薛勝利 孟娜娜 李 珂

(泰山醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東泰安271016)

HPLC法測(cè)定不同廠家牛黃解毒片中黃芩苷的含量

薛勝利 孟娜娜 李 珂

(泰山醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東泰安271016)

目的建立HPLC法測(cè)定不同廠家牛黃解毒片中黃芩苷的含量。方法采用HPLC法檢測(cè)牛黃解毒片中黃芩苷的含量，色譜條件:色譜柱:Diamonsil C18柱(250 nm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇-水-磷酸(50：50：0.2)，流速:0.8 ml/min;檢測(cè)波長:280 nm;柱溫:20℃。進(jìn)樣量:20 μl。結(jié)果黃芩苷在濃度為0.02～0.16 mg/ml內(nèi)峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.9990)，回收率分別為92.04%、94.10%和96.24%，RSD≤2.27%(n=3);不同廠家牛黃解毒片中黃芩苷的含量從0.98%到2.49%不等。結(jié)論HPLC法操作簡便、靈敏，具有良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性，可用于牛黃解毒片中黃芩苷的質(zhì)量控制。

牛黃解毒片;黃芩苷;不同廠家;高效液相色譜法;含量測(cè)定

牛黃解毒片為《中國藥典》2010年版一部收載品種，為臨床常用中成藥，由牛黃、雄黃、石膏、大黃、黃芩、桔梗、冰片、甘草等8味藥物組成，臨床用于治療火熱內(nèi)盛、咽喉腫痛、牙齦腫痛、口舌生瘡、目赤腫痛［1］。黃芩為常用傳統(tǒng)中藥，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎的功效，所含的黃岑苷是黃芩及其制劑的主要質(zhì)控指標(biāo)成分，據(jù)藥理學(xué)研究報(bào)道，黃岑苷具有抗微生物、抗變態(tài)反應(yīng)、降壓和鎮(zhèn)靜、利膽和

解痙等作用［2-3］。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法［4］對(duì)牛黃解毒片中黃芩苷的含量進(jìn)行測(cè)定，方便易行，能消除雜質(zhì)干擾，準(zhǔn)確度高，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，可靠;因此可作為監(jiān)測(cè)和控制該制劑質(zhì)量的含量指標(biāo)［5］。同時(shí)又對(duì)多個(gè)不同廠家牛黃解毒片中黃芩苷的含量進(jìn)行測(cè)定［6］，結(jié)果顯示在0.98%到2.49%，差距很大。因此應(yīng)當(dāng)完善牛黃解毒片的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器日本島津高效液相色譜儀(島津國際貿(mào)易有限公司)雙泵，六通閥進(jìn)樣器。DP-01型不銹鋼真空泵，KQ-500E超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，GR-202電子分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)，臺(tái)式高速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)，微孔濾膜(上海市新亞凈化器件廠)，注射器(康利醫(yī)療器械有限公司)。

1.2 藥品與試劑黃芩苷對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)110715-200815)，甲醇(色譜純，天津市凱通化學(xué)制劑有限公司)，水(娃哈哈純凈水)，磷酸(分析純，天津四通化工廠)，天津同仁堂牛黃解毒片(批號(hào)Z12020021)，山東中泰藥業(yè)牛黃解毒片(批號(hào)Z13020331)，廣西廣明藥業(yè)牛黃解毒片(批號(hào)Z45021310)。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對(duì)照品10 mg，置10 ml量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋到刻度，搖勻，超聲振蕩使充分溶解，配制成1 mg/ml的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.2 供試品溶液的制備取牛黃解毒片20片，研細(xì)，稱取適量，置于容量瓶中，加甲醇至刻度，稱重。超聲提取30 min，補(bǔ)足減失的重量，搖勻，5000 r/ min離心15 min，取上清液，即得所需濃度的供試品溶液。

2.3 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)色譜柱:Diamonsil C18柱(250 nm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇-水-磷酸(50：50：0.2)，流速:0.8 ml/min;檢測(cè)波長:280 nm;柱溫:20℃。進(jìn)樣量:20 μl。取黃芩苷對(duì)照品和牛黃解毒片樣品溶液各20 μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，見圖1、2。本實(shí)驗(yàn)條件下，黃芩苷與樣品中其他成分達(dá)到基線分離，分離度大于1.5，理論塔板數(shù)大于2000。

圖1 黃芩苷的紫外吸收光譜

圖2 溶媒(A)、黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品(B)與黃芩苷樣品(C)的HPLC色譜圖

2.4 線性關(guān)系的考察精密量取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.6 ml的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，置于10 ml容量瓶，配制成濃度為0.02、0.04、0.06、0.08、0.1、0.12、0.16 mg/ml的對(duì)照品溶液。分別量取20 μl進(jìn)樣，每種濃度的溶液連續(xù)進(jìn)樣三次，記錄峰面積。以峰面積對(duì)進(jìn)樣濃度進(jìn)行線性回歸。得回歸方程A =3E+07C-128720，r=0.9990。結(jié)果表明，在此色譜條件下，黃芩苷在濃度為0.02～0.16 mg/ml與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)取0.9 ml的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，置于10 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。每次進(jìn)樣20 μl，連續(xù)進(jìn)樣5次。測(cè)定峰面積，RSD(%)= 1.42%，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同仁堂牛黃解毒片作為供試品進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)，取一定質(zhì)量樣品粉末，置于25 ml容量瓶中，按“2.3.2”項(xiàng)樣品處理方法處理，配制成樣品溶液，室溫下避光放置。分別在0、1、2、4、6、8、10小時(shí)進(jìn)樣，記錄峰面積。RSD(%)=1.97%，結(jié)果表明供試品溶液在10小時(shí)內(nèi)常溫避光條件下基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)取6份不同質(zhì)量的藥品粉末，分別置于25 ml容量瓶中，按“2.3.2”項(xiàng)方法處理，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果RSD(%)=1.91(n =6)，表明該方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn)取10份供試品，每份約15 mg，分別置于5 ml棕色容量瓶中。標(biāo)號(hào)0為空白組，1、2、3為第一組，4、5、6為第二組，7、8、9為第三組。向第一組各瓶中加入標(biāo)準(zhǔn)品的儲(chǔ)備液310 μl，向第二組的各瓶中加入標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液390 μl，向第三組各瓶中加入標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液470 μl，用甲醇稀釋至刻度，然后振蕩，離心。取上清液進(jìn)樣，每次進(jìn)20 μl，重復(fù)進(jìn)樣3次，記錄峰面積的平均值。結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)

2.9 樣品含量測(cè)定分別取3個(gè)廠家的牛黃解毒片，置于25 ml容量瓶中，按“2.3.2”項(xiàng)樣品處理方法配制樣品溶液，每種溶液進(jìn)樣3次，進(jìn)樣量為20 μl，測(cè)定峰面積。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量結(jié)果

3 討論

本實(shí)驗(yàn)固定相為反相色譜柱，流動(dòng)相采用甲醇與水的混合溶液。實(shí)驗(yàn)首先選擇甲醇與水的比例為2：8，保留時(shí)間太長。所以應(yīng)該增加流動(dòng)相的極性，減小保留時(shí)間。依次增加甲醇的比例到1：1，保留時(shí)間較為合理且樣品分離度良好。由于此時(shí)泵壓力太大，只能調(diào)節(jié)流速為0.8 ml/min。黃芩苷為弱酸性物質(zhì)，加入磷酸可以減少其在色譜柱中的解離，降低色譜峰的寬度和拖尾。

黃芩是牛黃解毒片的重要成分，其有效成分的含量直接影響著藥品的質(zhì)量，臨床用藥的療效。此項(xiàng)研究參考黃芩苷含量測(cè)定的方法，對(duì)牛黃解毒片中黃芩苷的含量進(jìn)行了測(cè)定，操作方法簡便、靈敏，具有良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性，可用于牛黃解毒片中黃芩苷的質(zhì)量控制。同時(shí)運(yùn)用HPLC法測(cè)定不同廠家牛黃解毒片中黃芩苷的含量，測(cè)定結(jié)果顯示三個(gè)不同廠家的數(shù)值不相同，其含量在0.98%～2.49%之間，相差較遠(yuǎn)，這勢(shì)必會(huì)對(duì)臨床療效產(chǎn)生一定的影響。因?yàn)樽鳛橛行С煞种坏狞S芩苷沒有含量標(biāo)準(zhǔn)，無法更全面地控制市場(chǎng)流通渠道中牛黃解毒片的質(zhì)量，更好地保證藥品的質(zhì)量及其臨床的療效。

［1］宋立人，洪詢，丁緒亮，等.現(xiàn)代中藥學(xué)大辭典［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2001:1865-1869.

［2］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:387.

［3］張建春，張華，施瑛，等.黃芩苷的研究近況［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2005，16(3):247-249.

［4］吳麗群.HPLC法測(cè)定牛黃解毒片中黃芩苷的含量［J］.海峽藥學(xué)，2003，20(4):124.

［5］黃海欣.牛黃解毒片中黃芩苷含量測(cè)定限度規(guī)定的商榷［J］.中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2003，18(6):158.

［6］朱梅，尉建偉.幾種不同廠家牛黃解毒片的質(zhì)量分析［J］.中國藥業(yè)，2005，17(2):289-291.

Determination of Baicalin in Niuhuang Jiedu Tablets from different drug manufacturers by HPLC

XUE Sheng-li MENG Na-na LI Ke
(School of Pharmacy，Taishan Medical University，Taian 271016，China)

Objective:To establish a high performance liquid chromatographic(HPLC)method for the determination of baicalin in Niuhuang Jiedu Tablets from different drug manufacturers.Methods:The HPLC separation was performed on a Diamonsil C18 column(5m，250nm 4.6mm)，with a mobile phase as Methanol-water-phosphoric acid(50：50：0.2)at a flow rate of 0.8mL/min.The detection wavelength was 280 nm and the column temperature was 20℃.The injection volume was 20μl.Resluts:The method showed a good linearity of the Baicalin in the range of 0.02-0.16mg/ml(r= 0.9990).The recovery was 92.04%，94.10%and 96.24%，RSD≤2.27%(n=3).The baicalin in Niuhuang Jiedu Tablets from different drug manufacturers were different from 0.98%to 2.49%.Conclusion:This method is simple and rapid with repeatability and stability.It is suitable for the quality contorl of baicalin in Niuhuang Jiedu Tablets.

Niuhuang Jiedu Tablets;baicalin;different drug manufacturers;HPLC;determination

R917

A

1004-7115(2015)01-0061-03

10.3969/j.issn.1004-7115.2015.01.021

2014-10-03)

薛勝利(1990-)，男，泰山醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院2010級(jí)藥學(xué)(臨床藥學(xué)方向)專業(yè)學(xué)生。通訊作者:李珂(1978-)，女，副教授，主要從事藥物分析的教學(xué)及科研工作。