李德法，陳娟，王燁

廈門市婦幼保健院醫(yī)學(xué)檢驗科，福建廈門 361000

10例EDTA－K2誘導(dǎo)血小板假性減少患者3種檢測方法結(jié)果對比分析

李德法，陳娟，王燁

廈門市婦幼保健院醫(yī)學(xué)檢驗科，福建廈門 361000

目的初步分析EDTA依賴性血小板減少的現(xiàn)象及原因。方法用3種方法對EDTA-K2誘導(dǎo)血小板假性減少患者的血小板和白細胞進行分析。結(jié)果EDTA-K2抗凝血與枸櫞酸鈉抗凝血和手工法的血小板結(jié)果在不同時間段均差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；>30 min時EDTA-K2抗凝血與枸櫞酸鈉抗凝血和手工法測定白細胞結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；EDTA-K2抗凝血涂片均可見血小板成團成簇聚集，末梢血涂片和各個時間段的枸櫞酸鈉抗凝血血小板均為散在分布。結(jié)論 及時與臨床溝通，同時重抽EDTA-K2抗凝靜脈血和枸櫞酸鈉抗凝靜脈血，并馬上送到檢驗科化驗，以降低血小板假性聚集的可能。

血小板假性減少；抗凝劑；EDTA-K2；枸櫞酸鈉

隨著血細胞分析儀的推廣，由于抗凝劑乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)對血細胞的形態(tài)、體積影響很小，在臨床廣泛應(yīng)用。但我們在工作中發(fā)現(xiàn)極少數(shù)人標本可在EDTA-K2誘導(dǎo)下使血小板假性減少，導(dǎo)致臨床誤診。該文對在廈門市婦幼保健院使用EDTA-K2抗凝劑而引起血小板假性減少的10例患者的血小板和白細胞結(jié)果進行分析，報道如下。

1 對象與方法

1.1 檢測對象

選取2015年6—9月在該院住院的患者，首次使用EDTA-K2抗凝靜脈血在SYSMEX XS-1000i血細胞分析儀檢測血小板結(jié)果明顯降低，推片染色鏡檢發(fā)現(xiàn)血小板有聚集現(xiàn)象，手工計數(shù)在正常范圍內(nèi)，體表檢查無出血點、瘀斑、瘀點等血小板減少癥狀，臨床診斷為EDTA依賴性血小板假性減少患者10例，均為女性，年齡20～40歲。

1.2 儀器與試劑

①SYSMEX XS-1000i全自動血細胞分析儀及其配套試劑和質(zhì)控品；②EDTA-K2抗凝管、枸櫞酸鈉抗凝管為福州長庚醫(yī)療器械有限公司提供；③光學(xué)顯微鏡（OLYMPUS）；④瑞氏-姬姆薩染液為珠海貝索公司生產(chǎn)；⑤按照標準操作規(guī)程配制血小板稀釋液及白細胞稀釋液[1]。

1.3 方法

①經(jīng)患者同意，采集EDTA-K2和枸櫞酸鈉抗凝靜脈血標本各1份，分別于10～15 min、20～25 min、＞30 min在SYSMEX XS-1000i全自動血細胞分析儀上計數(shù)血小板和白細胞值。因枸櫞酸鈉抗凝劑與血液比例為1:9，故本文所有枸櫞酸鈉抗凝管計數(shù)結(jié)果均已乘以1.1校正。

②采集患者末梢血，分別用微量吸管吸取20 μL末梢指血于380 μL的血小板稀釋液和白細胞稀釋液中，靜置10 min后在顯微鏡下手工計數(shù)3次取其平均值。

③取初次采集的末梢血，并分別在10～15 min、20～25 min、＞30 min取EDTA-K2和枸櫞酸鈉抗凝靜脈血，制作血涂片，用瑞氏-姬姆薩染液染色，顯微鏡下觀察血小板的聚集與分布情況。

1.4 統(tǒng)計方法

使用SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料應(yīng)用均數(shù)±標準差(±s)表示，結(jié)果進行t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 EDTA-K2抗凝血、枸櫞酸鈉抗凝血、手工法測定血小板結(jié)果

EDTA-K2抗凝血與枸櫞酸鈉抗凝血和手工法的血小板結(jié)果在3個不同時間段差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；手工法與枸櫞酸鈉抗凝血的血小板結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；EDTA-K2抗凝血的血小板隨時間延長而降低,枸櫞酸鈉抗凝血的血小板隨時間延長未見明顯改變，見表1。

表1 EDTA-K2抗凝血、枸櫞酸鈉抗凝血、手工法測定血小板結(jié)果[±s)，×109/L]

表1 EDTA-K2抗凝血、枸櫞酸鈉抗凝血、手工法測定血小板結(jié)果[±s)，×109/L]

注：*為10 min時計數(shù)結(jié)果。

測定方法10～15 min 20～25 min ＞30 min EDTA-K2抗凝血（儀器法）枸櫞酸鈉抗凝血（儀器法）末梢血（手工法）105±45 215±54（205±53）*51±19 218±61 -29±10 211±42 -

2.2 EDTA-K2抗凝血、枸櫞酸鈉抗凝血、手工法測定WBC結(jié)果

10～15 min、20～25 min時3種測定方法的白細胞結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；＞30 min時EDTA-K2抗凝血與枸櫞酸鈉抗凝血和手工法測定白細胞結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 EDTA-K2抗凝血、枸櫞酸鈉抗凝血、手工法測定白細胞結(jié)果[(±s)，×109/L]

表2 EDTA-K2抗凝血、枸櫞酸鈉抗凝血、手工法測定白細胞結(jié)果[(±s)，×109/L]

注：*為10 min時計數(shù)結(jié)果。

測定方法10～15 min 20～25 min ＞30 min EDTA-K2抗凝血（儀器法）枸櫞酸鈉抗凝血（儀器法）末梢血（手工法）7.2±3.1 7.4±2.7（7.3±2.9）*7.5±2.8 7.2±3.1 -7.8±3.1 7.3±3.2 -

2.3 血涂片結(jié)果

3種血涂片經(jīng)瑞氏染色鏡檢，EDTA-K2抗凝血涂片均可見血小板成團成簇聚集，且隨時間延長血小板簇集增多;而末梢血涂片和各個時間段的枸櫞酸鈉抗凝血血小板均為散在分布。

3 討論

血小板降低是引起出血的常見原因之一，血小板在20×109/L～50×109/L時，可能存在輕度出血或術(shù)后出血癥狀，低于20×109/L×109/L時，可能存在較嚴重的出血；低于5×109/L時，可能導(dǎo)致嚴重的出血并可危及生命[2]。血小板計數(shù)的準確性直接影響臨床對患者的診治，及時發(fā)現(xiàn)血小板假性減少現(xiàn)象，選擇正確的方法進行糾正尤為重要。

EDTA-K2通過與血液中的鈣離子(凝血因子Ⅳ)結(jié)合形成鰲和物，從而阻止血液凝固，但它偶爾可導(dǎo)致血小板聚集，發(fā)生血小板假性減少。而且溶血素?zé)o法破壞這種血小板的聚集體，它們的體積較大，使血細胞分析儀誤認為是白細胞計數(shù)，使得白細胞結(jié)果相對升高[3]。當發(fā)生這種現(xiàn)象時，可用枸櫞酸鈉抗凝血在顯微鏡下計數(shù)或用血細胞分析儀計算血小板數(shù)量[4]，也可直接吸取末梢血置入血小板稀釋液中計數(shù)，還有文獻認為可用肝素鈉作抗凝劑來糾正血小板數(shù)量[5]。該次實驗結(jié)果表明，與枸櫞酸鈉抗凝血和手工法相比，EDTA-K2測定的血小板在10～15 min就明顯減少，并隨著時間延長不斷降低，超過30 min后，白細胞計數(shù)也相對升高，而枸櫞酸鈉抗凝血和手工法相比無明顯差異。

該研究認為，為了檢驗結(jié)果的準確性，檢驗人員必須加強責(zé)任心，在實際工作中一旦在檢驗過程中發(fā)現(xiàn)EDTAK2抗凝標本血小板明顯降低與患者臨床癥狀不符，應(yīng)作如下檢查：①查看血細胞分析儀的報警信息及血小板直方圖尾部是否出現(xiàn)翹尾情況；②血涂片觀察血小板的分布及形態(tài)；③要求臨床同時重抽EDTA-K2抗凝靜脈血和枸櫞酸鈉抗凝靜脈血，并馬上送到檢驗科化驗，以降低血小板假性聚集的可能，減少患者不必要的醫(yī)療費用和痛苦。

[1]葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].3版.南京:東南大學(xué)出版社,2006:123-124,136.

[2]熊立凡,劉成玉.臨床檢驗基礎(chǔ)[M].4版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2010:67.

[3]劉麗波,張哲,趙殿鳳,等.EDTA依賴性假性血小板減少癥5例臨床分析[J].中國臨床研究,2011,24(1):60.

[4]張之南,單淵東,李蓉生,等.協(xié)和血液病學(xué)[M].北京:中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社,2004：631.

[5]鄭云.三種方法對EDTA-K2抗凝劑引起血小板假性減少的檢測及分析[J].臨床醫(yī)學(xué)工程,2011,18(12):1924.

Contrastive Analysis of theResultsby ThreeMethodsin 10 Cases of Patients With Pseudo-thrombocytopenia Caused by EDTA-K2 Anticoagulation

LI De-fa，CHEN Juan，WANG Ye
Department of Clinical Laboratory,Xiamen Maternal and Children′s Hospital,Xiamen，F(xiàn)ujian Province，361000 China

ObjectiveTo investigate the phenomenon and causes of EDTA-dependent thrombocytopenia.MethodsUsing three ways to analyze the platelet and leukocyte in patients with pseudo-thrombocytopenia caused by EDTA-K2 anticoagulation.ResultsIn all time periods,the platelet counts of EDTA-K2 anticoagulated venous blood showed statistically significant difference from the results obtained by sodium citrate anticoagulated venous blood and manual methods(P<0.05).And the leukocyte counts of EDTA-K2 anticoagulated venous blood showed statistically significant difference from the results obtained by sodium citrate anticoagulated venous blood and manual methods after 30 min(P<0.05).Microscopic examination of the blood smear showed that platelets aggregate into clot in all periods in EDTA-K2 anticoagulated venous blood,while the peripheral blood and sodium citrate anticoagulated venous blood appeared scattered in the distribution in all periods.ConclusionTimely communication with the clinical,take both EDTA-K2 anticoagulated venous blood and sodium citrate anticoagulated venous blood immediately,can reduce the possibility of platelet aggregation.

Pseudo thrombocytopenia;Anticoagulants;EDTA-K2;Citrate sodium

R446.11

A

1672-5654（2015）12（b）-0100-03

2015-09-12）

綜述的寫作格式

10.16659/j.cnki.1672-5654.2015.35.100

李德法（1973.9-），男，福建泉州人，本科，主管技師，主要從事臨床免疫學(xué)研究工作。

綜述的寫作格式一般包括四部分，即前言、正文、小結(jié)、參考文獻。 前言，要用簡明扼要的文字說明寫作的目的、必要性、有關(guān)概念的定義、綜述的范圍、闡述有關(guān)問題的現(xiàn)狀和動態(tài)以及目前對主要問題爭論的焦點等。正文，是綜述的重點，主要包括論據(jù)和論證兩個部分，正文部分根據(jù)內(nèi)容的多少可分為若干個小標題分別論述。小結(jié)，是在綜述正文部分作扼要的總結(jié)，作者應(yīng)對各種觀點進行綜合評價，提出自己的看法，指出存在的問題及今后發(fā)展的方向和展望。