趙群濤方永凱楊俊杰盚罡李丹（信陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 信陽(yáng) 464000；信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院生物技術(shù)系）

不同廠家歸脾丸（濃縮丸）中阿魏酸和甘草酸含量考察

趙群濤1方永凱1楊俊杰2盚罡1李丹1（1信陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 信陽(yáng) 464000；2信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院生物技術(shù)系）

目的：建立以高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定歸脾丸（濃縮丸）中阿魏酸和甘草酸含量的方法，并考察不同廠家歸脾丸（濃縮丸）的質(zhì)量情況。方法：色譜柱為A gi l ent H C-C18（250 m m× 4.6 m m，5 μm）；以乙腈-0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)在320 nm和248 nm間切換；流速1.0 m L/m i n；柱溫30℃。結(jié)果：阿魏酸進(jìn)樣量在0.066～ 1.989 μg，甘草酸進(jìn)樣量在0.123～ 3.690 μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，回收率分別為98.8%和98.5%。結(jié)論：該方法靈敏、重復(fù)性好，可用于歸脾丸（濃縮丸）的質(zhì)量控制。測(cè)得的阿魏酸和甘草酸含量結(jié)果反映出不同廠家生產(chǎn)的歸脾丸（濃縮丸）質(zhì)量存在差異。

歸脾丸（濃縮丸）；阿魏酸；甘草酸；含量測(cè)定

歸脾丸（濃縮丸）由黨參、白術(shù)、黃芪、當(dāng)歸、遠(yuǎn)志、酸棗仁、甘草等13味中藥組成，現(xiàn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(中藥成方制劑第七冊(cè))》，有益氣健脾、養(yǎng)血安神的功效，用于心脾兩虛，失眠多夢(mèng)，頭昏頭暈，崩漏便血等癥。原標(biāo)準(zhǔn)沒有含量測(cè)定項(xiàng)，近年來(lái)同時(shí)測(cè)定其中當(dāng)歸和甘草的文獻(xiàn)未見報(bào)道。該藥中當(dāng)歸是補(bǔ)血養(yǎng)血的主要藥物，甘草用于調(diào)和諸藥、糾正各藥的偏性，其主要有效成分分別是阿魏酸和甘草酸。目前當(dāng)歸和甘草野生資源枯竭，多為人工種植，不同地區(qū)藥材的質(zhì)量參差不齊，不同生產(chǎn)廠家采用的藥材產(chǎn)地不同會(huì)影響歸脾丸（濃縮丸）的質(zhì)量，該藥又是常用中成藥，有必要對(duì)市場(chǎng)上不同廠家歸脾丸（濃縮丸）的質(zhì)量情況進(jìn)行考察。

1 儀器與試藥

A gi l ent 1260系列高效液相色譜儀；Preci sa 92SM-D R電子天平，基因型 1850摩爾超純水機(jī)（重慶摩爾水處理設(shè)備有限公司）。阿魏酸（批號(hào)：110773-201012）購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，甘草酸（批號(hào)：H Y 0037）購(gòu)自上海華壹生物科技有限公司（純度大于 98%）；甲醇、乙腈購(gòu)于 D i km a Technol ogi es.IN C公司，均為色譜純，水為I級(jí)超純水，其他試劑均為分析純。歸脾丸（濃縮丸）均為市售，見表 2。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

A gi l ent H C-C18色譜柱（250 m m × 4.6 m m，5 μm）；流動(dòng)相A為0.1%磷酸溶液，B為乙腈，梯度洗脫 0～ 18 m i n為15% B，18～ 19 m i n為15%→35%B，19～40 m i n為35%B，40～42 m i n為15%B；檢測(cè)波長(zhǎng)0～ 25 m i n為320 nm，25～40 m i n為248 nm；柱溫30℃；流速1.0 m L/m i n；進(jìn)樣量10 μL。

2.2 試液的制備

2.2.1 混合對(duì)照品溶液精密稱取兩種對(duì)照品適量，加甲醇-冰醋酸（95∶5）制成含阿魏酸66.3 μg/m L、甘草酸0.123 m g/m L的混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液將本品研碎，取6.0 g置棕色量瓶中，精密稱定，精密加甲醇-冰醋酸（95∶5）25 m L，稱定質(zhì)量，超聲30分鐘，放冷，用甲醇-冰醋酸（95∶5）補(bǔ)足減失的質(zhì)量，過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液根據(jù)歸脾丸（濃縮丸）的處方，制備不含當(dāng)歸和甘草的陰性樣品粉末，按上述方法操作制成陰性樣品溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

分別吸取混合對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液，按2.1色譜條件測(cè)定，見圖 1。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取混合對(duì)照品儲(chǔ)備溶液 1，5，10，20，30 μL，按2.1色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)Y，得阿魏酸的線性方程為：

Y=1 622.0X＋ 9.588，

r=0.999 9，線性范圍0.066～ 1.989 μg；甘草酸的線性方程為：

Y=902.4X－42.99，

r=0.998 9，線性范圍0.123～ 3.690 μg。試驗(yàn)結(jié)果表明阿魏酸和甘草酸在各自濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1 對(duì)照品（A）、供試品（B）和陰性樣品（C）的HPLC色譜圖

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取樣品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，以峰面積積分值為指標(biāo)計(jì)算RSD（n=6）。阿魏酸和甘草酸的RSD分別為0.7%，0.9%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份供試品溶液，分別于0，1，3，6，9，12，24 h測(cè)定，記錄峰面積，阿魏酸和甘草酸的RSD分別為1.3%，1.5%，結(jié)果顯示樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批（140635）樣品按 2.2項(xiàng)方法平行制備6份，按2.1色譜條件測(cè)定阿魏酸和甘草酸的含量，計(jì)算RSD。測(cè)得阿魏酸的含量分別為0.089， 0.092，0.090，0.090，0.091，0.091 m g/g，RSD 為1.1%；甘草酸的含量分別為0.723，0.705，0.715，0.718，0.703，0.704 m g/g，RSD為1.2%，結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取兩種對(duì)照品適量制成含阿魏酸0.421 m g/m L、甘草酸1.660 m g/m L的混合對(duì)照品溶液。

取同一批（55140715）樣品6份，每份約6.0 g，精密稱定，精密加入上述混合對(duì)照品溶液2 m L，按2.2項(xiàng)方法制備，再按2.1色譜條件測(cè)定阿魏酸和甘草酸的含量并計(jì)算回收率。結(jié)果見表 1。

表1 加樣回收率測(cè)定結(jié)果

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

用D A D檢測(cè)器在200～ 400 nm掃描對(duì)照品的紫外吸收?qǐng)D譜，發(fā)現(xiàn)阿魏酸在230 nm和320 nm處有最大吸收，320 nm吸收值大于230 nm吸收值；甘草酸僅在248 nm有最大吸收。測(cè)試不同廠家的樣品發(fā)現(xiàn)阿魏酸的含量均較低，選擇230 nm 時(shí)樣品吸收值較低，測(cè)試不靈敏，選擇320 nm有較好的響應(yīng)，此時(shí)甘草酸沒有吸收，本文采用波長(zhǎng)切換的方法使這兩種成分都得到較好檢測(cè)。

3.2 提取方法選擇

樣品處理比較了冷浸過夜、常溫超聲30分鐘和60分鐘、回流1小時(shí)和2小時(shí)，結(jié)果冷浸法提取的含量較低，超聲和回流不同時(shí)間提取液的阿魏酸和甘草酸含量相差不大，文獻(xiàn)報(bào)道回流的提取液不穩(wěn)定[1]，選擇超聲30分鐘即可滿足實(shí)驗(yàn)要求。又比較了甲醇[2]、70%甲醇[3]、70%乙醇[4]、60%乙醇[4-5]、甲醇-冰醋酸（95∶5）[1]、甲醇-甲酸（95∶5）和甲醇-0.24 m ol/L N aH CO3[6]幾種溶劑均超聲30分鐘的提取效率，結(jié)果不加酸時(shí)60%乙醇提取液中阿魏酸和甘草酸的含量均略高；加酸后這兩種成分的含量都稍微增加，幾種加酸溶劑提取液中兩種成分的含量差別也不大，與文獻(xiàn)報(bào)道的不同溶劑提取甘草酸的結(jié)果一致[7]。綜合各種因素，再考慮到甲醇-冰醋酸（95∶5）更利于提取液的保存[1]，用甲醇-冰醋酸（95∶5）超聲30分鐘處理樣品比較好。

3.3 流動(dòng)相的選擇

試驗(yàn)中比較了不同比例的甲醇（乙腈）-水、甲醇（乙腈）-0.1%磷酸溶液[3]、甲醇-乙腈-0.1%磷酸和乙腈-0.1%磷酸溶液梯度系統(tǒng)，測(cè)試結(jié)果表明歸脾丸（濃縮丸）在幾種溶劑系統(tǒng)中成分峰都較多，阿魏酸和甘草酸出峰時(shí)間差別很大，本文選定的梯度系統(tǒng)分離效果好，分析用時(shí)少，含甲醇的系統(tǒng)樣品峰較寬不利于分析。試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)乙腈體積分?jǐn)?shù)的改變對(duì)甘草酸的出峰時(shí)間影響較大，提示分析過程中流動(dòng)相比例不應(yīng)發(fā)生較大改變。

3.4 不同廠家產(chǎn)品質(zhì)量分析

近年來(lái)測(cè)定歸脾丸（濃縮丸）中補(bǔ)血藥當(dāng)歸有效成分含量的文章還較少，藁本內(nèi)酯雖然在當(dāng)歸中含量較高但很不穩(wěn)定，對(duì)照品難以保存[6，8]，本文測(cè)定對(duì)照品穩(wěn)定的阿魏酸用以比較當(dāng)歸的質(zhì)量差異；目前對(duì)歸脾丸中甘草的控制主要是測(cè)定甘草酸形成的鹽間接測(cè)定甘草酸[2-3，8]，本文直接測(cè)定其含量。由于不能搜集盡可能多的不同廠家的藥品，僅測(cè)定一批藥顯然不能就武斷地說明某廠家藥品質(zhì)量的好壞，但用本文所建立的方法對(duì)不同廠家的藥品含量測(cè)定結(jié)果表明，不同廠家歸脾丸阿魏酸和甘草酸的含量差別大，提示市場(chǎng)上的歸脾丸（濃縮丸）存在一定的質(zhì)量差異，進(jìn)而反映出不同廠家在所用中藥材質(zhì)量、生產(chǎn)工藝參數(shù)、內(nèi)部質(zhì)量控制等方面存在一定的差異。

4 小結(jié)

本文采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定阿魏酸和甘草酸的含量，方法靈敏、重復(fù)性好，可用于歸脾丸（濃縮丸）的控制質(zhì)量。

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Content Investigation of Ferulic Acid and Glycyrrhizin in Guipi Pills （Concentrated Pills）from Different Manufacturers

Zhao Q unt ao1，F(xiàn)ang Y ongkai1，Y ang Junj i e2，Q i u G ang1，Li D an1（1 X i nyang Inst i t ut e for Food and D rug Cont rol，H enan X i nyang 464000，Chi na；2 X i nyang Col l ege of A gri cul t ure and Forest ry）

Objective:To est abl i sh a m et hod for t he si m ul t aneous det erm i nat i on of t he cont ent s of ferul i c aci d and gl ycyrrhi zi n i n gui pi pi l l s （concent rat ed pi l l s）and i nvest i gat e t he qual i t y of gui pi pi l l s （concent rat ed pi l l s）produced by di fferent m anufact urers.Methods:RP-H PLC w as perform ed on A gi l ent H C-C18col um n（250 m m × 4.6 m m，5 μm）w i t h a m obi l e phase of acet oni t ri l e-0.1% phosphori c aci d aqueous sol ut i on，gradi ent el ut i on w as carri ed out，det ect i on w avel engt h w as sw i t ched at 320 nm and 248 nm，t he fl ow rat e w as 1.0 m L/m i n and t he col um n t em perat ure w as at 30℃.Results:A good l i near rel at i onshi p w as obt ai ned w i t hi n t he range of 0.066～1.989 μg and 0.123～ 3.690 μg for ferul i c aci d and gl ycyrrhi zi n，and t he recovery rat e w as 98.8% and 98.5% respect i vel y.Conclusion:The m et hod w as sensi t i ve and reproduci bl e for cont ent det erm i nat i on of ferul i c aci d and gl ycyrrhi zi n i n gui pi pi l l s（concent rat ed pi l l s）and i t can be used for t he qual i t y cont rol of gui pi pi l l s（concent rat ed pi l l s）.The resul t s of cont ent det erm i nat i on show ed t hat t he qual i t y of gui pi pi l l s （concent rat ed pi l l s）vari ed from di fferent m anufact urers.

G ui pi Pi l l s（Concent rat ed Pi l l s）；Ferul i c A ci d；G l ycyrrhi zi n；Cont ent D et erm i nat i on

10.3969/j.i ssn.1672-5433.2015.04.004

2015-01-12）

河南省科學(xué)技術(shù)廳河南省2013年科技發(fā)展計(jì)劃基金（132102310265）

趙群濤，男，主管中藥師。研究方向：藥物分析。E-m ai l：28843515@qq.com