梁景巖，王英歌

（揚州大學醫(yī)學院，江蘇揚州225001）

普伐他汀對動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性和Lp-PLA2表達的影響

梁景巖，王英歌

（揚州大學醫(yī)學院，江蘇揚州225001）

目的探討普伐他汀對兔動脈粥樣硬化（AS）斑塊穩(wěn)定性及血清脂蛋白相關磷脂酶A2（Lp-PLA2）表達的影響。方法取大白兔24只，隨機分為甲、乙、丙三組，每組8只。甲組不造模，乙、丙組采用球囊拉傷法制造AS模型，丙組給予普伐他汀干預，然后觀察其病理改變及血清Lp-PLA2表達情況。結果與甲組比較，第5、10周乙、丙組大白兔血清Lp-PLA2水平顯著增高，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），且第10周乙組大白兔血清Lp-PLA2水平增高更為明顯。與乙組比較，第5、10周丙組大白兔血清Lp-PLA2水平均明顯下降，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。第5、10周乙組大白兔血清Lp-PLA2水平均顯著高于實驗前，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。第5、10周丙組大白兔血清Lp-PLA2水平略高于實驗前。普伐他汀干預后AS斑塊的病理學形態(tài)、結構均發(fā)生改變，斑塊結構更加趨于穩(wěn)定。結論普伐他汀能降低AS動物的Lp-PLA2水平，促進斑塊穩(wěn)定。

普伐他??；動脈粥樣硬化；磷脂酶A2；脂蛋白類

動脈粥樣硬化（AS）為臨床常見疾病，是導致臨床缺血性心、腦血管事件發(fā)生的主要原因[1]。大量研究表明，在AS斑塊形成過程中血管新生現(xiàn)象是其重要的病理學特征，這種現(xiàn)象進一步可導致AS斑塊的不穩(wěn)定性，繼而引發(fā)斑塊破裂、出血，最終出現(xiàn)嚴重臨床癥狀。有研究發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，發(fā)生缺血性血管事件患者血清脂蛋白相關磷脂酶A2（lipoproteinassociatedphospholipase A2，Lp-PLA2）水平顯著升高，Lp-PLA2是心血管疾病新的獨立危險因子，與AS斑塊的形成及穩(wěn)定性關系密切[2]。本研究采用普伐他汀對AS動物模型進行早期干預，通過檢測動物血清Lp-PLA2水平變化，旨在探討普伐他汀對AS及粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 取雄性新西蘭大白兔24只，由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司實驗動物室提供[生產(chǎn)許可證號：SCXK（魯）20130001]。采用隨機數(shù)字分組法分為甲、乙、丙三組，每組8只，其中甲組為正常對照組，體質(zhì)量2.4～3.7 kg；乙組為模型組，體質(zhì)量2.6～3.8 kg；丙組為普伐他汀給藥組，體質(zhì)量2.5～3.8 kg。三組大白兔體質(zhì)量比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。甲組給予正常飼料，乙、丙組均給予高脂飼料（內(nèi)含1%膽固醇）。飼養(yǎng)14d后對乙、丙組進行球囊拉傷造模。本實驗經(jīng)動物倫理審查委員會審查通過。

1.2 方法

1.2.1 造模 采用球囊拉傷法制備AS動物模型[3]。采用10%水合氯醛麻醉，在腹股溝區(qū)確認股動脈搏動后縱向切開大白兔皮膚，分離皮下組織，鈍性分離動、靜脈及股神經(jīng)，用橈動脈穿刺針成功穿刺股動脈后在血管造影儀透視下送入導管，沿導管將4 F球囊插入家兔股動脈后上行插入30 cm左右，再向球囊內(nèi)注入0.2 mL生理鹽水，使球囊直徑膨脹約0.5 cm，向下拖拉球囊至骼總動脈分叉處，反復牽拉損傷內(nèi)皮，共進行3次。最后撤出球囊導管，結扎股動脈，依次對大白兔組織及皮膚創(chuàng)口進行縫合。術后每天肌內(nèi)注射青霉素80 U，并連續(xù)抗感染治療3 d。

1.2.2 AS斑塊穩(wěn)定性觀察 將上述各組動物處死，選擇腹主動脈AS斑塊進行肉眼觀察，并取材制作病理切片，光鏡下觀察斑塊的基本構成，以判斷其穩(wěn)定性。

1.2.3 血清Lp-PLA2水平檢測 分別于實驗前，實驗第5、10周采集大白兔靜脈血，檢測各組大白兔血清Lp-PLA2水平。

1.3 統(tǒng)計學處理 應用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以±s表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以率或構成比表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 三組大白兔不同時間點Lp-PLA2水平比較 與甲組比較，第5、10周乙、丙組大白兔血清Lp-PLA2水平均增高，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），第10周乙組大白兔血清Lp-PLA2水平增高更為明顯。與乙組比較，第5、10周丙組大白兔血清Lp-PLA2水平均明顯下降，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。第5、10周乙組大白兔血清Lp-PLA2水平顯著高于實驗前，第10周血清Lp-PLA2水平較第5周明顯增高，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。第5、10周丙組大白兔血清Lp-PLA2水平略高于實驗前，見表1。

表1 三組大白兔不同時間點Lp-PLA2水平比較（±s，μg/L）

表1 三組大白兔不同時間點Lp-PLA2水平比較（±s，μg/L）

注：與甲組同時間點比較，aP＜0.05；與乙組同時間點比較，bP＜0.05；與同組實驗前比較，cP＜0.01；與同組第5周比較，dP＜0.05。

組別甲組乙組丙組n 實驗前 第5周 第10周8 8 8 28.78±8.34 26.46±7.73 29.75±3.76 26.65±7.13 48.43±4.58ac38.69±8.42ab25.69±5.37 68.35±9.58acd35.76±8.79ab

2.2 三組大白兔AS斑塊穩(wěn)定性觀察 甲組大白兔腹主動脈管壁厚薄均勻，內(nèi)膜較光滑，未見到泡沫細胞及脂質(zhì)沉積。乙組大白兔腹主動脈壁增厚，且薄厚不均勻，已出現(xiàn)明顯AS斑塊，斑塊深層可見泡沫細胞、脂質(zhì)沉積及膽固醇結晶，斑塊突入血管腔致管腔狹窄。丙組大白兔斑塊較小、膠原成分較多，泡沫細胞及脂質(zhì)沉積較乙組減少，見圖1。

圖1 三組大白兔AS斑塊穩(wěn)定性觀察（蘇木精-伊紅染色，20×）

3 討 論

21世紀以來，AS已成為嚴重威脅人類健康的疾病[4]，AS是一種慢性、增殖性、退行性、進展性的全程性炎癥過程，是導致冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟。┑刃?、腦血管疾病的病理學基礎。近年來研究發(fā)現(xiàn)[5]，AS斑塊內(nèi)的炎性反應，由Lp-PLA2水解的促炎癥介質(zhì)介導，引起血管內(nèi)皮細胞損傷，出現(xiàn)單核細胞浸潤，導致泡沫細胞沉積，最終促進粥樣斑塊形成及使粥樣斑塊不穩(wěn)定。因此，抑制斑塊內(nèi)炎癥介質(zhì)的連鎖反應對穩(wěn)定斑塊、防止急性血管事件的發(fā)生意義重大。Lp-PLA2是目前較新發(fā)現(xiàn)的促進動脈硬化斑塊炎性反應的獨立因子[6]，是磷脂酶A2家族成員，主要由巨噬細胞、單核細胞、T淋巴細胞和肥大細胞分泌產(chǎn)生，能特異性促進血管內(nèi)相關炎癥細胞增殖分裂、促進斑塊纖維分解，機體中的Lp-PLA2主要與脂蛋白顆粒結合，其中2/3與低密度脂蛋白結合，其余1/3與極低密度脂蛋白和高密度脂蛋白結合。Lp-PLA2能水解氧化低密度脂蛋白，將其水解生成卵磷脂及氧化游離脂肪酸等促炎癥介質(zhì)，后二者可促進細胞黏附因子、表皮生長因子和血小板源性生長因子的表達，引起內(nèi)皮功能障礙，促進單核細胞向內(nèi)膜聚集衍生成巨噬細胞，從而促進動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展。大量研究表明，Lp-PLA2為血管炎性反應特異性標志物，可反映AS斑塊的嚴重程度，而且在急性冠狀動脈綜合征患者中Lp-PLA2水平也顯著升高。最新研究表明，血清Lp-PLA2水平也與支架植入后再狹窄呈正相關。大量實驗證明，在急性冠狀動脈綜合征患者中降低循環(huán)中Lp-PLA2水平有利于冠狀動脈斑塊的消退。有研究證實，其在AS斑塊中的表達明顯增加，并對斑塊的發(fā)生、發(fā)展具有促進作用[7]。大量研究表明，普伐他汀能有效降低冠心病發(fā)病率及病死率，降低低密度脂蛋白膽固醇，抑制斑塊進展[8]。另外普伐他汀還能改善內(nèi)皮功能、穩(wěn)定斑塊、抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抑制血栓形成等[9]。有研究證實，普伐他汀可減少Lp-PLA2表達，減少泡沫細胞的沉積，從而使斑塊更趨于穩(wěn)定，并且這些作用均與其降脂作用無關[10]。本研究結果表明，普伐他汀可在一定程度抑制Lp-PLA2的表達。病理學檢查結果顯示，普伐他汀干預后動脈粥樣硬化斑塊的病理學形態(tài)、結構均發(fā)生改變，斑塊結構更趨于穩(wěn)定，表明普伐他汀對穩(wěn)定AS斑塊具有一定作用。

綜上所述，在實驗性動脈粥樣硬化斑塊形成過程中Lp-PLA2水平升高，提示Lp-PLA2有促進AS斑塊形成的作用。丙組大白兔血清Lp-PLA2水平明顯下降，斑塊較為穩(wěn)定，提示普伐他汀具有穩(wěn)定斑塊、抑制Lp-PLA2表達的作用。然而由于本研究樣本量有限，尚有待于后期進一步深入研究。

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Influence of pravastatin on atherosclerotic plaque stability and Lp-PLA2 expression

Liang Jingyan，Wang Yingge
（Medical College of Yangzhou University，Yangzhou，Jiangsu 225001，China）

ObjectiveTo investigate the influence of pravastatin on the atherosclerotic plaque（AS）stability and serum Lp-PLA2 expression in rabbit．Methods24 rabbits were randomly divided into the group A，B and C，8 cases in each group.The group A was non-model.The group B and C adopted the balloon pulling injury method for establishing the AS model.Then the pathological changes and serum Lp-PLA2 expression were observed.ResultsCompared with the group A，serum Lp-PLA2 levels at 5，10 weeks in the group B and C were increased significantly，the differences were statistically significant（P＜0.05），moreover the increase of serum Lp-PLA2 level at 10 weeks in the group B was more obvious.Compared with the group B，the serum Lp-PLA2 levels at 5，10 weeks in the group C was significantly decreased，the difference was statistically significant（P＜0.05）.The serum Lp-PLA2 levels at 5，10 weeks in the group B were significantly higher than those before experiment，the difference was statistically significant（P＜0.01）.The serum Lp-PLA2 levels at 5，10 weeks in the group C were slightly higher than those before experiment.The pathological morphology and structure of AS plaque after pravastatin intervention were changed and the plaque structure trended to be more stable.ResultsPravastatin can reduce Lp-PLA2 level in the AS animal and promotes the AS plaque stability.

Pravastatin；Atherosclerosis；Phospholipases A2；Apolipoproteins

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.17.005

A

1009-5519（2015）17-2583-02

2015-06-01）

梁景巖（1977-），男，黑龍江黑河人，博士研究生，講師，主要從事動脈粥樣硬化方向的研究；E-mail：342459198@qq.com。