賀亞靜 ，武學(xué)鑫 ，周 潔 ，沈 騰 ，賀吉香

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355;2.復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)院藥劑學(xué)教研室，上海 201203;3.山東宏濟(jì)堂制藥集團(tuán)有限公司，山東 濟(jì)南 250355)

復(fù)方利多卡因乳膏是由2.5%利多卡因和2.5%丙胺卡因通過(guò)形成低共熔混合物而制成的水包油型乳膏，是臨床常用的皮膚表面局部麻醉制劑，常用于靜脈穿刺、靜脈插管和各種外科小手術(shù)操作的鎮(zhèn)痛，尤其適用于兒童[1－3]。藥代動(dòng)力學(xué)研究顯示，復(fù)方利多卡因乳膏涂于無(wú)損的皮膚時(shí)，有5%～10%的利多卡因和丙胺卡因被吸收，最高血漿藥物濃度在中毒濃度以下，這表明該藥在一定程度上能透皮進(jìn)入血液循環(huán)。目前關(guān)于復(fù)方利多卡因乳膏的離體透皮規(guī)律少見(jiàn)報(bào)道[4]。因此，筆者采用離體大鼠腹部皮膚和改良Franz擴(kuò)散池進(jìn)行體外透皮試驗(yàn)，研究復(fù)方利多卡因乳膏的透皮規(guī)律，并與國(guó)外已上市產(chǎn)品(商品名為Emla)比較體外透皮規(guī)律的一致性?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器、試藥與動(dòng)物

Agilent－1260型高效液相色譜(HPLC)系統(tǒng)(美國(guó)Agilent公司);BT25S型分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器＜北京＞有限公司);H1650型高速離心機(jī)(長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司);PB－10型pH計(jì)(賽多利斯科學(xué)儀器＜北京＞有限公司);TK－20A型透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀(上海鍇凱科技貿(mào)易有限公司)。復(fù)方利多卡因乳膏(陜西興邦藥業(yè)有限公司，批號(hào)為120601，規(guī)格為每克膏體含利多卡因25 mg與丙胺卡因25 mg);Emla(英國(guó)阿斯利康公司，批號(hào)為PC5722A1，規(guī)格為每克膏體含利多卡因25 mg與丙胺卡因25 mg);空白復(fù)方利多卡因乳膏(批號(hào)為120601，陜西興邦藥業(yè)有限公司);利多卡因?qū)φ掌?批號(hào)為100342－201003，含量為99.9%，中國(guó)藥品生物制品檢定所);鹽酸丙胺卡因?qū)φ掌?批號(hào)為P2939060，歐洲藥典標(biāo)準(zhǔn)品);水(Millipore超純水)，甲醇(色譜級(jí)，Merk公司)，磷酸二氫銨(批號(hào)為F20110923，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。SD大鼠，雄性，體重250 g(上海西普爾－必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物合格證號(hào)為SYXK＜滬2011－0099＞)。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測(cè)定[高效液相色譜(HPLC)法]

2.1.1 色譜條件

色譜柱:Kromasil C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇 －0.5%磷酸二氫銨(70 ∶30，pH=7.0);流速:1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):220 nm;柱溫:35℃;進(jìn)樣量:20 μL;理論板數(shù)不低于5 000。

2.1.2 溶液制備

分別精密稱取利多卡因7.0 mg和鹽酸丙胺卡因7.0 mg(相當(dāng)于丙胺卡因6.01 mg)，置50 mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，得質(zhì)量濃度為140 μg/mL的貯備液。

2.1.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):取空白復(fù)方利多卡因乳膏，按2.2.2項(xiàng)下方法試驗(yàn)，8 h后取出接受液，作為陰性對(duì)照品溶液;取接受液的陰性對(duì)照品溶液A、供試品溶液B和標(biāo)準(zhǔn)溶液C(利多卡因5.6 μg/mL和丙胺卡因4.8μg/mL)，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)圖1。利多卡因的保留時(shí)間約為6.2 min，丙胺卡因約為9.8 min，表明接受液中的雜質(zhì)對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密量取貯備液 0.04，0.10，0.20，1.00，2.00，3.00 mL，置25 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋并定容至刻度，得系列質(zhì)量濃度的利多卡因和丙胺卡因混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。將上述標(biāo)準(zhǔn)溶液注入HPLC儀，以峰面積(A)與標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度(C)進(jìn)行線性回歸，回歸方程利多卡因?yàn)?C=0.014 1A+0.004 1(r=0.999 99)，丙胺卡因?yàn)?C=0.018 4 A+0.000 6(r=0.999 98)。結(jié)果表明，利多卡因和丙胺卡因質(zhì)量濃度分別在 0.224 ～16.8 μg/mL 和0.192 ～14.414 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

回收試驗(yàn):取空白復(fù)方利多卡因乳膏，均勻涂抹于離體皮膚上，按2.2.2項(xiàng)下方法試驗(yàn)，8 h后取出全部接受液，作為空白透皮接受液;精密吸取貯備液 0.1，1，3 mL，置 10 mL容量瓶中，用空白透皮接受液稀釋至刻度。每個(gè)濃度平行制備6份，過(guò)濾，取續(xù)濾液測(cè)定。結(jié)果低、中、高質(zhì)量濃度的平均回收率利多卡因分別為97.20% ，99.03% ，98.36%(n=6)，丙胺卡因分別為 94.69% ，99.13%，97.82% ，RSD 均小于 3%(n=6)。

最低定量限及最低檢測(cè)限確定:以信噪比3∶1時(shí)作為最低檢測(cè)限，信噪比10∶1時(shí)作為最低定量限。結(jié)果利多卡因和丙胺卡因的最低檢測(cè)限為9.8 ng，最低定量限為26.4 ng。

精密度試驗(yàn):取回收試驗(yàn)中的供試品溶液，按擬訂色譜進(jìn)樣，分別連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果利多卡因和丙胺卡因的 RSD分別為0.12%和0.55%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取回收試驗(yàn)中的供試品溶液，于 0，1，2，4，8，12，24，48 h時(shí)進(jìn)樣，記錄峰面積。結(jié)果低、中、高質(zhì)量濃度的 RSD值，利多卡因分別為 0.817% ，0.212% 和 0.227%(n=8)，丙胺卡因分別為 1.134% ，0.656% ，0.507%(n=8)，表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2 體外透皮試驗(yàn)

2.2.1 大鼠腹部皮膚處理

取SD大鼠，水合氯醛麻醉，使用電動(dòng)剃毛刀和眼科剪去除腹部毛發(fā)，將大鼠斷頸處死，剝離腹部皮膚，去除皮下組織，用生理鹽水沖洗，于－20℃條件下保存，備用。

2.2.2 體外透皮試驗(yàn)

采用改良Franz擴(kuò)散池進(jìn)行體外透皮試驗(yàn)。離體皮膚固定于供給池與接受池之間，皮膚的角質(zhì)層面向供給池，有效涂藥面積約 3.14 cm2，以約 17 mL的水為接受液，將擴(kuò)散池置于(37±0.5)℃的恒溫水浴中，開(kāi)動(dòng)電磁攪拌，轉(zhuǎn)速為200 r/min。分別于0.5，1，2，3，4，5，6，8 h 取接受液 10 mL，并立即補(bǔ)充等量、等溫度的接受液。接受液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液進(jìn)行HPLC測(cè)定。

2.3 試驗(yàn)結(jié)果

供試藥和對(duì)照藥于不同時(shí)間點(diǎn)所測(cè)定的利多卡因和丙胺卡因的累積透皮量(Q)見(jiàn)圖2。供試藥和對(duì)照藥中利多卡因8 h累積透皮量分別為2.11 mg和2.04 mg;丙胺卡因8 h累積透皮量分別為 2.41 mg和 2.38 mg。經(jīng) t檢驗(yàn)，均無(wú)顯著性差異(P ＞0.05)。將達(dá)穩(wěn)態(tài)的累積透皮量與時(shí)間 t進(jìn)行線性回歸，得線性方程和流通量(J)，結(jié)果見(jiàn)表1。可見(jiàn)，各線性方程的相關(guān)系數(shù)良好，復(fù)方利多卡因乳膏透皮行為符合零級(jí)動(dòng)力學(xué)方程。供試藥和對(duì)照藥中利多卡因和丙胺卡因的流通量經(jīng) t檢驗(yàn)，無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。

圖2 供試藥和對(duì)照藥不同時(shí)間的累積透皮量

表1 利多卡因和丙胺卡因透皮動(dòng)力學(xué)方程擬合結(jié)果

3 討論

利多卡因和丙胺卡因的常用檢測(cè)波長(zhǎng)位于210～265 nm，筆者用流動(dòng)相分別配制兩藥(質(zhì)量濃度均為15 μg/mL)進(jìn)行紫外掃描。結(jié)果顯示，丙胺卡因在220～232 nm吸光度幾乎不變，而利多卡因在210～250 nm吸光度隨波長(zhǎng)增加而急劇降低。最終采用220 nm的檢測(cè)波長(zhǎng)，既能同時(shí)檢測(cè)到兩藥透皮1 h的接受液濃度，又避免了皮膚雜質(zhì)和有機(jī)溶劑截止波長(zhǎng)的干擾。國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道，利多卡因透皮試驗(yàn)常見(jiàn)的接收液為水、生理鹽水和pH=7.4的磷酸鹽緩沖液，故需進(jìn)行溶解度試驗(yàn)以篩選合適的接受液。結(jié)果顯示，在pH=7.4的磷酸鹽緩沖液、水、生理鹽水中，利多卡因的溶解度分別為 9.83，5.31，3.42 g/L;丙胺卡因的溶解度分別為2.71，5.92，1.71 g/L。在本試驗(yàn)透皮條件下，選擇水作為介質(zhì)，既滿足漏槽條件，又簡(jiǎn)單、方便。

目前，單獨(dú)報(bào)道利多卡因透皮的試驗(yàn)比較多[5－7]，但利多卡因與丙胺卡因同時(shí)透皮的試驗(yàn)報(bào)道較少。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，供試藥和對(duì)照藥透皮8 h接受液中利多卡因的累計(jì)透皮率分別為34.53% 和 32.37% ，丙胺卡因?yàn)?39.55% 和 37.71% 。而 Emla 乳膏人體藥學(xué)研究顯示，兩藥有5%～10%被吸收進(jìn)入體內(nèi)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，兩藥鼠皮透皮率遠(yuǎn)大于人皮，這可能是由于鼠皮與人皮在結(jié)構(gòu)組成和角質(zhì)層組分差異較大所致。由于人皮難以獲得，故采用鼠皮進(jìn)行復(fù)方利多卡因乳膏體外透皮規(guī)律的比較。

對(duì)復(fù)方利多卡因乳膏的透皮參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示供試藥和對(duì)照藥中兩藥的流通量無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，且均符合零級(jí)透皮規(guī)律，表明供試藥和對(duì)照藥的體外透皮性能一致。通常采用透皮促進(jìn)劑或者新型給藥技術(shù)增加藥物的經(jīng)皮吸收[8－9]。而復(fù)方利多卡因乳膏則是利用利多卡因和丙胺卡因形成低共熔混合物而促進(jìn)兩藥透皮，其作用機(jī)制是藥物熔點(diǎn)降低致使熱力學(xué)活度增加，從而有利于提高藥物的流通量，并能降低時(shí)滯[10]。表1結(jié)果顯示，兩藥的透皮時(shí)滯均較低，這顯然有利于更快發(fā)揮復(fù)方利多卡因乳膏的局部麻醉作用。

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