鄭旭霞，周宇雪，劉培建[1.河南省洛陽(yáng)正骨醫(yī)院（河南省骨科醫(yī)院）藥劑科，鄭州45005；.鄭州兒童醫(yī)院藥學(xué)部，鄭州450053]

改進(jìn)HPLC法測(cè)定酮洛芬腸溶膠囊中酮洛芬的含量

鄭旭霞1＊，周宇雪2，劉培建1#[1.河南省洛陽(yáng)正骨醫(yī)院（河南省骨科醫(yī)院）藥劑科，鄭州450052；2.鄭州兒童醫(yī)院藥學(xué)部，鄭州450053]

目的：改進(jìn)高效液相色譜法測(cè)定酮洛芬腸溶膠囊中酮洛芬的含量。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱為Chiralpak IC，流動(dòng)相為正己烷（含0.1%三氟乙酸）-異丙醇（90∶10，V/V），流速為0.8m L/m in，檢測(cè)波長(zhǎng)為268 nm，柱溫為25℃，進(jìn)樣量為10μL。結(jié)果：酮洛芬檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為0.025～0.5mg/m L（r＝0.999 8），定量限為1.0mg/L，檢測(cè)限為0.2mg/L；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD＜2%；加樣回收率為96.36%～100.32%（RSD＝1.87%，n＝6）。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確快速，適用于測(cè)定酮洛芬腸溶膠囊中酮洛芬的含量。

酮洛芬腸溶膠囊；酮洛芬；含量；高效液相色譜法

酮洛芬（Ketoprofen）又名酮基布洛芬，是一種2-芳基丙酸非甾體抗炎藥，可抑制環(huán)氧化酶活性，還可在一定程度上抑制脂氧酶活性，減少緩激肽生成，改善炎癥和損傷部位情況[1]。此外，酮洛芬還有一定的中樞性鎮(zhèn)痛作用，對(duì)風(fēng)濕、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、脊髓炎、痛風(fēng)等具有較好療效[2-3]，是目前臨床應(yīng)用較多的抗炎鎮(zhèn)痛藥之一[4]。酮洛芬腸溶膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于2015年版《中國(guó)藥典》（二部）[5]，但現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)文獻(xiàn)中多采用反向高效液相色譜法（HPLC）[5-8]、紫外分光光度法[9-10]等，分離效果均不是很理想。因此，筆者采用HPLC法在正向色譜條件下測(cè)定酮洛芬腸溶膠囊中酮洛芬的含量，以期為完善該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 材料

1.1 儀器

HP 1200型HPLC儀，包括1200可變波長(zhǎng)檢測(cè)器、1200化學(xué)工作站、1200標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)進(jìn)樣器（美國(guó)Agilent公司）；BP 211D型電子分析天平（德國(guó)Sartorius公司）；

1.2 藥品與試劑

酮洛芬腸溶膠囊（山東華魯制藥有限公司，批號(hào)：091002、091103、100106，規(guī)格：50mg/片）；酮洛芬對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100337-200502，純度：＞98%）；正己烷、異丙醇和無(wú)水乙醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Chiralpak IC（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：正己烷（含0.1%三氟乙酸）-異丙醇（90∶10，V/V）；流速：0.8m L/m in；檢測(cè)波長(zhǎng)：268 nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液精密稱取酮洛芬對(duì)照品50.0mg，置于100m L量瓶中，加乙醇溶解并定容，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液精密稱取樣品內(nèi)容物適量（相當(dāng)于酮洛芬25mg），置于50m L量瓶中，加乙醇30m L，溶解并定容，搖勻，經(jīng)0.45μm微孔濾膜，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液按樣品的處方比例和制備工藝制備缺酮洛芬的陰性樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

精密量取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜，詳見(jiàn)圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，理論板數(shù)以S-酮洛芬、R-酮洛芬峰計(jì)均≥3 000；各成分均能達(dá)到基線分離，分離度＞2。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.4 線性關(guān)系考察

精密量取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、10.0m L，分別置于10m L量瓶中，加乙醇定容，制成系列對(duì)照品溶液。取上述系列對(duì)照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以酮洛芬質(zhì)量濃度（x，mg/m L）為橫坐標(biāo)，峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得酮洛芬回歸方程y＝18 923x－9.764 6（r＝0.999 8）。結(jié)果表明，酮洛芬（R-酮洛芬與S-酮洛芬之和）檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為0.025～0.5mg/m L。

2.5 定量限（LOQ）與檢測(cè)限（LOD）考察

取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，倍比稀釋，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。當(dāng)信噪比為10∶1時(shí)，得LOQ；當(dāng)信噪比為3∶1時(shí)，得LOD。結(jié)果，酮洛芬（R-酮洛芬與S-酮洛芬之和）的LOQ為1.0 mg/L，LOD為0.2mg/L。

2.6 精密度試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果，酮洛芬（R-酮洛芬與S-酮洛芬之和）峰面積的RSD＝0.13%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下供試品溶液（批號(hào)：091103）適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、10、12、24 h時(shí)，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，酮洛芬（R-酮洛芬與S-酮洛芬之和）峰面積的RSD＝0.97%（n＝8），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批樣品（批號(hào)：091103）適量，共6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算樣品含量。結(jié)果，酮洛芬（R-酮洛芬與S-酮洛芬之和）含量的平均值為98.1%，RSD＝1.12%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品（批號(hào)：091103）適量，共6份，分別置于50m L量瓶中，各加入一定質(zhì)量的酮洛芬對(duì)照品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 1 Resu ltsof recovery test（n＝6）

2.10 樣品含量測(cè)定

取3批樣品（批號(hào)：091002、091103、100106）各適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定3次，記錄峰面積并計(jì)算樣品中酮洛芬（R-酮洛芬與S-酮洛芬之和）的含量。結(jié)果，3批樣品中，酮洛芬的含量分別為97.12%、97.50%、99.20%（n＝3）。

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇

本試驗(yàn)考察了不同比例正己烷（含0.1%三氟乙酸）-無(wú)水乙醇和正己烷（各0.1%三氟乙酸）-異丙醇等作為流動(dòng)相體系及其不同體系的體積比對(duì)酮洛芬色譜峰的影響。結(jié)果表明，流動(dòng)相為正己烷（含0.1%三氟乙酸）-無(wú)水乙醇時(shí)，S-酮洛芬和R-酮洛芬未達(dá)到基線分離。綜合考慮分析時(shí)間和分離度，故選用正己烷（含0.1%三氟乙酸）-異丙醇（90∶10，V/V）作為流動(dòng)相。

3.2 柱溫和流速的選擇

本試驗(yàn)考察了不同柱溫和流速對(duì)酮洛芬對(duì)映體的保留時(shí)間和分離度的影響。結(jié)果，在10～35℃范圍內(nèi)，綜合考慮S-酮洛芬和R-酮洛芬的分離度和試驗(yàn)溫度的易操控性，選用25℃為最佳柱溫。在0.2～1.2m L/m in內(nèi)，綜合分析時(shí)間和分離度，選用0.8m L/m in為最佳流速。

3.3 酮洛芬的構(gòu)型

酮洛芬α位上有1個(gè)手性碳原子，存在一對(duì)光學(xué)異構(gòu)S-酮洛芬和R-酮洛芬[10-11]。本試驗(yàn)主要考察酮洛芬腸溶膠囊中酮洛芬的含量，故相關(guān)試驗(yàn)中以S-酮洛芬與R-酮洛芬峰面積之和來(lái)計(jì)算酮洛芬的含量，這也為后續(xù)測(cè)定酮洛芬腸溶膠囊中S-酮洛芬與R-酮洛芬的含量作一定鋪墊。

綜上所述，本方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確快速，適用于測(cè)定酮洛芬腸溶膠囊中酮洛芬的含量。

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（編輯：劉柳）

Content Determ ination of Ketoprofen in Ketoprofen Enteric-coated Capsulesby Improving HPLC

ZHENG Xuxia1，ZHOU Yuxue2，LIU Peijian1（1.Dept.of Pharmacy，Luoyang Orthopedic Hospital of Henan Province/O rthopedic Hospital of Henan Province，Zhengzhou 450052，China；2.Dept.of Pharmacy，Zhengzhou Children’s Hospital，Zhengzhou 450053，China）

OBJECTIVE：To improve HPLC for content determ ination of ketoprofen in Ketoprofen enteric-coated capsules. METHODS：HPLC method wasadopted.The determination was performed on Chiralpak IC column w ith mobile phase consisted of n-hexane（0.1%TFA）-isopropanol（90∶10，V/V）at a flow rate of 0.8 m L/m in.The detection wavelength was set at 268 nm，and column temperature was 25℃.The sample size was 10μL.RESULTS：The linear range of ketoprofen were 0.025-0.5 mg/m L（r＝0.999 8）.The lim it of quantitation was1.0mg/L，and lim it of detection was0.2mg/L.RSDsof precision，stability and reproducibility testswere lower than 2%；recoverieswere 96.36%-100.32%（RSD＝1.87%，n＝6）.CONCLUSIONS：Themethod is simple，accurate and rapid，and can be used for the content determ ination of ketoprofen in Ketoprofen enteric-coated capsules.

Ketoprofen enteric-coated capsules；Ketoprofen；Content；HPLC

R 917

A

1001-0408（2017）18-2579-03

2016-06-30

2016-12-16）

＊主管藥師，碩士。研究方向：臨床藥學(xué)。電話：0371-85965137。E-mail：zhengxuxia1988@163.com

#通信作者：副主任藥師。研究方向：中草藥分析及質(zhì)量控制。電話：0371-85965023。E-mail：707655091@qq.com Exceed-Cd-20型實(shí)驗(yàn)室超純水機(jī)（蘇州艾科水處理設(shè)備工程有限公司）。

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.18.37