生和凋亡的相關(guān)性尚無(wú)理論基礎(chǔ)。

本研究采用體外血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)，加入不同濃度、不同種類的β受體阻滯劑，觀察其24 h對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增生抑制情況及促進(jìn)凋亡情況。發(fā)現(xiàn)在普萘洛爾、阿替洛爾、醋丁洛爾及噻嗎洛爾這4種β受體阻滯劑中，均表現(xiàn)為抑制血管細(xì)胞的增生，這與臨床中所見(jiàn)到的抑制瘤體增生情況是一致的。其中，普萘洛爾抑制細(xì)胞增生的作用明顯高于其他3種藥物，尤其在高濃度時(shí)這種差距更明顯，這也從體外試驗(yàn)角度證明普萘洛爾療效較其他藥物更好。而對(duì)于同一種β受體阻滯劑不同濃度的抑制作用而言，濃度越高，抑制作用越強(qiáng)，這與臨床研究中普萘洛爾治療血管瘤的劑量依賴關(guān)系是符合的，即口服普萘洛爾劑量越大，療效越好[2]。其余3種藥物尚無(wú)劑量比較的臨床研究，根據(jù)體外試驗(yàn)的結(jié)果，可考慮它們也有一定的劑量依賴性。此項(xiàng)研究提示噻嗎洛爾在高濃度時(shí)（50 μmol/L和200 μmol/L），其抑制細(xì)胞增生程度之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。臨床應(yīng)用中噻嗎洛爾主要為外用制劑，治療淺表性血管瘤的噻嗎洛爾外用制劑中有0.1%[11]，0.25%[12 ]及0.5%[13]3種濃度。關(guān)于濃度與療效的關(guān)系，體外試驗(yàn)已經(jīng)提示噻嗎洛爾抑制細(xì)胞增生的程度并未隨著藥物濃度增加而增強(qiáng)，是否臨床應(yīng)用的3種濃度療效存在差異，尚需進(jìn)一步臨床研究證實(shí)。如果體外研究與臨床研究結(jié)果相吻合，則外用低濃度的噻嗎洛爾即達(dá)到良好的治療效果，可避免濃度增加帶來(lái)的不良反應(yīng)。

既往研究報(bào)道，普萘洛爾作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞24 h后即可誘導(dǎo)其凋亡[14]，這與本研究中普萘洛爾對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡情況是一致的。關(guān)于其他β受體阻滯劑對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡的情況尚未見(jiàn)報(bào)道。根據(jù)本研究結(jié)果顯示，在誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡方面，阿替洛爾、醋丁洛爾及噻嗎洛爾均可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，且誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡在用藥后24 h即可出現(xiàn)，這與臨床中應(yīng)用β受體阻滯劑治療血管瘤早期即可見(jiàn)瘤體顏色變淺或質(zhì)地變軟相吻合[15]。但4種藥物之間誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡率相比，并未見(jiàn)差異。

綜上所述，普萘洛爾、阿替洛爾、醋丁洛爾及噻嗎洛爾4種不同的β受體阻滯劑對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞均有一定的抑制作用。在抑制細(xì)胞增生方面，普萘洛爾作用最強(qiáng)，且隨著藥物濃度增加抑制作用越明顯；在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡方面，4種藥物也均有作用，但彼此之間未見(jiàn)差別。由于β受體阻滯劑治療血管瘤的機(jī)制復(fù)雜，本研究只是探討了其中一部分，其余尚有相關(guān)血管生成因子如VEGF、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF），細(xì)胞循環(huán)中的周期蛋白等變化與血管瘤消退的關(guān)系，尚需今后進(jìn)一步研究證實(shí)。

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（本文編輯 耿建麗）

The effect of β-blockers on proliferation and apoptosis of human umbilical vein endothelial cells in vitro culture

LI Li，WEI Li，MA Lin
Department of Dermatology, Beijing Children’s Hospital, Capital Medical University, Beijing 100045, China

Objective To observe the influence of propranolol, atenolol, acebutolol and timolol on the proliferation and apoptosis of human umbilical vein endothelial cells in vitro culture. Methods Human umbilical vein endothelial cells were cultured in vitro. Four kinds of the drugs, each with 9 different concentrations and the negative and positive control were added. Cell counting Kit-8 (CCK-8) method was used to detect cell proliferation and annexin-V FITC/PI double staining method was used to detect cell apoptosis. Results The inhibition rate between different drug concentrations of one drug: all concentrations of propranolol and atenolol presented significant difference (P＜0.05) of the inhibition rate between each other. With the concentrations of 3.125 μmol/L and 12.5 μmol/L, 12.5 μmol/L and 50 μmol/L of acebutolol and timolol both presented significant difference (P＜0.05) of the inhibition rate between each other. The other concentrations of acebutolol and timolol both presented no significant difference (P＜0.05) of the inhibition rate between each other. Inhibition rates between different drugs of the same concentration: with the concentrations of 200 μmol/L, 100 μmol/L and 50 μmol/L, inhibition rates of propranolol group was significantly higher than that of atenolol group, acebutolol group and timolol group (P＜0.05), the inhibition rates of atenolol group, acebutolol group and timolol group had no significantly differences between each other (P＞0.05). With the concentrations of 25 μmol/L, inhibition rates of propranolol group was significantly higher than that of acebutolol group (P＜0.05), other drug groups had no significant differences between each other (P＞0.05). With the concentrations of 12.5 μmol/L, 6.25 μmol/L, 3.125 μmol/L, 1.5625 μmol/L and 0.7813 μmol/L, inhibition rates of propranolol group, atenolol group, acebutolol group and timolol group had no significant differences between

R732.23

A

1674-1293(2015)06-0411-04

10.11786/sypfbxzz.1674-1293.20150603

100045 北京，首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京兒童醫(yī)院皮膚科（李麗，尉莉，馬琳）

李麗，主治醫(yī)師，研究方向：嬰兒血管瘤及血管畸形的臨床及基礎(chǔ)研究，E-mail: luckylili@126.com通訊作者：馬琳，E-mail: bch_maleen@aliyun.comeach other (P＞0.05). The apoptosis rate of human umbilical vein endothelial cells: the apoptosis rate of propranolol group and atenolol group were both significantly higher than that of negative group (P＜0.05); the apoptosis rate of propranolol group, atenolol group, acebutolol group and timolol group were all significantly higher than that of cobalt dichloride group (P＜0.05); the apoptosis rate of propranolol group, atenolol group, acebutolol group and timolol group had no significant differences between each other (P＞0.05). Conclusion Four kinds of β-blockers can inhibit human umbilical vein endothelial cells proliferation, propranolol has the strongest effect, the higher concentration, the better effect. Four kinds of β-blockers can induce human umbilical vein endothelial cells apoptosis, however, there were no significantly differences between each other.

2015-07-20

2015-09-26）