宋海龍， 趙 璐， 楊海燕

(1新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院， 烏魯木齊 830052； 2新疆中藥民族藥研究所， 烏魯木齊 830002；3新疆師范大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院， 烏魯木齊 830054)

HPLC法測定沙棗中槲皮素和異鼠李素的含量

宋海龍1,2， 趙 璐3， 楊海燕1

(1新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院， 烏魯木齊 830052；2新疆中藥民族藥研究所， 烏魯木齊 830002；3新疆師范大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院， 烏魯木齊 830054)

目的 建立測定沙棗中槲皮素和異鼠李素含量的高效液相色譜法(HPLC法)。方法 色譜條件：C18色譜柱，甲醇-0.1%磷酸溶液(58∶42)，檢測波長370 nm。結(jié)果 槲皮素在0.016～0.032 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 9)，異鼠李素在0.025～0.075μg(r=0.999 9) 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；槲皮素和異鼠李素的平均加樣回收率分別為99.08%和100.07%；RSD分別為1.36%和0.98%(n=6)。結(jié)論HPLC法可快速準(zhǔn)確地測定沙棗中黃酮類物質(zhì)的含量，為沙棗黃酮類物質(zhì)的進一步開發(fā)提供了可靠的依據(jù)。

沙棗； 高效液相色譜法； 槲皮素； 異鼠李素； 含量測定

沙棗(ElaeagnusangustifoliaL.)屬胡頹子科(Elaeagnaceae)胡頹子屬(ElaeaglltsL.)植物的干燥成熟果實，含有果糖、葡萄糖、蛋白質(zhì)等多種成分。果實中含有鞣質(zhì)、黃酮類、維生素、不飽和脂肪酸等生物活性物質(zhì)[1]。沙棗原產(chǎn)于西亞，在新疆分布較為廣泛，主要生長于平原、鹽堿沙地、沙漠、山地和荒地。沙棗果實具有一定的藥物用途和很高的營養(yǎng)價值[2]，具有抗炎、抗腫瘤、補虛、安神、固脫收斂、強壯鎮(zhèn)靜、健胃止瀉等功效，被稱作 “百樹寶”[3]。近年來，黃酮類化合物的研究是一個熱點[4]。許多黃酮類化合物具有止咳、祛痰、平喘、抗菌的活性。沙棗的枝、葉及花均含有黃酮類化合物，但對沙棗果實中所含黃酮類化合物含量的研究報道較少[5]。本研究采用HPLC法測定分析沙棗果實中槲皮素和異鼠李素含量，旨在為進一步有效地開發(fā)沙棗中黃酮類成分的藥用價值提供可靠依據(jù)。

1 材料與試劑

1.1 材料與儀器沙棗果實采自新疆昌吉及新疆哈密，去除種子，粉碎，過40目篩，備用。分別為1號、2號樣品。AB104-N電子天平(上海MettlerToledo公司)，KQ5200DE型數(shù)控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公市)，玻璃儀器氣流烘干器(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)，粉碎機(天津泰斯達公司)，1220液相色譜儀(美國Agilent公司)， 1220二極管陣列檢測器(美國Agilent公司)，HH-S6數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市醫(yī)療儀器廠)。

1.2 試劑槲皮素(YA0806YB13)、異鼠李素(MUST-12112001)購置于上海源葉生物科技有限公司，甲醇(賽默飛世爾色譜純)，水為超純水，其他所用試劑均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件WondaSilC18Superb色譜柱(250mm×4.6mm，5μm，100A)，流動相：0.1%磷酸溶液-甲醇(42∶58)，檢測波長370nm，柱溫25℃；體積流量1.0mL/min；進樣量10μL。供試品中槲皮素、異鼠李素在此色譜條件下具有較好的分離效果，與其他成分分離效果較好，滿足含量測定要求，見圖1～3。

1：槲皮素；2：異鼠李素

圖1 混合對照品色譜圖 1：槲皮素；2：異鼠李素

圖2 昌吉地區(qū)沙棗樣品色譜圖 1：槲皮素；2：異鼠李素

圖3 哈密地區(qū)沙棗樣品色譜圖

2.2 對照品溶液制備精密稱取2mg槲皮素和異鼠李素對照品，加入體積分數(shù)為80%的甲醇，置于10mL的容量瓶中，定容，分別制成含200μg/mL的槲皮素和異鼠李素溶液。精密量取槲皮素和異鼠李素對照品溶液各5mL，置10mL容量瓶中，制成含有異鼠李素與槲皮素混合對照品溶液，濃度為100μg/mL。

2.3 供試品溶液制備精密稱取約1g供試品粗粉，置于錐形瓶中，精密加入50mL體積分數(shù)為80%的甲醇，加熱回流30min，放冷，搖勻，過濾。精密量取濾液25mL，于具塞錐形瓶中，加入10mL體積分數(shù)為25%的鹽酸溶液，搖勻，水浴加熱回流30min，立即冷卻，轉(zhuǎn)移到50mL的容量瓶中，用適量的體積分數(shù)為 80%的甲醇洗滌錐形瓶，洗液合并倒入容量瓶中，加入體積分數(shù)為80%的甲醇至刻度，搖勻，濾過，取濾液，即得。2批沙棗均用此方法制得，分別為1號、2號。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備精密稱取異鼠李素與槲皮素對照品各2mg，分別置于10mL的容量瓶中，用體積分數(shù)為80%的甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取槲皮素對照品溶液8、10、12、14、16μL置于10mL容量瓶中，加入體積分數(shù)為80%的甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得，取10μL進樣測定峰面積。以槲皮素對照品峰面積Y為縱坐標(biāo)，相對應(yīng)的對照品的質(zhì)量X(μg)為橫坐標(biāo)，計算得槲皮素的回歸方程為：Y=7 272.5X—1.76，r=0.999 8，線性范圍為0.016～0.032μg；精密量取異鼠李素對照品溶液10、15、20、25、30μL置于10mL量瓶中，加入體積分數(shù)為80%的甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得， 取10μL進樣測定峰面積。以異鼠李素對照品峰面積Y為縱坐標(biāo)，相對應(yīng)的對照品的質(zhì)量X(μg)為橫坐標(biāo)，計算得異鼠李素的回歸方程為Y=1 419.2X—4.02，r=0.999 5，線性范圍為0.025～0.075μg。

2.5 精密度試驗重復(fù)進樣混合對照品溶液5次，每次10μL進樣量，測定峰面積。結(jié)果得到異鼠李素與槲皮素的峰面積的RSD分別為0.36%、0.67%。

2.6 穩(wěn)定性試驗取1號供試品溶液，分別于0、1、2、3、4、5h各進樣10μL，依次測定峰面積。結(jié)果槲皮素峰面積RSD為1.65%(n=6)，異鼠李素峰面積RSD為1.26%(n=6),說明供試品溶液在5h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗取1號藥材5份，按“2.3”項下方法制備供試品，進樣量為10μL。根據(jù)槲皮素和異鼠李素的峰面積計算得RSD分別為 0.86%、0.93%，表明該方法的重復(fù)性較好。

2.8 加樣回收試驗精密稱取0.5g已知含量的樣品，分別精密加入一定量的槲皮素及異鼠李素對照品，按“2.3”項下方法制備供試品，進樣量為10μL，測定峰面積并計算回收率，結(jié)果槲皮素的平均回收率為99.08%，RSD為1.36%(n=6)，異鼠李素的平均回收率為100.07%，RSD為 0.98%(n=6)。結(jié)果表明該方法的準(zhǔn)確性較好。

2.9 沙棗中槲皮素和異鼠李素的含量測定精密稱取供試品1號、2號粉末各1g，按照“2.3”項下方法制備樣品，進樣量為10μL，分別測定槲皮素和異鼠李素的峰面積，重復(fù)測定3次，含量取平均值。

表1 沙棗中槲皮素和異鼠李素的含量測定

3 結(jié)論

高效液相色譜法(HPLC)已廣泛應(yīng)用于中藥及制劑中有效成分或生理活性成分的含量測定[6-7]。本研究通過采用高效液相色譜法測定沙棗中黃酮類成分的含量，將370nm作為檢測波長，在流動相為甲醇-0.1%磷酸溶液(58∶42)的色譜條件下，異鼠李素和槲皮素分離較好，建立了沙棗中槲皮素和異鼠李素含量測定方法，經(jīng)方法學(xué)考察，均符合中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，此方法簡便準(zhǔn)確、專屬性強、精密度好、回收率高，為沙棗黃酮類物質(zhì)的進一步開發(fā)提供了可靠的依據(jù)。

[1] 杜瑞芳,王雨梅,劉衛(wèi)東,等.高效液相色譜法同時測定沙棗中槲皮素和異鼠李素的含量[J].時珍國醫(yī)國藥,2008,19(4):831-832.

[2] 新疆生物土壤沙漠研究所.新疆藥用植物志[M].烏魯木齊:新疆人民出版社,1981:76.

[3] 王雅,孫翠,陳麗瓊,等.沙棗多糖的研究進展[J].中國食品工業(yè),2015,(3):54-55.

[4] 何艷熙,李炳奇,劉紅,等.沙棗中黃酮類化合物提取工藝條件的研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2008,15(7):57-58.

[5] 岳慶磊,郭效杰,羅宗銘,等.黃酮類化合物抗氧化機理及其在醫(yī)藥中的應(yīng)用[J].廣州化工,2003,31(2):10-12.

[6] 何效平.楊瓊芳.王賢英.等.高效液相色譜法測定雪膽中雪膽甲素的含量[J].川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2007,22(3):264-266.

[7] 李巖,孟慶勇,趙欣,等.HPLC法測定天仙子?xùn)|莨菪堿和莨菪堿的含量[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2015,(1):64-66.

(本文編輯 施洋)

Determination of quercetin and isorhamnetin inElaeagnusangustifoliaL. by HPLC

SONG Hailong1,2, ZHAO Lu3, YANG Haiyan1

(1CollegeofFoodScienceandPharmacy，XinjiangAgriculturalUniversity，Urumqi830052，China；2XinjiangChineseandMinorityNationalityMedicineReseaechInstitute，Urumqi，830002，China；3CollegeofChemistry，XinjiangNormalUniversity，Urumqi830054，China)

Objective To determine the content of quercetin and isorhamnetin inElaeagnusangustifoliabyhighperformanceliquidchromatography. Methods The separation was performed on C18column and the mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid solution (58:42), quercetin and isorhanmetin was detected at 370 nm. Results The standard curve was linear within the concentration range of 0.016～0.032 μg for quercetin and 0.025～0.075 μg for isorhamnetin, respectively. The recovery was 99.08% for quercetin and 100.07% for isorhanmetin, respectively. RSD was 1.36% for quercetin and 0.98% for isorhanmetin (n=6). Conclusion This study provides a fast and accurate method to determine the content of flavonoids substances inElaeagnusangustifolia,providesthereliablebasisforthefurtherdevelopmentofflavonoidssubstancesinElaeagnusangustifolia.

ElaeagnusangustifoliaL.; HPLC; quercetin; isorhamnetin; determination of content;

新疆維吾爾自治區(qū)科技廳公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)資助項目(KY2015133)

宋海龍(1973-)，男，在讀碩士，實驗師，研究方向：食品加工與安全。

楊海燕，女，教授，博士，博士生導(dǎo)師，研究方向:食品安全，E-mail:2633165222@qq.com。

R

A

1009-5551(2015)12-1510-03

10.3969/j.issn.1009-5551.2015.12.014

2015-09-16]