袁慧敏，徐黎明，袁秋雁

(寧波市鎮(zhèn)海龍賽醫(yī)院病理科，浙江 寧波 315200)

寧波鎮(zhèn)海區(qū)女性健康普查及相應(yīng)HPV檢測(cè)分析

袁慧敏，徐黎明，袁秋雁

(寧波市鎮(zhèn)海龍賽醫(yī)院病理科，浙江 寧波 315200)

目的 通過(guò)對(duì)寧波鎮(zhèn)海區(qū)女性宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)(TCT)健康普查及相應(yīng)二代基因雜交捕獲法高危型人乳頭狀瘤病毒基因檢測(cè)(HC2-HPV-DNA)，探討兩種技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用在宮頸癌篩查中的價(jià)值。方法 對(duì)3 216例女性行宮頸TCT檢查及相應(yīng)HC2-HPV-DNA檢測(cè)，并與病理活檢結(jié)果進(jìn)行對(duì)照分析。結(jié)果 在3 216例女性中，TCT檢查異常者630例，陽(yáng)性率19.6%(630/3 216)；在630例TCT檢查異常者中HC2-HPV-DNA檢測(cè)陽(yáng)性者383例，陽(yáng)性率60.8%(383/630)。TCT檢查及HC2-HPV-DNA檢測(cè)均陽(yáng)性的383例行宮頸活檢，病理診斷為CIN符合率為97.1%；TCT檢查為陽(yáng)性，HC2-HPV-DNA檢測(cè)為陰性的247例行宮頸活檢，病理診斷為CIN符合率為66.4%，經(jīng)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.40，P<0.01)。結(jié)論 宮頸TCT檢查與宮頸HC2-HPV-DNA檢測(cè)的聯(lián)合應(yīng)用對(duì)有效篩查宮頸癌尤為重要。

宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)；二代基因雜交捕獲法高危型人乳頭狀瘤病毒基因檢測(cè)；病理活檢；宮頸癌；篩查

宮頸癌是女性中最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，經(jīng)過(guò)國(guó)內(nèi)外學(xué)者近20年的研究，已證明人乳頭狀瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染是宮頸癌的主要病因。宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)漸進(jìn)過(guò)程，早期宮頸癌如能及時(shí)發(fā)現(xiàn)并治療，治愈率可達(dá)90%以上[1]。近年來(lái)，我國(guó)宮頸癌的發(fā)生呈明顯上升和年輕化趨勢(shì)，因此找到合理有效的宮頸癌篩查方法對(duì)于防治宮頸癌具有決定性意義。通過(guò)對(duì)本區(qū)體檢女性行宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)(TCT)檢查及相應(yīng)二代基因雜交捕獲法高危型人乳頭狀瘤病毒基因(HC2-HPV-DNA)檢測(cè)，并結(jié)合病理組織活檢分析，旨在探討兩種技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用對(duì)于有效篩查宮頸癌的價(jià)值，從而為本地區(qū)宮頸癌的防治工作提供一些幫助。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集寧波市鎮(zhèn)海龍賽醫(yī)院2012年1月至2013年5月女性宮頸TCT體檢病例3 216例，年齡23～67歲，平均年齡39.4歲。

選擇3 216例中TCT檢查異常者630例，進(jìn)行HC2-HPV-DNA檢測(cè)，懷疑高度鱗狀上皮內(nèi)病變以及陰道鏡檢查未見(jiàn)異常者同時(shí)行病理組織活檢，以做比較性研究，年齡23～65歲，平均年齡34.7歲，且這些患者均無(wú)子宮和宮頸手術(shù)史。

1.2 方法

1.2.1 宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查

使用窺器暴露宮頸，用棉球輕輕擦去宮頸表面分泌物后，將頸管刷插入宮頸管內(nèi)繞宮頸順時(shí)針?lè)较蛐D(zhuǎn)3～5周，然后將頸管刷置入存有Thinprep保存液中的小瓶中攪拌，蓋好瓶蓋送檢。保存液中的標(biāo)本經(jīng)清潔液及細(xì)胞基液離心沉淀處理后，在載玻片上制成直徑為2cm的薄層細(xì)胞涂片，用95%酒精固定，巴氏染色，鏡檢。由病理科醫(yī)師根據(jù)描述性診斷(the bethesda system，TBS)診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行細(xì)胞學(xué)診斷，包括無(wú)上皮內(nèi)病變(NILM)；不典型鱗狀細(xì)胞意義不明確(atypical squamous cell of undetermined significance,ASCUS)；低度鱗狀上皮內(nèi)病變(low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)，包括HPV的細(xì)胞變化、輕度異型增生和宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)Ⅰ；高度鱗狀上皮內(nèi)病變(high-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)，涵蓋中及重度異型增生、原位癌、CINⅡ和CINⅢ；鱗狀細(xì)胞癌(squamous cell cancer,SCC)。TCT檢查以≥ASCUS為陽(yáng)性。

1.2.2 高危型人乳頭狀瘤病毒基因檢測(cè)

按要求暴露宮頸后，用專用小刷子置于宮頸口與黏膜交界處逆時(shí)針轉(zhuǎn)3圈，并停留10秒，將小刷子放于專用試管中，蓋上蓋子送檢。按照操作規(guī)定，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行13種高危型HPV(HR-HPV)亞型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型)的檢測(cè)。診斷標(biāo)準(zhǔn)：光量讀數(shù)與陰性測(cè)定值比值(RLU/CO)>1.0為陽(yáng)性。

1.2.3 宮頸組織學(xué)檢查

對(duì)TCT檢查異常者行陰道鏡檢查，醋酸實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性或碘實(shí)驗(yàn)陰性者進(jìn)行多點(diǎn)(3、6、9、12)活檢，活檢組織經(jīng)10%甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，4μm切片，蘇木素-伊紅(HE)染色，光鏡觀察。宮頸活檢病理診斷≥CINⅠ級(jí)(輕度異型增生)判定為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

運(yùn)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，檢出率的比較采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.01。

2 結(jié)果

2.1 宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查各類(lèi)異常涂片檢出率

在3 216例TCT檢查結(jié)果中，發(fā)現(xiàn)異常者630例，占19.6%，其中不同年齡組異常涂片分布情況見(jiàn)表1。各年齡組組間細(xì)胞學(xué)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=13.53，P<0.01)，其中31～40歲和41～50歲是兩個(gè)高發(fā)年齡段，分別占38.7%(244/630)和45.6%(287/630)，合計(jì)共占84.3%，LSIL在年齡輕者中發(fā)病率高，隨著年齡的增長(zhǎng)，HSIL的發(fā)病率逐漸升高。

表1 不同年齡組異常涂片分布[n(%)]

2.2 宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果與高危型人乳頭狀瘤病毒基因檢測(cè)符合率

TCT檢查630例陽(yáng)性病例中，HC2-HPV-DNA檢測(cè)陽(yáng)性率60.8%；陰性率39.2%。TCT檢查與HC2-HPV-DNA檢測(cè)結(jié)果對(duì)照見(jiàn)表2。383例HC2-HPV-DNA檢測(cè)陽(yáng)性病例中HSIL和SCC的陽(yáng)性率較高，分別為81.7%和100.0%，HC2-HPV-DNA檢測(cè)在ASCUS與LSIL、HSIL、SCC間陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=21.54，P<0.01)。

2.3 宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合高危型人乳頭狀瘤病毒基因檢測(cè)與宮頸活檢結(jié)果對(duì)照情況

TCT檢查及HC2-HPV-DNA檢測(cè)均陽(yáng)性的383例行宮頸活檢，病理診斷為CIN者372例，符合率97.1%；TCT檢查為陽(yáng)性，HC2-HPV-DNA檢測(cè)為陰性的247例行宮頸活檢，病理診斷為CIN者164例，符合率66.4%，兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.40，P<0.01)，見(jiàn)表3。

表2 TCT檢查與HC2-HPV-DNA檢測(cè)結(jié)果對(duì)照[n(%)]

Table 2 Comparison of TCT examination and HC2 HPV-DNA testing[n(%)]

表3 TCT檢查、HC2-HPV-DNA檢測(cè)與病理活檢對(duì)照[n(%)]

3 討論

子宮頸因其解剖學(xué)位置及組織學(xué)特點(diǎn)，是婦產(chǎn)科疾病的好發(fā)部位，如急慢性宮頸炎、宮頸糜爛、宮頸息肉、宮頸癌等，尤其是宮頸癌，嚴(yán)重威脅著廣大婦女的身心健康乃至生命安危。國(guó)際癌癥研究中心(IARC)近年估計(jì)全球?qū)m頸癌5年患病例數(shù)為150余萬(wàn)人，其中3/4以上的患者是在發(fā)展中國(guó)家，發(fā)達(dá)國(guó)家有30余萬(wàn)患者，全球每年有新發(fā)病例45.9萬(wàn)，其中我國(guó)每年新發(fā)病例13.15萬(wàn)，占28.7%，居首位[2]。宮頸癌顯著的特點(diǎn)是有癌前病變期，從癌前病變發(fā)展成癌是一個(gè)較長(zhǎng)的過(guò)程，大約是10年。因此宮頸癌是一種可預(yù)防、可治愈的疾病，關(guān)鍵是進(jìn)行篩查，及早發(fā)現(xiàn)癌前病變，防患于未然[3]。

3.1 宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查應(yīng)用于宮頸癌篩查

宮頸細(xì)胞學(xué)檢查是宮頸癌早期診斷的重要篩查方法之一。傳統(tǒng)巴氏細(xì)胞學(xué)涂片從上世紀(jì)中期開(kāi)始一直是宮頸癌前病變常規(guī)篩查的最常用的方法之一，但是由于取材時(shí)有80%以上的細(xì)胞樣本隨取材器被丟棄，轉(zhuǎn)移至載玻片上的細(xì)胞很少，且涂片質(zhì)量差，涂片不均勻、過(guò)厚，血液、黏液等雜質(zhì)遮蔽了不正常細(xì)胞，使讀片受到干擾，影響陽(yáng)性檢出[4]。TCT技術(shù)將取得的標(biāo)本及時(shí)放入保存液中，可使黏液軟化，并與細(xì)胞分離，減少細(xì)胞退變，避免陽(yáng)性細(xì)胞堆積和丟失，經(jīng)高精度濾器過(guò)濾制成薄層涂片。研究表明，TCT技術(shù)的發(fā)展有效地彌補(bǔ)了傳統(tǒng)巴氏涂片技術(shù)的局限性，明顯提高了宮頸異常細(xì)胞的檢出率，而且TCT采用與之相適應(yīng)的TBS分類(lèi)法，有助于細(xì)胞學(xué)診斷的準(zhǔn)確性，便于細(xì)胞學(xué)醫(yī)生與臨床醫(yī)生之間的交流[5]，成為國(guó)內(nèi)外婦產(chǎn)科宮頸陰道疾病檢查的常規(guī)方法。

20世紀(jì)80年代后，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用，國(guó)內(nèi)外大量研究已證實(shí)HPV感染是宮頸癌的主要危險(xiǎn)因素。依據(jù)HPV與腫瘤的關(guān)系，不同類(lèi)別的HPV感染可以導(dǎo)致不同的臨床病變。CINⅠ常由HPV6、11型引起，CINⅡ、Ⅲ則常伴有HPV16、18、31、35型感染等[6]。目前發(fā)現(xiàn)感染肛門(mén)生殖器的HPV可分為低危型和高危型，低危型常在宮頸良性或低度病變的病灶中檢測(cè)到，而高危型通常在高度病變中發(fā)現(xiàn)。高危型HPV感染是宮頸癌前病變的發(fā)展和隨后宮頸癌進(jìn)展的一種主要危險(xiǎn)因子[7]。美國(guó)有研究發(fā)現(xiàn)：在30歲以下有性生活的年輕婦女中生殖道HPV感染率很高，但是將近3/4的感染者無(wú)癥狀，大部分HPV感染會(huì)自然消退，有臨床癥狀的僅占20%左右[8]，這也間接地說(shuō)明了只有高危型HPV感染才與宮頸癌的發(fā)病有關(guān)。目前常檢測(cè)的有13種高危型HPV(HR-HPV)亞型，即16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型。HC2-HPV-DNA檢測(cè)可提高宮頸癌及癌前病變篩查的敏感性，是宮頸癌篩查的重要手段。

3.2 宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合二代基因雜交捕獲法高危型人乳頭狀瘤病毒基因檢測(cè)應(yīng)用于宮頸癌篩查

有學(xué)者指出TCT檢查特異性高于HPV檢測(cè)，但HPV檢測(cè)敏感性高于TCT檢查，將兩者結(jié)合可使宮頸癌前病變和早期宮頸癌的篩查準(zhǔn)確性明顯提高[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，TCT檢查及HC2-HPV-DNA檢測(cè)均陽(yáng)性者，CIN發(fā)病率明顯增高，而且高度病變占很大部分比例，TCT單獨(dú)診斷的陽(yáng)性率為66.4%，而與HC2-HPV-DNA聯(lián)合診斷的陽(yáng)性率為97.1%，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。說(shuō)明HC2-HPV-DNA聯(lián)合TCT對(duì)宮頸癌前病變?cè)\斷的準(zhǔn)確性較高，優(yōu)于單獨(dú)應(yīng)用TCT檢查。本研究中還發(fā)現(xiàn)從年齡段上，CIN在31～50歲發(fā)生率明顯較其他年齡段高，此年齡段應(yīng)作為重點(diǎn)篩查對(duì)象。有文獻(xiàn)指出，建議有性生活史約3年后就開(kāi)始宮頸普查(年齡不超過(guò)21歲)，30歲之前應(yīng)每年做1次常規(guī)的宮頸細(xì)胞學(xué)檢查，或每2年做1次TCT檢查，對(duì)連續(xù)3次細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果正?；蜿幮哉?，到30歲以后可每2～3年普查1次，70歲以上的婦女如連續(xù)3年以上細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果正?；蜿幮?，同時(shí)在70歲以前的10年中無(wú)異?；蜿?yáng)性細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果者，可以選擇停止宮頸癌的普查[10]。

總之，研究結(jié)果表明TCT檢查聯(lián)合HC2-HPV-DNA檢測(cè)可顯著提高對(duì)宮頸癌前病變?cè)\斷的靈敏度，是一種較準(zhǔn)確和具有實(shí)用價(jià)值的宮頸癌篩查方法。對(duì)及時(shí)發(fā)現(xiàn)宮頸癌前病變，最大限度地降低宮頸癌的病死率有非常重要的臨床價(jià)值。

[1]Du Chateau B K, Schroeder E R,Munson E.Clinical laboratory experience with cervista HPV HR as a function of cytological classification:Comparison with retrospective digene HC2 high-risk HPV DNA test data[J].J Clin Microbiol,2013,51(3):1057-1058.

[2]張燕,楊紅梅,董麗萍,等.宮頸脫落細(xì)胞學(xué)病理組織學(xué)檢查和人乳頭瘤樣病毒檢測(cè)在診斷宮頸病變中的臨床意義[J].河北醫(yī)學(xué),2014,20(9):1509-1511.

[3]Junyangdikul P, Tanchotsrinon W, Chansaenroj J,etal.Clinical prediction based on HPV DNA testing by hybrid capture 2(HC2) in combination with liquid-based cytology (LBC)[J].Asian Pac J Cancer Prev,2013,14(2):903-907.

[4]Walczak L, Dutkiewicz S, Marszaek A.Incidence and prevalence of multiple types of genital human papillomavirus(HPV) infection in men:A study in Poland[J].Ginekologia Polska,2013,84(2):112-115.

[5]陸曉青,陳潔瑛,舒青青,等.宮頸液基薄層脫落細(xì)胞聯(lián)合HPV及p16檢測(cè)在宮頸癌早期篩查中的臨床意義[J].浙江醫(yī)學(xué),2014,36(13):1147-1149.

[6]Ngou J, Gilham C, Omar T,etal.Comparison of analytical and clinical performances of the digene HC2 HPV DNA assay and the INNO-LiPA HPV genotyping assay for detecting high-risk HPV infection and cervical neoplasia among HIV-positive African women[J].J Acquir Immune Defic Syndr,2015,68(2):162-168.

[7]孫笑非,顧依群,王愛(ài)春,等.高危型人乳頭瘤病毒檢測(cè)結(jié)合薄層細(xì)胞學(xué)檢查在宮頸癌篩查中的價(jià)值評(píng)估[J].中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志,2013,27(4):273-276.

[8]Jenkins A, Allum A G, Strand L,etal.Simultaneous detection, typing and quantitation of oncogenic human papillomavirus by multiplex consensus real-time PCR[J].J Virol Methods,2013,187(2):345-351.

[9]樓玲芳.液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測(cè)和高危型人乳頭狀瘤病毒檢測(cè)在宮頸癌及癌前病變篩查和預(yù)后判斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].中國(guó)醫(yī)師進(jìn)修雜志,2013,36(15):41-43.

[10]謝幸,茍文麗.婦產(chǎn)科學(xué)[M].8版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2013:231-232.

[專業(yè)責(zé)任編輯：安瑞芳]

二手煙暴露增加兒童成年后頸動(dòng)脈斑塊風(fēng)險(xiǎn)

芬蘭一項(xiàng)長(zhǎng)達(dá)26年的研究顯示，暴露于二手煙的兒童頸動(dòng)脈粥樣斑塊的風(fēng)險(xiǎn)較高。研究者使用1980年收集的超過(guò)1 000名兒童的冷凍血液樣本，及1980年、1983年父母報(bào)告的吸煙狀況的資料；并于2001至2007年對(duì)這部分兒童在成年期(平均36歲時(shí))進(jìn)行了超聲檢查，結(jié)果顯示，有2%在成年期具有頸動(dòng)脈斑塊。超過(guò)84%的非吸煙者孩子血液中無(wú)尼古丁，而父母一方吸煙的孩子中為43%，父母雙方都吸煙的為62%。相比非吸煙者，這些孩子成年后頸動(dòng)脈斑塊的風(fēng)險(xiǎn)增加1.5倍，但是那些二手煙暴露較多的兒童則風(fēng)險(xiǎn)增加4倍。該研究發(fā)表在2015年3月《循環(huán)》(Circulation)雜志上。

http://www.univadis.cn/medical-news/86/Circulation3?utm_source=adhoc+emails&utm_medium=email&utm_campaign=sp+emails&utm_term=manual

Health screening and HPV-DNA testing in women in Zhenhai district of Ningbo City

YUAN Hui-min, XU Li-ming, YUAN Qiu-yan

(Department of Pathology, Zhenhai Longsai Hospital, Zhejiang Ningbo 315200, China)

Objective To evaluate the significance of combined application of TCT and HPV-DNA testing in screening of cervical lesion. Methods TCT and HC2-HPV-DNA testing were performed for 3 216 women and the results were compared to pathological biopsy. Results Totally 630 cases were positive in TCT examination, with positive rate of 19.6% (630/3 216), including 383 cases with positive results in HC2-HPV-DNA testing (60.8%, 383/630). The cases with positive results in TCT examination and HC2-HPV-DNA testing underwent cervical biopsy, and the CIN coincidence rate of pathological diagnosis was 97.1%. There were 247 cases with positive results in TCT examination but negative results in HC2-HPV-DNA testing, and their CIN coincidence rate of pathological diagnosis was 66.4%. The difference in coincidence rate was statistically significant (χ2=9.40,P<0.01).Conclusion It is particularly important to combine TCT examination with HC2-HPV DNA testing in screening of cervical concer.

TCT；HC2-HPV-DNA testing；pathological biopsy；cervical cancer；screening

2014-08-22

寧波市鎮(zhèn)海區(qū)科技局立項(xiàng)課題資助項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)2012S1012)

袁慧敏(1971-)，女，副主任醫(yī)師，主要從事臨床病理診斷工作。

10.3969/j.issn.1673-5293.2015.02.074

R737.33

A

1673-5293(2015)02-0376-03