武均宜等

【摘 要】 目的：探討刺五加注射液對人乳腺癌細胞MCF-7的體外增殖的影響。方法：采用MTT法測定了不同劑量的刺五加注射液對MCF-7細胞的體外增殖的抑制作用，并通過倒置顯微鏡觀察其細胞形態(tài)的變化。結果：刺五加注射液可以抑制MCF-7細胞的增殖，量效關系良好；形態(tài)學觀察到細胞凋亡。結論：刺五加注射液對MCF-7細胞增殖具有較強的抑制作用。

【關鍵詞】 刺五加注射液；人乳腺癌細胞；MCF-7；增殖作用；抑制作用

【中圖分類號】R285.5 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2015）11-0014-02

刺五加又名五加參，為五加科植物刺五加的根和莖?，F代醫(yī)學研究表明刺五加具有抗腫瘤、抗氧化、抗血栓、提高免疫力等多方面的的作用[1-2]。據報道，刺五加及其提取物對肺癌、胃癌、艾氏腹水癌及白血病等多種腫瘤均有較強抑制作用，還可改善腫瘤化療患者的免疫狀況，提高機體的抗腫瘤功效[3-4]。本試驗測定不同劑量的刺五加注射液對人乳腺癌MCF-7細胞的抑制作用，為刺五加抗腫瘤作用的研究及今后的臨床應用提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料 刺五加注射液（批號：2007111411，黑龍江省完達山制藥廠）；順鉑（批號：04080212，齊魯制藥有限公司）；MCF-7細胞（由河北大學生命科學學院提供）；四甲基偶氮唑鹽（MTT）、RPMI 1640培養(yǎng)液（美國 Sigma 公司）；0. 25% 胰蛋白酶消化液（美國HyClone公司）。二甲亞砜（DMSO，上海紫一試劑廠）；胎牛血清（中國醫(yī)學科學院生物工程研究所）。

1.2方法

1.2.1 細胞的培養(yǎng) MCF-7細胞復蘇后，貼壁生長于含10% 胎牛血清，青霉素和鏈霉素各100U/ml 的RPMI 1640完全培養(yǎng)液中，并置于37℃，5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2.2 刺五加注射液對細胞增殖抑制率的影響 采用MTT法，將MCF-7細胞按照5×104 個/ml的密度接種到96孔培養(yǎng)板中，試驗分為以下幾組：刺五加注射液組（10、20、40μl） ，陰性對照組加相同劑量的生理鹽水，陽性對照組加50μg/ml 的 順鉑，終體積為200 μl/孔。培養(yǎng)24 h后加入5μg/μl 的MTT液，繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄上清液，加入DMSO后磁力震蕩15min，用酶標儀測定各孔吸光度A值，測定波長λ=570nm，參考波長λ=630nm，計算細胞增殖的抑制率：抑制率（%）=（對照組A值-實驗組A值）/對照組A值×100%

1.2.3 細胞形態(tài)學觀察 取生長狀態(tài)良好的MCF-7細胞接種于48孔細胞培養(yǎng)板內，培養(yǎng)24h，實驗組加入40μl/孔的刺五加注射液，對照組加入生理鹽水，培養(yǎng)24h后在倒置顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)。

1.2.4 統(tǒng)計學分析 數據采用The SAS system 6.12統(tǒng)計軟件進行分析。計量數據以均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05表示有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 對MCF-7細胞增殖的抑制作用 由表1可知，MCF-7細胞經不同劑量的刺五加注射液作用24h后，細胞增殖抑制率顯著增加，顯示較明顯的細胞毒性反應，且隨著藥物劑量的增加，抑制率逐漸增強，顯示良好的量效關系。與陰性對照組比較，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

2.2 細胞形態(tài)學變化 刺五加注射液作用MCF-7細胞后，形態(tài)學發(fā)生了顯著變化（見圖1）。陰性對照組MCF-7細胞貼壁良好，呈不規(guī)則長梭形或多角形，排列無方向性，細胞邊緣清晰。實驗組細胞經刺五加注射液作用后，細胞多數呈圓形， 胞膜起皺，培養(yǎng)基內懸浮著較多的細胞和碎片。

3 討論

刺五加注射液為經水醇法提取制成的滅菌制劑，含黃酮、刺五加多糖和刺五加苷等多種有效成分，已廣泛應于臨床多種疾病的治療[5]。有研究顯示，刺五加注射液對體外培養(yǎng)HeLa細胞、A549細胞的增殖均有較強的抑制作用，并能促進細胞凋亡[6、7]。本試驗研究表明，刺五加注射液對體外培養(yǎng)的人乳腺癌MCF-7細胞增殖有較強的抑制作用，10μl/孔、20μl/孔、40μl/孔的刺五加注射液作用細胞24h后，細胞抑制率分別48.18%、60.23%和84.67%，呈現良好的劑量效應關系。說明刺五加注射液對MCF-7細胞的抑制作用在此范圍內與其劑量呈正相關，即隨著藥物劑量的增加，抑制作用明顯增強。而刺五加注射液對MCF-7細胞的抑制作用及詳細機制還有待于今后深入研究。

參考文獻

[1] 董梅，李廷利.刺五加化學成分及藥理作用研究進展[J].中醫(yī)藥學報，2011，39（3）：98-100.

[2] 許妍姬.刺五加對癡呆模型小鼠記憶障礙及 MDA 含量、SOD 和乙酰膽堿脂酶活性的影響[J].中國老年學雜志，2010， 9（30）：1238-1240.

[3] 豐俊東，林代華，劉希琴，等.刺五加皂苷對人肝癌細胞株血管內皮生長因子表達的抑制作用[J].中藥新藥與臨床藥理，2007，18（5）：339-341.

[4] Yoon TJ，Yoo YC，Lee SW，et al.Anti-metastatic activity of acanthopanax senticosus extract and its possible immunological mechanism of action[J].J Ethnopharmacol，2004，93（2）：247.

[5] 杜秀芳，劉偉娜，詹文紅.刺五加注射液的臨床應用進展[J].現代中西醫(yī)結合雜志，2007，16（24）：3603-3604.

[6] 王倩，趙剛.刺五加注射液誘導宮頸癌 HeLa細胞凋亡機理的研究[J].公共衛(wèi)生與預防醫(yī)學，2013，24（2）：13-17.

[7] 靳祎，王恩軍，朱寶成.刺五加注射液對人肺腺癌A549細胞增殖的抑制作用[J].軍醫(yī)進修學院學報，2009，30（5）：729-730.