秦旭+徐應(yīng)明+趙立杰+孫揚(yáng)+梁學(xué)峰+王林+孫約兵

摘要：由乙酸乙酯、正己烷混合提取液（體積比1 ∶ 1）提取樣品，用氣相色譜-電子捕獲檢測器（GC-ECD）檢測，測定抑霉唑在蘋果、土壤中的殘留、消解動態(tài)及最終殘留量。結(jié)果表明，當(dāng)樣品中添加水平為0.005～2 mg/kg時，平均回收率為90.1%～98.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）為2.51%～8.52%;抑霉唑的最小檢出量為0.002 ng，最低檢出濃度為0.005 mg/kg。田間殘留試驗結(jié)果表明，抑霉唑在蘋果、土壤中消解較快，半衰期分別為10.2～14.8、8.0～14.2 d，施藥后35 d的消解率均在90%以上，屬于易降解農(nóng)藥;10%抑霉唑水乳劑按推薦劑量500倍稀釋液和1.5倍推薦劑量333倍稀釋液兌水噴霧施藥3～4次，在距最后1次施藥7、14、21 d時，抑霉唑在蘋果中的殘留量均低于國家標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞：抑霉唑;蘋果;殘留;消解動態(tài);氣相色譜

中圖分類號： S481+.8 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號：1002-1302（2015）04-0294-02

收稿日期：2014-05-12

基金項目：農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥殘留試驗項目（編號：2010F199）。

作者簡介：秦 旭（1982—），男，吉林公主嶺人，碩士，助理研究員，從事農(nóng)藥分析技術(shù)與殘留污染行為研究。Tel：（022）23618071;E-mail：qinxu621@163.com。

通信作者：徐應(yīng)明，博士，研究員，從事環(huán)境污染化學(xué)與污染控制技術(shù)研究。Tel：（022）23618060;E-mail：ymxu1999@126.com。

抑霉唑是由比利時Janssen公司在1973年開發(fā)出來的一種內(nèi)吸性廣譜殺菌劑和果品防腐保鮮劑[1]，化學(xué)名稱為1-[2-（2，4-二氯苯基）-2-（烯丙氧基）乙基]-1H-咪唑。抑霉唑純品為淺黃色至棕色結(jié)晶體，熔點(diǎn)52.6 ℃，沸點(diǎn)>340 ℃，蒸氣壓0.158 MPa（26 ℃），溶于庚烷、石油醚，在烯酸、堿中穩(wěn)定，285 ℃以下穩(wěn)定。抑霉唑溶解度在水中為018 g/L（pH 值7.6，20 ℃），在丙酮、二氯甲烷、乙醇、甲醇、異丙醇、二甲苯、甲苯、苯中均大于500 g/L（20 ℃），在己烷中為19 g/L（20 ℃）。該農(nóng)藥對侵襲水果、蔬菜、觀賞植物的許多真菌病害都有防效，尤其是對長蠕孢屬、鐮孢屬、殼針孢屬真菌具有高活性。對柑橘、香蕉、蘋果等水果噴施或浸漬抑霉唑，能防治收獲后水果的腐爛[2]。國內(nèi)外對水果中抑霉唑的檢測方法已有報道，但有關(guān)其在水果中降解和殘留情況的報道較少，只有高智席等檢測了其在紅毛丹中的消解動態(tài)[3]，武婷等檢測了其在梨中的消解動態(tài)[4]，李振等檢測了其在柑橘中的消解動態(tài)和最終殘留情況[5]，但其在蘋果中的降解和殘留情況尚未見報道。本研究通過簡單可靠的前處理方法，使用外標(biāo)法定量、氣相色譜-電子捕獲檢測器（GC-ECD）測定抑霉唑在蘋果、土壤中的消解動態(tài)和最終殘留情況，以期為該農(nóng)藥在蘋果上的合理使用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

儀器：Agilent 7890A型氣相色譜儀（美國安捷倫科技公司），帶電子捕獲檢測器。Heidolph Laborota 4000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國海道爾夫公司）;T-25 basic Ultra-turrax型高速植物組織搗碎機(jī)（德國IKA公司）;MILLI-Q型超純水儀（美國Millipore公司）;SL-302電子天平（上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司）;SHZ-D（Ⅲ）型循環(huán)水式真空泵（河南鞏義市予華儀器有限公司）及抽濾裝置等。

試劑：乙酸乙酯、正己烷、丙酮、無水硫酸鈉均為分析純;100 mg/L抑霉唑標(biāo)準(zhǔn)品（天津市東方綠色技術(shù)發(fā)展公司），10%抑霉唑水乳劑（陜西美邦農(nóng)藥有限公司）。

1.2 田間試驗

2010年分別在天津市西青區(qū)、山東省煙臺市、陜西省咸陽市的蘋果園施用10%抑霉唑水乳劑進(jìn)行田間試驗，小區(qū)間設(shè)保護(hù)行，同時設(shè)空白對照。

1.2.1 蘋果消解動態(tài)試驗 在供試蘋果園設(shè)3個重復(fù)小區(qū)，每小區(qū)3棵果樹，施藥劑量為333倍稀釋液，在蘋果生長中期進(jìn)行全株均勻噴藥1次，直至蘋果果實和樹葉有液滴滴下時停止噴藥。施藥后2 h、1 d、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d、35 d對每個處理區(qū)以隨機(jī)多點(diǎn)方式采集蘋果樣品1 kg，切碎混勻，四分法處理后取250 g樣品存放于-20 ℃冰柜中保存待測。

1.2.2 土壤消解動態(tài)試驗 在供試果園附近選擇10 m2地塊，單獨(dú)施藥。施藥劑量為333倍稀釋液，噴霧器兌水1 L，將藥液全部噴施于地表。距施藥后2 h、1 d、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d、35 d以五點(diǎn)法采集0～10 cm深的土壤樣品1 kg，四分法處理后取250 g樣品存放于-20 ℃冰柜中保存待測。

1.2.3 最終殘留試驗 設(shè)置2個施藥劑量，分別為推薦劑量500倍稀釋液和1.5倍推薦劑量333倍稀釋液，每個劑量各設(shè)3、4次施藥處理，每個處理設(shè)3個重復(fù)小區(qū)，每個小區(qū)3棵蘋果樹。2次施藥間隔為10 d，在蘋果生長中期開始第1次施藥，直至蘋果樹葉有液滴滴下時停止噴藥。距最后1次施藥處理7、14、21 d對每小區(qū)以隨機(jī)多點(diǎn)方式采集蘋果和0～15 cm深的土壤樣品，樣品處理方法同消解動態(tài)試驗。

1.3 分析方法

1.3.1 前處理方法 稱取20 g蘋果樣品置于燒杯中，加入80 mL乙酸乙酯、正己烷混合提取液（體積比1 ∶ 1），用高速植物組織搗碎機(jī)勻漿1 min后抽濾，用50 mL上述混合提取液洗滌濾渣;合并提取液并用無水硫酸鈉脫水，減壓濃縮至干，用 5 mL 丙酮定容待測。稱取20 g土壤樣品置于磨口帶塞三角燒瓶中，加入 50 mL 乙酸乙酯、正己烷混合提取液（體積比1 ∶ 1），振蕩提取30 min后抽濾，用30 mL丙酮洗滌濾渣;合并提取液于平底燒瓶中，減壓濃縮至干，用5 mL丙酮定容待測。endprint

1.3.2 氣相色譜檢測條件 進(jìn)樣口溫度290 ℃;進(jìn)樣量 1 μL，不分流進(jìn)樣;HP5-MS毛細(xì)管柱（30 m × 320 μm×025 μm）;載氣為高純氦氣，流速為2 mL/min;程序升溫：起始溫度120 ℃，保持1 min，以10 ℃/min升溫至280 ℃;檢測器溫度300 ℃。在此條件下，抑霉唑保留時間約12.8 min。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍

采用外標(biāo)法定量，分別用丙酮配制一系列抑霉唑標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.002、0.010、0.020、0.100、0.200、0.500、1.000、2.000、8.000 mg/L），在色譜條件下測定，得出抑霉唑的最小檢出量為0.002 ng，線性回歸方程為y=234.4×108x+7.782×108，r=0.999 6，可見抑霉唑在該濃度區(qū)間內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

2.2 該方法的準(zhǔn)確度、精密度、靈敏度

分別稱取空白對照的蘋果樣品和土壤樣品，分別向其中添加適量的抑霉唑標(biāo)準(zhǔn)溶液，通過添加回收試驗得出使用該方法抑霉唑在蘋果和土壤中的最低檢出濃度（LOQ）均為0005 mg/kg。當(dāng)抑霉唑的添加水平分別為2.000、0.050、0.005 mg/kg 時，其在蘋果和土壤中的平均添加回收率為901%～98.7%，相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）為2.51%～8.52%，完全滿足農(nóng)藥殘留分析方法的要求[6]（表1）。

表1 抑霉唑在蘋果和土壤中的添加回收率

樣品 抑霉唑添加濃度

（mg/kg）

回收率（%）

重復(fù)1 重復(fù)2 重復(fù)3 重復(fù)4 重復(fù)5 平均

RSD

（%）

土壤 0.005 98.1 86.7 88.1 92.6 92.4 91.6 4.88

0.050 92.9 88.7 85.4 89.5 94.2 90.1 3.90

2.000 96.0 96.9 97.6 92.9 92.3 95.1 2.51

蘋果 0.005 96.9 99.8 81.0 85.7 91.2 90.9 8.52

0.050 101.8 92.6 91.7 92.3 90.4 93.8 4.87

2.000 96.9 100.1 106.8 95.0 95.0 98.8 5.04

2.3 消解動態(tài)試驗結(jié)果

由圖1、圖2、表2可見，在天津市試驗點(diǎn)，抑霉唑在蘋果和土壤中的原始沉積量分別為0.346、2.023 mg/kg，殘留量均隨時間推移逐漸下降，施藥后35 d的消解率均在91%以上，在蘋果和土壤中的殘留消解半衰期分別為10.2 、8.0 d;在山東省試驗點(diǎn)，抑霉唑在蘋果和土壤中的原始沉積量分別為0180、0.311 mg/kg，殘留量均隨時間推移逐漸下降，施藥后 35 d 的消解率均在90%以上，在蘋果和土壤中的殘留消解半衰期分別為10.2、10.5 d;在陜西省試驗點(diǎn)，抑霉唑在蘋果和土壤中的原始沉積量分別為0.352 、0.030 mg/kg，殘留量均隨時間推移逐漸下降，施藥后35 d的消解率均在90%以上，在蘋果和土壤中的殘留消解半衰期分別為14.8、14.2 d。

從消解動態(tài)試驗結(jié)果可以看出，天津市、山東省、陜西省試驗點(diǎn)抑霉唑在蘋果、土壤中的消解速率均呈現(xiàn)依次變慢的趨勢，這可能是由3地所處的地理位置不同而導(dǎo)致的氣候差異所致。

2.4 最終殘留試驗結(jié)果

10%抑霉唑水乳劑在蘋果上的施藥劑量分別為低劑量

表2 抑霉唑在蘋果、土壤中的消解動力學(xué)參數(shù)

樣品 試驗地點(diǎn) 動力學(xué)方程 相關(guān)系數(shù)

（r） 半衰期

（d）

蘋果 天津市 Ct= 0.130 3e-0.068t 0.700 9 10.2

山東省 Ct= 0.059 4e-0.068t 0.707 8 10.2

陜西省 Ct= 0.261 5e-0.047t 0.872 5 14.8

土壤 天津市 Ct= 2.941 3e-0.087t 0.976 4 8.0

山東省 Ct= 0.386 5e-0.066t 0.983 5 10.5

陜西省 Ct= 0.104 8e-0.049t 0.496 5 14.2

500倍稀釋液和高劑量333倍稀釋液，在蘋果生長中期開始第1次施藥，各設(shè)3、4次施藥處理區(qū)，2次施藥間隔為10 d。距最后1次施藥7、14、21 d時，抑霉唑在蘋果中的最終殘留量低于0.361 mg/kg;在距最后1次施藥14 d時，抑霉唑在蘋果中的最終殘留量低于0.185 mg/kg;在距最后1次施藥21 d時，抑霉唑在蘋果中的最終殘留量低于0.153 mg/kg。距最后1次施藥7 d時，抑霉唑在土壤中的最終殘留量為0.093～1.779、0.020～1.625、0.032～0.823 mg/kg。

3 結(jié)論與討論

本研究采用乙酸乙酯、正己烷混合溶液提取和氣相色譜-電子捕獲檢測器進(jìn)行檢測，方法簡單快捷、靈敏度高、重現(xiàn)性好。在天津市西青區(qū)、山東省煙臺市、陜西省咸陽市開展10%抑霉唑水乳劑在蘋果中的殘留消解動態(tài)試驗，結(jié)果表明抑霉唑在蘋果和土壤中的消解半衰期分別為10.2～14.8、8.0～14.2 d。按照《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則》的評價標(biāo)準(zhǔn)[7]，抑霉唑在蘋果、土壤中均屬于易降解農(nóng)藥。

按照田間試驗設(shè)計方案可知，10%抑霉唑水乳劑在蘋果上的施藥劑量分別為低劑量500倍稀釋液和高劑量333倍稀釋液，在蘋果生長中期開始第1次施藥，各設(shè)3、4次施藥處理區(qū)，2次施藥間隔為10 d，距最后1次施藥7、14、21 d分別采集蘋果樣品進(jìn)行殘留分析測定，結(jié)果表明，抑霉唑在蘋果中的最高殘留量為0.361 mg/kg。GB 2763—2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》規(guī)定，抑霉唑在蘋果中的最大殘留限量為5 mg/kg。參照上述標(biāo)準(zhǔn)可知，2010年在天津市、山東省、陜西省試驗點(diǎn)最終殘留的試驗結(jié)果表明抑霉唑在蘋果中的殘留是安全的，并推薦10%抑霉唑水乳劑在蘋果上的安全間隔期為7 d。

參考文獻(xiàn)：

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[7]國家環(huán)保局. 化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則（續(xù)）[J]. 農(nóng)藥科學(xué)與管理，1990（4）：4-9，3.endprint