王小寧，馮鎖民，張存勞

(西安醫(yī)學院 藥學院，陜西 西安 710021)

酮洛芬屬苯丙酸類非甾體抗炎藥，在臨床上主要用于治療各種關節(jié)炎、術后疼痛及慢性癌痛等。但酮洛芬難溶于水，口服會對胃腸道有刺激作用，表現(xiàn)為消化道的潰瘍、惡心、嘔吐等不良反應。為避免上述不良反應，對酮洛芬的非口服劑型研究已經受到越來越多的關注［1-3］。其中，經皮給藥制劑可以避免胃腸道副作用和首過效應，提高局部藥物濃度，具有使用方便、可隨時中斷給藥及緩控釋等諸多優(yōu)點而受到了廣泛關注。醇質體是一種新型經皮給藥制劑，由磷脂、高比例乙醇、水組成，具有脂質體雙分子層結構，易于變形，流動性較高，可促進藥物穿透皮膚吸收［4］。本論文制備酮洛芬醇質體，對其體外經皮滲透特性進行考察，為研制酮洛芬較好的經皮吸收制劑奠定基礎。

1 實驗部分

1.1 材料與儀器

酮洛芬原料藥、卵磷脂、膽固醇均為醫(yī)藥級;甲醇，色譜級。

HJ-2 雙頭磁力加熱攪拌器;S-450D 型探針式超聲儀;ALC-210.4 型電子天平;KQ3200E 型超聲波清洗器;PYJ-6B 型透皮擴散試驗儀;Delsa Nano C Zeta 電位分析儀型;Agilent1260 型高效液相色譜儀。

1.2 實驗方法

1.2.1 酮洛芬醇質體的制備 稱取酮洛芬于80 mL燒杯中，加無水乙醇使其完全溶解，稱取卵磷脂于燒杯中，密封，超聲，使卵磷脂溶解，在密封條件下，將其置于磁力攪拌器上，緩緩加入pH=7.0 的磷酸鹽緩沖液，繼續(xù)攪拌30 min，過0.22 μm 濾膜，即得。

1.2.2 酮洛芬脂質體的制備 稱取卵磷脂與膽固醇(2∶1)置茄形瓶中，加入適量氯仿溶解，再加入以甲醇溶解的酮洛芬溶液，混合均勻，45 ℃恒溫水浴中旋轉蒸發(fā)溶劑至形成薄膜后，取PBS(pH 7.0)加入薄膜中，振搖直至將膜全部洗下，再置于25 ℃水浴中旋轉水化30 min，即得。

1.2.3 酮洛芬乙醇溶液的制備 精密稱取酮洛芬0.12 g，加30 mL 無水乙醇使其溶解，置于100 mL容量瓶中，純化水定容至刻度，即得。

2 結果與討論

2.1 酮洛芬含量測定方法

2.1.1 色譜條件 Agilent HC-C18(2)(4.6 mm ×150 mm，5 μm)，流動相:甲醇-0.05 mol/L 磷酸二氫鉀(55 ∶45)，柱溫25 ℃，檢測波長258 nm，流速1.0 mL/min，進樣量20 μL。

2.1.2 標準曲線的繪制 精密稱取酮洛芬0.05 g，加甲醇使其溶解并定容至100 mL。精密吸取供試液0.1，0.3，0.6，1.2，1.8，2.4 mL 分別于100 mL 容量瓶中，甲醇定容至刻度，即得濃度分別為0.50，1.50，3.00，6.00，9.00，12.00 μg/mL 的對照液，按2.1.1 節(jié)下的色譜條件測其峰面積。以濃度C 為橫坐標，峰面積A 為縱坐標繪制標準曲線。標準曲線方程為:Y=59.858X+15.556，R2=0.999 9，表明酮洛芬在0.50 ～12.00 μg/mL 濃度范圍內線性關系良好。

2.1.3 精密度實驗 取2.1.2 節(jié)下的同一濃度的酮洛芬溶液(9.00 μg/mL)，按照2.1.1 節(jié)色譜條件測定，連續(xù)進樣6 次，計算RSD 值為1.8%，表明精密度良好。

2.1.4 穩(wěn)定性實驗 取2.1.2 節(jié)下的同一濃度的酮洛芬溶液(9.00 μg/mL)，分別在0，1，2，3，6，12 h，按照2.1.1 節(jié)下的色譜條件進樣測定，計算RSD 值為3.1%，表明在12 h 內穩(wěn)定性良好。

2.1.5 加樣回收率實驗 ①空白醇質體的制備:量取無水乙醇于燒杯中，稱取卵磷脂，密閉條件下在超聲清洗器中超聲溶解后將其置于磁力攪拌器上，密封條件下緩緩加入pH=7.0 的磷酸鹽緩沖液，繼續(xù)攪拌30 min，過0.22 μm 濾膜，即得。②加樣回收率的測定:精密吸取2.1.2 節(jié)下的對照液0.3，1，2 mL 分別于100 mL 容量瓶中，分別加0.5 mL 空白醇質體，甲醇稀釋至刻度，按2.1.1 節(jié)下給定的色譜條件測定，結果見表1。

表1 加樣回收率實驗Table 1 Results of the sample recovery tests

由表1 可知，在低、中、高濃度測得的回收率分別為(96. 6 ± 0. 86)%，(96. 6 ± 1. 03)%，(97. 5 ±1.8)%。表明回收率良好。

2.2 粒徑、Zeta 電位值及包封率的測定

酮洛芬醇質體和脂質體的粒徑及Zeta 電位值由激光散射粒徑分析儀測得，粒徑分布見圖1。包封率采用透析法測定:分別移取酮洛芬醇質體，酮洛芬脂質體2 mL 于透析袋中，將其放入含200 mL 的磷酸鹽緩沖液(pH =7.0)的燒杯中，于磁力攪拌器上，20 h后取樣，按照2.1.1 節(jié)下的色譜條件測定游離藥物，按照下列公式計算其包封率。

圖1 酮洛芬醇質體的粒徑及粒徑分布圖Fig.1 Particle size and size distribution of ketoprofen ethosomes

式中，W游為游離藥物濃度，W總為藥物總濃度。

醇質體與脂質體的Zeta 電位值、包封率結果見表2。由表2 可知，酮洛芬醇質體的粒徑分布窄(PDI=0.17)，粒徑［(166.03 ±0.24)nm］顯著小于脂質體(218.70±0.36)，這可能是由于高比例的乙醇引起，乙醇可以改變體系表面電荷，增加醇質體的空間穩(wěn)定性，從而使粒徑減少。醇質體粒徑小的特點有助于其進行深層經皮滲透。酮洛芬醇質體和脂質體的包封率由透析法測定，分別為(67.87 ±0.95)%和(94.50±0.26)%，這可能是由于醇質體中加入乙醇使膜的流動性和滲透性增加，從而使包封率下降。

表2 酮洛芬不同載體粒徑、PDI、Zeta 電位值與包封率Table 2 Particle size，PDI，Zeta potential and encapsulation efficiency of different carrier

2.3 體外透皮實驗

2.3.1 離體小鼠皮的準備 斷頸法處死小白鼠，由背底部開始，沿背部縱向用手術剪剪開小鼠背部皮膚，并環(huán)繞剪開，剝離小鼠皮膚后，剪去多余皮毛，除去其皮下組織，用刀片將剝離下的皮膚皮毛刮干凈，清水沖洗后再用少量生理鹽水清洗，并將處理好的小鼠皮放于生理鹽水中，4 ℃冰箱保存，24 h 內使用。

2.3.2 體外透皮實驗 吸取6.5 mL 接受液于接受池中，用手術剪將已處理好的小鼠皮剪成適量大小，固定于供給室和接受池之間(注意使皮膚表層面向供給室，皮膚內側面向接受室);分別量取酮洛芬乙醇溶液，酮洛芬脂質體、酮洛芬醇質體各2.5 mL 于供給室，將接受池置于恒溫水浴(32 ℃)中，開啟磁力攪拌器(200 r/min)。分別于0，0.5，1，2，3，5，7，9，12 h 取出0.2 mL 接收液，并及時補充等量恒溫的接收液。12 h 后，將皮膚取出并用純化水擦拭干凈，濾紙吸干皮膚多余水分，剪碎皮膚，用適量甲醇超聲，將取得的樣品分別對應放入標記好的彈頭試管中，經處理后，按照2.1.1 節(jié)下的色譜條件測其藥物濃度，并根據下列公式計算累計滲透量(Q)。

Cn:不同取樣點時的接收液濃度;Ci:取樣點時取樣液濃度;V:接受池體積(mL);Vi:取樣體積(mL);A:擴散面積(cm2)。

經皮滲透12 h 后，酮洛芬脂質體、醇質體和乙醇溶液的累計滲透量結果見圖2 和表3。

圖2 體外透皮實驗Fig.2 Results of in-vitro percutaneous experiment

表3 12 h 后三種制劑的累計滲透量和皮膚滯留量Table 3 The cumulative permeation amount and skin retention of three formulations after 12 h

由圖2 和表3 可知，經皮滲透12 h 后，皮膚累計滲透量由高到低依次為:酮洛芬醇質體＞酮洛芬脂質體＞酮洛芬乙醇溶液。醇質體組的累計滲透量［(274.11 ±38.53)μg/cm2］顯著高于脂質體和乙醇溶液組［(78.66±25.10)μg/cm2］(P ＜0.05)，但是脂質體組［(128.10 ±30.68)μg/cm2］和乙醇溶液組間并無顯著性差異(P ＞0.05)。醇質體組的皮膚滯留量也高于脂質體組和乙醇溶液組，說明酮洛芬醇質體與脂質體相比，表現(xiàn)出了更好的經皮滲透效果。

3 結論

醇質體的促進皮膚吸收機理目前仍不是很明確，但普遍認為與乙醇的加入有關?？赡苁且驗橐掖几淖兞私琴|層的排列而增加了脂質分子的流動性，也可能是因為醇質體在經皮傳遞過程中發(fā)生了變形，從而通過紊亂的角質層［5］。與普通脂質體相比，醇質體具有更好的包封率，穿透皮膚角質層也顯著提升，但是乙醇濃度過高會破壞醇質體的囊泡結構，對醇質體的形成不利，研究表明，當醇質體中乙醇的含量為30%時，制備的藥物包封率最高［6］。

醇質體的粒徑對其在體內的行為有很大的影響，通常認為粒徑小于300 nm 的載體才能更容易地將藥物輸送到皮膚深部［7］。Zeta 電位值也可以衡量醇質體的穩(wěn)定性，已有文獻表明，醇質體因為乙醇的加入而帶負電荷，故醇質體對陽離子型藥物的包封率較高［8］。

醇質體包封率的測定方法一般有透析法和超速離心法。本論文采用透析法，避免了超速離心過程中因強大的能量引起的脂質變形破裂造成的藥物流失［9］。醇質體在貯存期間，包封率可能發(fā)生變化，這與醇質體的穩(wěn)定性有關，時間過長可能因乙醇的揮發(fā)導致卵磷脂的析出致使藥物泄露。因此可以進一步制成凝膠制劑來改善醇質體的穩(wěn)定性，同時可加入適量的膽固醇增加膜的硬度，從而增加醇質體的穩(wěn)定性，減低藥物的泄漏率［10］。關于酮洛芬醇質體的穩(wěn)定性影響因素及透皮吸收的機制還需進一步的研究。

［1］ 陳琰，胡晉紅，范國榮，等. 酮洛芬的制劑研究［J］. 藥學進展，2001，15(4):219-223.

［2］ 孫華君，胡晉紅，朱全剛.脂質體對酮洛芬體外透皮特性的影響［J］. 第二軍醫(yī)大學學報，1999，20(6):371-373.

［3］ 胡晉紅，錢俊，全山從，等. 酮基布洛芬片退熱栓的試制與臨床應用［J］.現(xiàn)代應用藥學，1991，8(6):28-31.

［4］ 李欣蔚，林華慶，卜水. 經皮給藥新型脂質體-醇質體［J］.中國藥師，2009，12(12):1726-1728.

［5］ Dayan N，Touitou E.Carriers for skin delivery of trihexyphenidyl HCL:ethosomes vs liposomes［J］. Biomaterials，2000，21(18):1879-1885.

［6］ 施曉琴，趙繼會，王志東，等. 醇質體在經皮給藥方面的應用［J］. 中國實驗方劑學雜志，2013，19(12):352-355.

［7］ Verma D D，Verma S，Blume G，et al.Particle size of liposomes influences dermal delivery of substances into skin［J］.Int J Pharm，2003，258:141-151.

［8］ 安珂瑤，孫勇. 醇質體的研究進展［J］. 中國藥房，2011，22(5):463-465.

［9］ 祝偉偉，翟光喜，趙軍.醇質體的研究進展［J］.食品與藥品，2007，9(01A):46-49.

［10］楊飛，李芳，焦海勝，等. 秋水仙堿醇質體凝膠的制備及質量控制［J］.中國藥房，2009，20(1):50-52.