王新昭, 孫菊杰, 劉 琪, 左文述, 鄭美珠, 馬素剛, 于志勇

論 著

浸潤性乳腺癌不同分子亞型p53與EGFR的表達及相關性分析

王新昭, 孫菊杰, 劉 琪, 左文述, 鄭美珠, 馬素剛, 于志勇

目的 分析浸潤性乳腺癌不同分子亞型中p53與表皮生長因子受體(EGFR)的表達情況及其相關性。方法 回顧性分析山東省腫瘤醫(yī)院2012年1月至2013年8月264例可手術乳腺癌患者的臨床及病理資料，分析分子亞型與臨床病理特征的相關性及不同分子亞型中p53與EGFR表達的相關性。結果 乳腺癌分子亞型與發(fā)病年齡、初潮年齡無統(tǒng)計學差異(均P>0.05)。分子亞型與是否絕經(jīng)、腫瘤直徑、淋巴結轉(zhuǎn)移、病理分期、細胞角蛋白5/6(CK5/6)、p53及EGFR表達狀況具有統(tǒng)計學差異(均P<0.05)。Luminal型乳腺癌患者T1期所占比例多于non-Luminal型乳腺癌患者(P<0.05)。p53與EGFR總體表達呈正相關(r=0.226，P<0.05)，進一步分層分析顯示各分子亞型中只有三陰性乳腺癌(TNBC)中p53與EGFR表達呈正相關(r=0.319，P<0.05)，其他亞型中p53與EGFR表達無相關性(均P>0.05)。結論 p53與EGFR在TNBC中表達呈正相關，探討二者的表達有助于進一步了解TNBC的分子生物學特征，并為TNBC的治療提供新的思路。

乳腺腫瘤； 分子亞型； 免疫組織化學； p53； EGFR

乳腺癌是一種異質(zhì)性疾病，不同的分子亞型具有不同的分子生物學特點及預后。其中三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)具有侵襲性強、病情發(fā)展快、易轉(zhuǎn)移復發(fā)及預后較差等臨床特點[1]，目前化療是唯一有效的治療手段，靶向治療TNBC尚不成熟。既往研究發(fā)現(xiàn)TNBC中p53及EGFR表達水平較高[2-3]。本研究旨在探討p53與EGFR在乳腺癌各分子亞型中的表達情況以及二者的相關性，以期為TNBC靶向治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2012年1月至2013年8月在山東省腫瘤醫(yī)院外科二病區(qū)行手術治療的初治浸潤性乳腺癌共435例。排除接受新輔助治療,術前已在外院切檢分期不詳?shù)牟±蠊灿?64例。免疫組織化學檢測指標包括雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、人表皮生長因子受體2(HER-2)、Ki-67、CK5/6、p53及EGFR?；颊吣挲g25～78歲，平均年齡(48.3±10.8)歲，中位年齡49歲。根據(jù)2010年第7版美國癌癥聯(lián)合委員會(AJCC)癌癥分期標準對入組病例進行分期。

1.2 免疫組織化學檢測結果判讀標準 運用免疫組織化學鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶法(SP)操作，DAB進行染色。所有病理及免疫組化切片均由2名經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)師閱片，ER、PR、p53及Ki-67染色主要位于細胞核內(nèi)，HER-2、CK5/6及EGFR染色主要位于細胞膜或細胞質(zhì)(見圖1)。免疫組織化學結果判斷以染色細胞占所有細胞的比例進行計數(shù)。ER及PR表達≥1%為陽性[4]；Ki-67表達≥20%為高表達[5],根據(jù)美國臨床腫瘤學協(xié)會(ASCO)/美國病理醫(yī)師學院(CAP)推薦標準將HER-2分為HER-2陽性(評分3+)，HER-2可疑陽性(評分2+)以及HER-2陰性(評分0或1+)，對于可疑陽性的病例均行原位熒光雜交(FISH)予以確認。當染色細胞≥10%時，p53、EGFR、CK5/6判為陽性。

圖1 浸潤性乳腺癌免疫組化指標表達 ×200

1.3 分子亞型定義 根據(jù)2013年St Gallen國際乳腺癌會議專家共識[5]將乳腺癌分為管腔型(Luminal)和非管腔型(non-Luminal)(見表1)。

1.4 統(tǒng)計方法 采用SPSS 17．0軟件進行統(tǒng)計學處理。運用χ2檢驗比較不同分子亞型乳腺癌臨床及病理特征的統(tǒng)計學差異，運用Spearman相關分析比較p53與EGFR在不同分子亞型中表達的相關性，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

表1 浸潤性乳腺癌分子亞型分型標準

2 結果

2.1 不同分子亞型乳腺癌臨床病理特征(表2) 由表2可見，Luminal B型乳腺癌最多見(37.5%)，其次依次為TNBC(26.1%)，Luminal A型(23.9%)，HER-2過表達型(12.5%)。乳腺癌分子亞型與發(fā)病年齡、初潮年齡無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)，與是否絕經(jīng)、腫瘤直徑、淋巴結轉(zhuǎn)移、病期及CK5/6表達狀況有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)。Luminal型乳腺癌患者T1期所占比例較non-Luminal型乳腺癌患者為多(P<0.05)。

表2 不同分子亞型乳腺癌臨床病理特征(例)

注：*Luminal型與non-Luminal型乳腺癌腫瘤直徑比較(χ2=8.620，P=0.003)。

2.2 不同分子亞型中p53與EGFR表達分析結果 分子亞型與p53及EGFR表達狀況有統(tǒng)計學差異(均P<0.05，表2)。浸潤性乳腺癌p53與EGFR表達呈正相關(r=0.226，P<0.05，表3)。分層分析顯示各分子亞型中只有TNBC中p53與EGFR表達呈正相關(r=0.319，P<0.05)，其他各分子亞型中p53與EGFR表達無相關性(均P>0.05)，見表4。

表3 浸潤性乳腺癌中p53與EGFR表達的相關性

表4 不同分子亞型乳腺癌p53與EGFR表達的相關性

3 討論

隨著分子生物學技術的發(fā)展，醫(yī)學也進入分子水平時代，自2000年Perou等[7]將乳腺癌分為不同的分子亞型以來，乳腺癌的治療逐漸進入到個體化治療階段,根據(jù)不同分子亞型選擇最佳治療方式，可使不同分子亞型乳腺癌患者最大程度獲益[8]。本研究依據(jù)2013年st gallen 共識將乳腺癌分為4種分子亞型，結果顯示Luminal B型乳腺癌最多見(37.5%)，其次依次為TNBC(26.1%)，Luminal A型(23.9%)，HER-2過表達型(12.5%)。Howland等[9]報道稱乳腺癌分子亞型中Luminal B型為50.4%，TNBC為17.3%，Luminal A型為25.3%，HER2過表達型為6.9%。Howland的研究顯示Luminal B型發(fā)病率高于本研究結果，其他各亞型發(fā)病率低于本研究結果，分析原因可能來自于人種和免疫組化檢測技術的差異；另外，還可能與本研究分子亞型分型標準不同有關。基底細胞樣乳腺癌(basal-like breast cancer,BLBC)與TNBC約有80%的重合，本研究CK5/6在TNBC中表達率為52.2%。CK5/6是一種基底型角蛋白，表達于上皮組織的基底層中，因此，CK5/6陽性的TNBC可能為BLBC，其在TNBC中比較具有代表性，可將CK5/6表達作為BLBC的標志物。本研究發(fā)現(xiàn)HER-2過表達型乳腺癌與TNBC腫瘤直徑較大，這與Park等[10]的報道一致，這可能與HER-2過表達型乳腺癌和TNBC侵襲性強，腫瘤生長較快有關。本研究結果顯示Luminal B(HER-2陰性)型乳腺癌淋巴結轉(zhuǎn)移率較高，TNBC淋巴結轉(zhuǎn)移率較低(33.3%)，Bennis等[11]的研究也顯示Luminal B型乳腺癌淋巴結轉(zhuǎn)移率為74%，TNBC淋巴結轉(zhuǎn)移率55.2%，由此我們推測LuminalB型乳腺癌的轉(zhuǎn)移途徑可能更傾向于淋巴途徑，而TNBC可能更易發(fā)生血行轉(zhuǎn)移。

p53基因?qū)毎至雅c增殖起負調(diào)控作用，當p53基因發(fā)生突變時不僅無法引起細胞增殖的停滯和凋亡，反而能導致細胞生長失控以及腫瘤的形成。野生型p53基因半衰期較短，免疫組化檢測結果為突變型p53。Curtis等[12]研究發(fā)現(xiàn)，Luminal A型乳腺癌p53突變率為5%，Luminal B型為13%，TNBC為34%，HER2過表達型為22%。本研究結果顯示Luminal A型、Luminal B型、TNBC及HER-2過表達型乳腺癌p53突變率分別為9.5%、37.4%、43.5%及45.5%。本研究不同分子亞型p53突變率均高于Curtis等[12]的研究，分析其原因可能與研究對象種族、樣本量、檢測技術等有關。乳腺癌中EGFR過度表達與腫瘤體積大、分化差以及預后不良有關，各種分子亞型乳腺癌均可見EGFR過度表達，但是TNBC中EGFR過度表達率高于其他分子亞型[13]。本研究TNBC中EGFR的表達率為42%，稍低于Dent等[14]的報道。

p53基因突變可導致p63基因功能缺失，進而引起EGFR基因擴增，最終推動了TNBC的形成[15]。本研究結果顯示p53與EGFR總體表達呈正相關，進一步分層分析發(fā)現(xiàn)只有TNBC中p53與EGFR表達呈正相關，其他分子亞型p53與EGFR表達無顯著相關性。雖然EGFR在乳腺癌中表達水平較高，但是目前針對EGFR靶向治療乳腺癌的效果卻不理想，可能存在其他信號蛋白影響EGFR通路。Huang等[16]研究發(fā)現(xiàn)EGFR抑制劑對表達野生型p53以及EGFR突變的肺癌細胞具有殺傷作用而對p53及EGFR均突變的肺癌細胞耐受，這提示我們野生型p53基因可能具有調(diào)控EGFR抑制劑效應的作用。p53基因突變可能與TNBC對EGFR抑制劑耐藥有關，而突變p53在TNBC中表達水平較高,提示我們有必要通過靶向調(diào)控p53表達對EGFR相應的信號傳導通路展開新的認識。重建野生型p53基因可能克服TNBC患者對EGFR抑制劑耐藥，p53基因治療聯(lián)合靶向抑制EGFR可能改變部分TNBC患者的治療模式。

本研究未發(fā)現(xiàn)乳腺癌分子亞型與發(fā)病年齡相關，Luminal B(HER-2陽性)型乳腺癌未絕經(jīng)的患者多見，其他分子亞型與是否絕經(jīng)沒有相關性(P>0.05)。這與美國學者報道的TNBC多見于40歲以下及未絕經(jīng)患者是有差別的[17-18],可能是由于種族差異或者是本研究病例來自于單中心。

綜上所述，p53與EGFR在TNBC中表達率較高而且二者呈顯著正相關，其他各型p53與EGFR表達無相關性。重建野生型p53基因治療靶向聯(lián)合抑制EGFR可能給TNBC患者帶來新的治療機會。

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Correlation analysis between p53 and EGFR expression in distinct molecular subtypes of invasive breast cancer

WANGXinzhao1,SUNJujie2，LIUQi3,ZUOWenshu1,ZHENGMeizhu1，MASugang4,YUZhiyong1.

(1.DepartmentofBreastSurgery,ShandongCancerHospital,Jinan250117,China; 2.DepartmentofPathology,ShandongCancerHospital; 3.DepartmentofThyroidGlandandBreastSurgery,WeifangTraditionalChinese

Hospital,Weifang261041,China;4.DepartmentofGeneralSurgery,ShandonySixthPeople’sHospitalofJinan,Jinan250200,China)

YUZhiyong,E-mail：drzhiyongyu@aliyun.com

Objective To investigate the correlation between p53 and EGFR overexpression in distinct molecular subtypes of invasive breast cancer.Methods The clinicopathology data of 264 operable breast cancer patients from January 2012 to August 2013 were retrospectively analyzed, and the correlation of p53 and epidermal growth factor receptor (EGFR) expression in distinct molecular subtypes was investigated.Results No statistically significant differences were found among distinct molecular subtypes regarding age at diagnosis and age at menarche by using chi-square test(allP>0.05). Statistically significant differences were found among distinct molecular subtypes regarding menopause status, tumor size, lymph node status, pathological stage , Cytokeratin 5/6 (CK5/6), p53 and EGFR (allP<0.05).There were more patients with T1 stage in Luminal subtype than that of in non-luminal subtype (P<0.05).p53 expression had a positive correlation with EGFR expression in invasive breast cancer (r=0.226,P<0.05). There was a significant positive correction between p53 and EGFR in triple-negative breast cancer (TNBC) by stratification analysis (r=0.319,P<0.05), not in other subtypes(allP>0.05).Conclusions There was a positive correlation between p53 and EGFR in TNBC.P53 and EGFR in TNBC may help us to comprehensively recognize the molecular biological characteristics of TNBC，and may offer us a new idea to TNBC treatment.

breast cancer; molecular subtype; immunohistochemistry; p53; EGFR

山東省自然科學基金(ZR2012HL34)

250117 山東 濟南， 山東省腫瘤醫(yī)院 乳腺外科(王新昭，左文述，鄭美珠，于志勇)，病理科(孫菊杰)； 261041 山東 濰坊，濰坊市中醫(yī)醫(yī)院 乳腺甲狀腺外科(劉 琪)；250200 山東 濟南，濟南市第六人民 醫(yī)院 普外科(馬素剛)

王新昭，男，碩士研究生，研究方向：乳腺腫瘤的基礎及臨床，E-mail：08wangxinzhao@163.com

于志勇，男，主任醫(yī)師，擅長乳腺腫瘤外科治療及基礎研究，E-mail：drzhiyongyu@aliyun.com

10.3969/j.issn.1674-4136.2015.02.003

1674-4136(2015)02-0078-05

2014-12-01][本文編輯：文 心]