蔣征奎，李 曉

(1.鄭州大學附屬腫瘤醫(yī)院，河南 鄭州 450000； 2.河南省植物天然產(chǎn)物開發(fā)工程技術研究中心，河南 鄭州 450002)

百合地黃湯水提物和醇提物的抗抑郁作用對比*

蔣征奎1，李 曉2

(1.鄭州大學附屬腫瘤醫(yī)院，河南 鄭州 450000； 2.河南省植物天然產(chǎn)物開發(fā)工程技術研究中心，河南 鄭州 450002)

目的:對比兩種百合地黃湯提取物的抗抑郁作用并探討其作用機制。方法：以小鼠強迫游泳法、懸尾實驗制造抑郁模型，觀察百合地黃湯水提物和醇提物對小鼠自主活動、強迫游泳不動時間、懸尾不動時間以及對利血平化小鼠腦單胺遞質(zhì)去甲腎上腺素(NA)、5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA) 的影響。結(jié)果：百合地黃湯可明顯縮短小鼠強迫游泳不動時間、懸尾不動時間，提高利血平化小鼠NA、DA、5-HT含量，且醇提液效果優(yōu)于水煎液。結(jié)論：百合地黃湯醇提物抗抑郁作用優(yōu)于水提物，其可能是通過改變中樞單胺遞質(zhì)含量來實現(xiàn)抗抑郁作用的。

百合地黃湯水提物/藥效學；百合地黃湯醇提物/藥效學；抑郁/藥物作用；小鼠；動物模型

尋找安全有效的抗抑郁藥物已成為醫(yī)學界的熱點問題，目前抗抑郁藥物篩選的重點正由化學藥物轉(zhuǎn)向多靶點起效的天然植物藥物[1]。百合地黃湯，又名百合湯，始載于張仲景《金匱要略》，由百合、生地黃組成，是治療百合病專用方。百合病的癥狀與現(xiàn)代醫(yī)學的抑郁癥癥狀比較相似，臨床上用百合地黃湯或其加減方治療抑郁癥取得很好的療效[2-3]。目前，百合地黃湯抗抑郁作用方面的現(xiàn)代藥理和作用機制研究較少[4]，且傳統(tǒng)藥用為水煎液。本研究觀察并對比了百合地黃湯水提物和醇提物的抗抑郁作用，初步探討了其作用機理，以期為其臨床開發(fā)應用提供藥理學參考。

1 材料與方法

1.1 動 物

健康昆明種成年雄性小白鼠，體質(zhì)量20～25 g，由河南省實驗動物中心提供，動物合格證號SCXK(豫)2010-0002。分籠飼養(yǎng)，飼料由河南省實驗動物中心提供，室溫(25±2)℃，自然光照。

1.2 藥品、試劑與儀器

百合、生地黃，購自河南省張仲景大藥房，經(jīng)河南省科學院趙天增研究員分別鑒定為百合科植物百合LiliumbrownieF.E.Brown var.viridulumBaker的干燥肉質(zhì)鱗葉、玄參科植物地黃RehmanniaglutinosaLibosch.的干燥塊根。鹽酸丙米嗪片，上海醫(yī)藥有限公司信誼制藥總廠產(chǎn)品，批號110201，用羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)配成質(zhì)量分數(shù)1 g/L溶液；利血平注射液，1 mg/mL，通化茂祥制藥有限公司產(chǎn)品,批號110563；多巴胺鹽酸鹽、去甲腎上腺素酒石酸鹽、5-羥色胺，均為Sigma公司產(chǎn)品，購自上海恒遠生物科技有限公司，CAS號依次為90274-24-1,69815-49-2,153-98-0。RF-540熒光分光光度計、DR-3數(shù)據(jù)處理機，均為日本島津公司產(chǎn)品；RE-52AA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器， 上海亞榮生化儀器廠產(chǎn)品；FA2104B型電子天平，上海精密科學儀器分公司產(chǎn)品；ZIL-2程控自主活動箱，中國醫(yī)學科學院藥物研究所生產(chǎn)；玻璃組織勻漿器、離心機，海門市天龍實驗器材廠產(chǎn)品；電熱恒溫水浴箱，常州國華電器有限公司產(chǎn)品。

1.3 受試溶液的制備

百合地黃湯中百合和生地用量比例為 4∶3。百合地黃湯水煎液(以下簡稱BST) 為全方用水煎煮2次，每次1 h，合并提取液，減壓濃縮為每毫升含1 g生藥溶液，備用。百合地黃湯醇提液(以下簡稱BCT)為全方分別以700 mL/L乙醇回流提取2次，合并提取液，減壓回收至無醇，制成每毫升含1 g生藥溶液，備用。

1.4 對小鼠自主活動影響的實驗

參照文獻[5]進行。取實驗小鼠80只，隨機分為正常對照組，丙咪嗪組，BST組和BCT組的高、中、低劑量(24，12，6 g/kg)組 8組，每組10只。BST組和BCT組的高、中、低劑量(24，12，6 g/kg)組分別灌胃相應藥物，丙咪嗪組給以1 g/L鹽酸丙米嗪溶液0.02 mL/g，正常對照組給以生理鹽水20 μL/g，上午8時灌胃給藥，1 d 1次。給藥第8天30 min后開始小鼠自主活動實驗，用程控自主活動箱測定小鼠放入自主活動區(qū)后5 min內(nèi)的活動次數(shù)。

1.5 對小鼠懸尾不動時間影響的實驗

參照文獻[5]進行。上述1.4中動物灌胃給藥第9天給藥30 min開始小鼠懸尾不動實驗。用鐵夾固定小鼠尾部后1/3處懸吊于鐵架臺上，頭部離臺面約30 cm，四周用板隔離動物視線，待動物適應1min出現(xiàn)不動時開動秒表計開始記錄，累計后5 min內(nèi)的懸尾不動時間。

1.6 對小鼠強迫游泳不動時間影響的實驗

參照文獻[5]進行。上述1.4中動物灌胃給藥第10天給藥30 min開始小鼠強迫游泳實驗，將小鼠放入水深16 cm， 長19 cm、寬 18 cm的玻璃缸內(nèi)，水溫25℃，水中適應2min后出現(xiàn)不動時開動秒表開始計時，累計后4 min內(nèi)的小鼠強迫游泳不動時間。

1.7 抗抑郁作用機制實驗

參照文獻[5]進行。取實驗小鼠90只，隨機分為正常對照組、模型對照組、丙咪嗪組、BST組和BCT組高、中、低劑量組9組，每組10只。除正常對照組外，各組均先以0.25 μg/g利血平皮下注射6 d；第3天開始模型對照組以生理鹽水20 μL/g灌胃，丙咪嗪組以1 g/L鹽酸丙米嗪溶液 20 μL/g灌胃，百合地黃湯組分別以24,12,6 g/kg灌胃，連續(xù)給藥10 d。末次給藥30 min后，斷頭取腦，稱量質(zhì)量，水浴中去除小腦，冰浴制作腦組織勻漿，用玻璃勻漿器以3 000 r/min離心20 min，分離后取其上清液，采用熒光法測定去甲腎上腺素(NA)、5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)的含量。

1.8 統(tǒng)計學方法

2 結(jié) 果

2.1 各組小鼠5 min自主活動數(shù)量對比

百合地黃湯各組小鼠的5min自主活動數(shù)量與正常對照對照組對比，差別無統(tǒng)計學意義。結(jié)果表明：百合地黃湯對小鼠自主活動無明顯影響 。見表 1。

組 別動物數(shù)劑量/(g·kg-1)5min自主活動數(shù)量/次正常對照組10—319.54±16.48丙咪嗪組100.02323.06±15.94BST高劑量組1024316.54±20.08BST中劑量組1012309.02±23.22BST低劑量組106311.19±16.03BCT高劑量組1024320.30±20.11BCT中劑量組1012312.57±21.38BCT低劑量組106304.30±23.56

2.2 各組小鼠5min懸尾不動時間對比

百合地黃湯醇提液高、中劑量組和水提液高劑量組小鼠懸尾不動時間縮短，與正常對照組對比，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)，其中以醇提液高劑量組尤為顯著(P<0.01)；其他劑量組小鼠5min懸尾不動時間較正常對照組縮短，但差別無統(tǒng)計學意義。見表2。結(jié)果表明：百合地黃湯高劑量可以對抗小鼠因強迫懸尾造成的抑郁癥狀。

組 別動物數(shù)劑量/(g·kg-1)5min懸尾不動時間/s正常對照組10—145.23±39.90丙咪嗪組100.0278.73±30.46**BST高劑量組1024110.25±35.97*BST中劑量組1012125.02±39.22BST低劑量組106142.54±40.08BCT高劑量組102489.27±28.78**BCT中劑量組1012100.83±35.48*BCT低劑量組106120.30±46.11

注：與正常對照組對比，*P<0.05，**P<0.01。

2.3 各組小鼠4 min強迫游泳不動時間對比

與正常對照組對比，百合地黃湯醇提液3個劑量組和水提液高劑量組小鼠的4 min強迫游泳不動時間縮短，其中以醇提液高、中劑量組尤為顯著(P<0.01)；其他劑量組也有不動時間的縮短趨勢，但差別無統(tǒng)計學意義。結(jié)果表明：百合地黃湯可以對抗小鼠因強迫游泳造成的抑郁癥狀。見表3。

組 別動物數(shù)劑量/(g·kg-1)4min強迫游泳不動時間/s正常對照組10—155.23±39.90丙咪嗪組100.02108.73±30.46**BST高劑量組1024119.25±35.97*BST中劑量組1012128.02±39.22BST低劑量組106142.54±40.08BCT高劑量組1024109.27±28.78**BCT中劑量組1012113.83±35.48**BCT低劑量組106122.30±37.11*

注：與正常對照組對比， *P<0.05，**P<0.01。

2.4 各組小鼠腦組織勻漿中NA、DA、5-HT水平對比

模型對照組小鼠腦組織勻漿中NA、5-HT、DA含量均減少，與正常對照組對比，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。 與模型對照組對比，百合地黃湯醇提液3個劑量組與水煎液高、中劑量組小鼠腦組織勻漿中NA、5-HT、DA含量增加，差別有統(tǒng)計學意義 (P<0.01或0.05)。結(jié)果顯示：百合地黃湯可顯著增加腦內(nèi)NA、5-HT、DA的含量，提示其抗抑郁作用機制可能與增加腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量有關。見表4。

組 別動物數(shù)劑量/(g·kg-1)NADA5-HT正常對照組10—349.2±12.7689.5±23.6541.3±18.1模型對照組10—116.7±14.5**287.0±41.8**257.0±19.0**丙咪嗪組100.02202.2±15.1##394.3±41.6##369.8±18.7##BST高劑量組1024165.7±21.9##348.9±35.8##318.9±21.8##BST中劑量組1012142.7±18.9#323.7±34.7#281.9±22.6#BST低劑量組106123.7±25.9302.4±44.2269.9±28.3BCT高劑量組1024197.0±13.5##389.6±41.2##366.3±20.7##BCT中劑量組1012186.1±15.3##359.9±39.2##334.9±19.7##BCT低劑量組106145.1±17.2#325.1±39.5#308.5±22.7#

注：與正常對照組對比，**P<0.01 ；與模型對照組對比，#P<0.05，##P<0.01。

3 討 論

抑郁癥的病因和發(fā)病機制還不明確，目前公認的發(fā)病機制認為：抑郁癥的發(fā)生與腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)包括NA、5-HT、DA的減少有關[6]。百合地黃湯組方中百合可益氣安神、潤肺清心，生地黃可益心營、清血熱，配伍百合，共成涼血清熱、潤養(yǎng)心肺之方劑。本研究結(jié)果顯示：百合地黃湯能明顯縮短懸尾及強迫游泳實驗中小鼠的不動時間，而對其自主活動無顯著影響，可提高利血平小鼠腦NA、DA、5-HT含量；表明該方在不產(chǎn)生中樞興奮作用的前提下，有較好的抗抑郁作用，且醇提液比水煎液的療效顯著。本研究提示：百合地黃湯的抗抑郁作用機制可能與增加腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量有關。此機制尚需進一步研究。

[1]張曼,張麗萍.中醫(yī)藥治療抑郁癥研究進展[J].中華實用中西醫(yī)雜志,2007,20(7):568-570.

[2]繆衛(wèi)紅.甘麥大棗湯合百合地黃湯治療老年抑郁癥19例臨床觀察[J].中醫(yī)藥導報,2012,18(5):39-40.

[3]聶皎,李青,曹穎穎.百合地黃湯治療慢性心力衰竭合并抑郁狀態(tài)33例[J].云南中醫(yī)中藥雜志,2010,31(11):41-42.

[4]戴麗.百合地黃湯的臨床應用和實驗研究[J].海峽藥學,2012，18(5)：39-40.

[5]張均田,杜冠華.現(xiàn)代藥理實驗方法[M].北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學出版社,2012:1360-1362.

[6]何舒，林渝峰，李霞.抑郁癥的發(fā)病機制研究進展[J].四川生理科學雜志,2006,28(3):126-128.

(編輯 陶 珠)

1001-6910(2015)08-0055-03 ·實驗研究·

R285.5

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.08.27

河南省科技攻關項目(122300410069)

2015-03-05；

2015-05-26