蔡素芬，徐 曉，姚大柯

(廣東省廣州市皮膚病防治所，廣東 廣州 510095)

曲松素乳膏為我所自制制劑，主要成分為醋酸曲安奈德，用于治療神經(jīng)性皮炎、接觸性皮炎、脂溢性皮炎、濕疹瘙癢等，臨床療效顯著。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無含量測(cè)定項(xiàng)目，目前醋酸曲安奈德的測(cè)定方法有紫外分光光度法[1]、高效液相色譜(HPLC)法[2]。結(jié)合文獻(xiàn)[3－7]與臨床實(shí)踐，建立了測(cè)定制劑中醋酸曲安奈德含量的HPLC法。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀(Agilent色譜工作站)。醋酸曲安奈德對(duì)照品(批號(hào)100125－201105，含量為97.8%，中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所);曲松素乳膏(醫(yī)院制劑，批號(hào)20140513，20140625，20140722);甲醇(色譜純，Merck 公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent EclipseXDB－C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇－水(70∶30);流速:1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):240 nm;柱溫:25℃;進(jìn)樣量為20 μL。理論板數(shù)按醋酸曲安奈德峰計(jì)不得低于3 500。

2.2 溶液制備

稱取醋酸曲安奈德對(duì)照品18 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加流動(dòng)相定容，作為對(duì)照品貯備液;精密量取5 mL貯備液，置50 mL容量瓶中，加流動(dòng)相定容，即得對(duì)照品溶液。取本品1 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加流動(dòng)相適量，置80℃水浴中加熱使溶解，放冷至室溫，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，置冰浴中冷卻2 h，取出后迅速用0.45 μm的微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。按處方配制不含醋酸曲安奈德的空白基質(zhì)，精密稱取1 g，按供試品溶液制備方法，得陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn):取2.2項(xiàng)下3種溶液，按擬訂色譜條件分別進(jìn)樣。結(jié)果醋酸曲安奈德色譜峰(保留時(shí)間約5.80 min處)無干擾。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密量取醋酸曲安奈德對(duì)照品貯備液1.0，2.0，5.0，10.0，15.0 mL，分別置 50 mL 容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。按擬訂色譜條件各取20 μL進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，以質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)、峰面積(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A=44 670 C+2.364 6，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，醋酸曲安奈德質(zhì)量濃度在0.007 4～0.111 g/L范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液，按擬訂色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果的 RSD=0.69%(n=6)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品(批號(hào)20140722)6份，依法制備供試品溶液并測(cè)定。結(jié)果含量的 RSD=0.85%(n=6)，表明方法重復(fù)性好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品(批號(hào)為20140722)溶液，分別于0，2，4，6，8，10，12 h 時(shí)測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果的 RSD=0.78%(n=7)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

回收試驗(yàn):精密量取空白基質(zhì)9份，按高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度加入醋酸曲安奈德對(duì)照品，各3份，依法測(cè)定，結(jié)果見表1。

表1 醋酸曲安奈德回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按供試品溶液制備方法，在擬訂色譜條件下進(jìn)樣并測(cè)定。結(jié)果批號(hào)為20140513，20140625，20140722的樣品含量分別為標(biāo)示量的 98.45%，96.76%，96.54% 。

3 討論

本試驗(yàn)中采用了不同比例的甲醇－水作為流動(dòng)相，對(duì)比醋酸曲安奈德分離度、保留時(shí)間、理論板數(shù)、回收率，以及對(duì)溶解度和濾過的影響。綜合考察，最終選擇甲醇－水(70∶30)作為流動(dòng)相。

2010年版《中國(guó)藥典(二部)》采用內(nèi)標(biāo)法測(cè)定含量，內(nèi)標(biāo)物為炔諾酮。本試驗(yàn)采用外標(biāo)法測(cè)定醋酸曲安奈德含量，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性和分離效果好，準(zhǔn)確度高，可作為曲松素乳膏的含量測(cè)定方法。

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