安東建

[摘要] 目的 探討DC/CIK細(xì)胞治療對(duì)白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板和淋巴細(xì)胞的影響。 方法 對(duì)接受DC/CIK細(xì)胞治療的63例癌癥患者的血細(xì)胞資料進(jìn)行回顧性分析。結(jié)果 在第一療程DC/CIK細(xì)胞治療前和第二療程DC/CIK細(xì)胞治療后，63例患者的WBC、RBC、PT和LYM的數(shù)量變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 結(jié)論 DC/CIK細(xì)胞治療幾乎沒(méi)有血液學(xué)毒副反應(yīng)，臨床應(yīng)用安全。

[關(guān)鍵詞] 樹(shù)突狀細(xì)胞；細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞； 白細(xì)胞；紅細(xì)胞；血小板；淋巴細(xì)胞

[中圖分類號(hào)] R392 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701（2015）19-0016-03

在可以預(yù)見(jiàn)的將來(lái)，每年將有數(shù)以百萬(wàn)計(jì)的人診斷出癌癥[1]。手術(shù)、放療、化療仍是主要的治療方法，但死亡率很高[2]。與傳統(tǒng)的手術(shù)、放療、化療相比，腫瘤免疫治療毒副反應(yīng)輕微，療效較好，逐漸成為第四種治癌方法[3]。DC/CIK 細(xì)胞（dendritic cell，DC，樹(shù)突狀細(xì)胞/cytokine induced killer cell，CIK，細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞）治療是臨床較為普遍應(yīng)用的過(guò)繼性細(xì)胞免疫治療技術(shù)，抗腫瘤作用強(qiáng)大、還能降低腫瘤進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)、延長(zhǎng)生存[4]。然而，作為一種新的細(xì)胞治療技術(shù)，其對(duì)WBC、RBC、PT和LYM究竟有何影響，臨床少有報(bào)道。為此，回顧性分析2011年1月～2012年6月期間接受DC/CIK細(xì)胞治療的63例癌癥患者的血細(xì)胞資料，探討DC/CIK細(xì)胞治療與WBC、RBC、PT和LYM的相互影響，以保障其臨床應(yīng)用的安全。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

63例晚期腫瘤患者均經(jīng)過(guò)病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)檢查確診。男44例，女19例。年齡21～72歲。鼻咽癌2例，肺癌36例，乳腺癌4例，食管癌1例，胃癌2例，結(jié)腸癌4例，直腸癌2例，肝癌4例，宮頸癌1例，腎癌3例，淋巴瘤2例，惡性黑色素瘤2例。

1.2 方法

1.2.1 DC/CIK細(xì)胞培養(yǎng)[5] 依據(jù)我院生物實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)流程，在患者簽字同意后，經(jīng)上肢靜脈抽取患者靜脈血100 mL。隨后，采用淋巴細(xì)胞分離液逐步分離出單個(gè)核細(xì)胞。反復(fù)用生理鹽水洗滌單個(gè)核細(xì)胞3 次。將分離出的單個(gè)核細(xì)胞分別進(jìn)行DC及CIK細(xì)胞的培養(yǎng)。①DC細(xì)胞培養(yǎng)：第一日，用含細(xì)胞因子IL-4、TNF的培養(yǎng)基培養(yǎng)DC細(xì)胞。每隔一天技術(shù)員采用半量換液一次。第十日，細(xì)胞培養(yǎng)成熟，此時(shí)再將CIK細(xì)胞混合，共同培養(yǎng)。②CIK細(xì)胞培養(yǎng)：第一日，用含細(xì)胞因子IFN-γ、抗CD3單抗等無(wú)血清生長(zhǎng)培養(yǎng)基培養(yǎng)CIK細(xì)胞。24 h后加入含細(xì)胞因子IL-1和IL-2等無(wú)血清生長(zhǎng)培養(yǎng)基。按要求需每2～3天更換培養(yǎng)基一次，并補(bǔ)加IL-2。第十日，CIK細(xì)胞與DC細(xì)胞共同培養(yǎng)。為了解有無(wú)微生物感染，在第十二日抽取樣本進(jìn)行細(xì)菌、霉菌檢測(cè)。第十五日，DC/CIK細(xì)胞培養(yǎng)成熟。最后，將培養(yǎng)成熟的細(xì)胞平均分成6袋，每日一袋靜脈回輸給患者。

1.2.2 DC/CIK細(xì)胞回輸 經(jīng)外周靜脈，患者每天靜脈輸注DC/CIK細(xì)胞一次，每次回輸細(xì)胞的總數(shù)在（1.5～2.0）×109。我們規(guī)定6 d為一個(gè)療程，每療程細(xì)胞總數(shù)≥9×109。每個(gè)患者均接受2個(gè)療程的治療。

1.3 觀察指標(biāo)

所有患者在第一療程DC/CIK細(xì)胞回輸之前和第二療程DC/CIK細(xì)胞回輸之后，均進(jìn)行血常規(guī)檢查。WBC計(jì)數(shù)單位及正常值為（4.0～10.0）×109/L，RBC計(jì)數(shù)單位及正常值為男性（4.0～5.5）×1012/L、女性（3.5～5.0）×1012/L，PT計(jì)數(shù)單位及正常值為（100～300）×109/L，LYM計(jì)數(shù)單位及正常值為（0.8～2.0）×109/L。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用配對(duì)t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

DC/CIK細(xì)胞治療前后，63例癌癥患者WBC、RBC、PT和LYM等血細(xì)胞計(jì)數(shù)的變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表1。

表1 63例患者接受DC/CIK細(xì)胞治療前后血細(xì)胞計(jì)數(shù)的變化（x±s）

3 討論

血液是流動(dòng)于心血管內(nèi)的液態(tài)組織，又稱外周血，由RBC、WBC、PT和血漿組成[6]。各類血細(xì)胞均起源于造血干細(xì)胞[7]。

WBC為無(wú)色、有核的細(xì)胞，在血液中一般呈球形。WBC的主要功能是機(jī)體的防御和免疫功能[8，9]。WBC所具有的變形、游走、趨化、吞噬和分泌等特性是執(zhí)行防御功能的生理基礎(chǔ)[7]。近年文獻(xiàn)報(bào)道，白細(xì)胞計(jì)數(shù)與癌癥死亡率[10]、肺癌發(fā)病[11]等密切相關(guān)。由此可見(jiàn)，維持WBC在正常范圍內(nèi)變化，保持相對(duì)平衡，臨床意義重大。本研究證實(shí)，63例癌癥患者在DC/CIK細(xì)胞治療前后白細(xì)胞計(jì)數(shù)的差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說(shuō)明DC/CIK細(xì)胞治療對(duì)WBC幾乎沒(méi)有細(xì)胞毒作用。

正常成熟RBC無(wú)核，呈雙凹園碟形，其主要功能是運(yùn)輸氧氣和二氧化碳[7]。RBC水平的高與低，必然導(dǎo)致人體生理病理學(xué)改變。如，RBC分布寬度增加與癌癥死亡風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)[12]；輸注衰老的RBC有促進(jìn)癌癥進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)[13]；RBC減少可引起癌癥患者貧血，嚴(yán)重影響抗癌治療的進(jìn)行。然而，DC/CIK細(xì)胞治療并不抑制RBC，這就解釋了DC/CIK細(xì)胞治療前后RBC的差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）的原因。

PT體積小，無(wú)細(xì)胞核，呈雙面微凸的圓盤(pán)狀。血小板維持血管壁的完整性，具有粘附、釋放、聚集、收縮和吸附等生理特性，參與凝血和止血過(guò)程[7]。在某些病理情況下，血小板也與腫瘤轉(zhuǎn)移、侵襲和進(jìn)展相關(guān)[14]。我們的研究表明，DC/CIK細(xì)胞治療前后PT的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

LYM 分為T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞（natural killer，NK）三類。T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞分別與細(xì)胞免疫和體液免疫有關(guān)，而NK細(xì)胞是機(jī)體天然免疫的重要執(zhí)行者[7]。人體的免疫功能在抗腫瘤免疫中發(fā)揮著重要的作用。除此之外，循環(huán)T淋巴細(xì)胞和輔助性淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)可能還是預(yù)測(cè)腫瘤對(duì)放化療療效的有效標(biāo)志物[15]。基于本研究的結(jié)果，我們沒(méi)有發(fā)現(xiàn)DC/CIK細(xì)胞治療前后LYM 的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

CIK細(xì)胞是一群異質(zhì)性且同時(shí)具有 T細(xì)胞和NK細(xì)胞表型的免疫效應(yīng)細(xì)胞。在臨床前試驗(yàn)和動(dòng)物腫瘤模型中，CIK細(xì)胞表現(xiàn)出強(qiáng)大的抗腫瘤活性，增殖速度快，對(duì)多種腫瘤有殺傷作用[16]。DC細(xì)胞是目前已知的功能最強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞[17]。它將腫瘤抗原提呈到T淋巴細(xì)胞，然后誘導(dǎo)特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞抵抗腫瘤抗原。CIK細(xì)胞能夠直接殺傷腫瘤細(xì)胞，兩種細(xì)胞聯(lián)合應(yīng)用可提高抗腫瘤效果[18]。DC/CIK細(xì)胞治療安全有效，副作用十分輕微[19]。與此相反，抗腫瘤的放療和化療雖能治愈部分腫瘤患者，但因其重大的毒副反應(yīng)，相當(dāng)一部分患者不能耐受，因而拒絕放化療或被迫中斷放化療，多數(shù)患者最終死于腫瘤進(jìn)展。通過(guò)對(duì)本組63例癌癥患者血細(xì)胞的分析發(fā)現(xiàn)，RBC、WBC、PT、LYM在DC/CIK細(xì)胞治療前后的變化并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說(shuō)明DC/CIK細(xì)胞治療的安全性，也為日后大規(guī)模臨床應(yīng)用DC/CIK細(xì)胞治療奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

綜上所述，DC/CIK細(xì)胞治療幾乎沒(méi)有血液學(xué)毒副反應(yīng)，其可能的原因是DC/CIK細(xì)胞治療對(duì)正常骨髓及脾細(xì)胞無(wú)細(xì)胞毒活性[20]。DC/CIK細(xì)胞治療特別適合手術(shù)、放療、化療后癌癥患者的輔助治療或因年老、體弱根本不能耐受放療、化療的癌癥患者。

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（收稿日期：2015-04-10）