張雅麗，孫巍，張磊，毛明朋，葉正良（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，天津300193；.天士力制藥集團(tuán)股份有限公司，天津30040；3.天士力控股集團(tuán)有限公司，天津30040）

加味逍遙方10味藥材及其提取物中18種有毒害元素的含量測定及其轉(zhuǎn)移率研究

張雅麗1，2＊，孫巍2，張磊2，毛明朋2，葉正良3#（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，天津300193；2.天士力制藥集團(tuán)股份有限公司，天津300402；3.天士力控股集團(tuán)有限公司，天津300402）

目的：建立同時測定加味逍遙方10味藥材及其提取物中18種有毒害元素含量的方法，并研究上述元素的轉(zhuǎn)移率。方法：采用微波消解-電感耦合等離子體質(zhì)譜法。射頻功率為1.50 kW，霧化氣壓力為720 kPa，采樣深度為7mm，等離子氣體流速為15.0 L/min，載氣流速為1.00 L/min，霧化室溫度為2℃，氦氣流速為4.5m L/min，測量點(diǎn)數(shù)/峰為3，數(shù)據(jù)采樣模式為跳峰采集。結(jié)果：砷（As）、鉛（Pb）、銅（Cu）、汞（Hg）、鎘（Cd）、鉬（Mo）、釩（V）、鉻（Cr）、錳（Mn）、鐵（Fe）、鎳（Ni）、鋅（Zn）、釕（Ru）、銠（Rh）、鈀（Pd）、鋨（Os）、銥（Ir）、鉑（Pt）檢測進(jìn)樣量線性范圍為0～500.17 ppb（r為0.999 4～0.999 9）；檢測限為0.000 4～5.341 0 ng/g；重復(fù)性試驗(yàn)的RSD＜5.0%；平均加樣回收率為82.0%～117.9%（RSD為0.2%～5.7%，n＝9）。Ru、Rh、Pd、Os、Ir、Pt、Hg未在藥材和提取物中檢出，其余11種元素在提取物中的轉(zhuǎn)移率為1.46%～31.90%。結(jié)論：該方法操作簡便，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性好，可用于加味逍遙方中10味藥材及其提取物中18種有毒害元素含量的同時測定。加味逍遙方提取物在制備過程中降低了有毒害元素的含量，可在一定程度上保證用藥的安全性。

加味逍遙方；轉(zhuǎn)移率；電感耦合等離子體質(zhì)譜法；藥材；提取物

加味逍遙方源于逍遙散，出自宋代太平惠民和劑局方，原方由柴胡、白芍、當(dāng)歸、茯苓、白術(shù)、當(dāng)歸、薄荷、甘草8味藥材組成，后加入牡丹皮、梔子成方，具有舒肝清熱、健脾養(yǎng)血的作用[1]。隨著我國中藥現(xiàn)代化和國際化的不斷推進(jìn)，對復(fù)方中有毒有害元素的研究和檢測已經(jīng)成為中成藥安全性的關(guān)注焦點(diǎn)[2-5]。與此同時，中藥材中有毒害元素的含量超標(biāo)問題也成為當(dāng)今國內(nèi)外熱門話題，也是影響中藥走向世界的關(guān)鍵因素之一[6-8]。當(dāng)前，世界各國或者國際組織都對中藥材或植物藥中有毒害元素含量作了相應(yīng)規(guī)定，其中以歐洲藥品評審局（EMA）對有毒害元素的控制規(guī)定最為全面，包括砷（As）、鉛（Pb）、銅（Cu）、汞（Hg）、鎘（Cd）、鉬（Mo）、釩（V）、鉻（Cr）、錳（Mn）、鐵（Fe）、鎳（Ni）、鋅（Zn）、釕（Ru）、銠（Rh）、鈀（Pd）、鋨（Os）、銥（Ir）、鉑（Pt）共18種[9]，建立滿足其規(guī)定的有毒害元素控制方法將有助于中藥走出國門。

因此，本試驗(yàn)采用微波消解-電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）對加味逍遙方10味藥材及其提取物中18種有毒害元素的含量進(jìn)行測定，同時計算從單味藥材到組方提取物各金屬元素的轉(zhuǎn)移率，為中藥復(fù)方提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定和臨床合理應(yīng)用提供一定科學(xué)依據(jù)[10]。

1 材料

1.1 儀器

7700型ICP-MS儀（美國Agilent公司）；M illi-Q型超純水處理系統(tǒng)（美國M illipore公司）；Mars-6型微波消解儀（美國CEM公司）；ME235S型電子分析天平、BS2243型電子分析天平（德國Sartorius公司）。

1.2 試劑

加味逍遙方提取物（天津天士力現(xiàn)代中藥資源有限公司自制，批號：20150603、20150605、20150606、20150607）；Ir、Rh、Ru、Pt、Pd、Mo混合標(biāo)準(zhǔn)溶液、Os標(biāo)準(zhǔn)溶液[阿法埃莎（中國）化學(xué)有限公司，批號均為20160310，質(zhì)量濃度均為1 000μg/m L]；硼（Be）、Cr、Mn、Ni、Cu、Fe、Zn、As、銀（Ag）、Cd、鋇（Ba）、鈦（Ti）、V、Pb混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（批號：20160115，質(zhì)量濃度均為10mg/L）；Hg標(biāo)準(zhǔn)溶液（批號：20151215，質(zhì)量濃度均為10mg/L）；銦（In）、鍺（Ge）、鉍（Bi）混合內(nèi)標(biāo)溶液（批號：20160507，各元素質(zhì)量濃度均為100mg/L）和鋰（7Li）、鈷（59Co）、釔（89Y）、鈰（140Ce）、鉈（205Tl）調(diào)諧液（批號：20160507，質(zhì)量濃度均為10μg/m L）均購自美國Agilent公司；柑橘葉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心，編號：GBW 10020）；硝酸為優(yōu)級純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

1.3 飲片

柴胡（批號：20141150）、當(dāng)歸（批號：20141150 20141250）、白芍（批號：20141250）、茯苓（批號：20141250）、白術(shù)（批號：20141150）、甘草（批號：20141150）、梔子（批號：20141150）、丹皮（批號：20141150）、薄荷（批號：20150150）、干姜（批號：20141150）均由天津天士力現(xiàn)代中藥資源有限公司提供，并附有檢驗(yàn)合格報告。

2 方法與結(jié)果

2.1 微波消解條件

微波消解優(yōu)化條件以消解后溶液清亮為觀察指標(biāo)，得出適宜條件，詳見表1。

表1 微波消解條件Tab 1 M icrowavedigestion condition

2.2 ICP-M S條件

射頻功率：1.50 kW；霧化氣壓力：720 kPa；采樣深度：7mm；等離子氣體流速：15.0 L/m in；載氣流速：1.00 L/m in；霧化室溫度：2℃；氦氣流速：4.5m L/m in；測量點(diǎn)數(shù)/峰：3；數(shù)據(jù)采樣模式：跳峰采集，重復(fù)3次，計算平均值。

2.3 溶液的制備

2.3.1 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液精密量取“1.2”項(xiàng)下各混合標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，加2%硝酸制成質(zhì)量濃度為0.5、10、50、100、200、500μg/L的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3.2 Hg標(biāo)準(zhǔn)溶液精密量取“1.2”項(xiàng)下Hg標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，加2%HNO3制成質(zhì)量濃度為0.1、0.5、1、2、5μg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3.3 混合內(nèi)標(biāo)溶液精密量取“1.2”項(xiàng)下混合內(nèi)標(biāo)溶液適量，加水制成質(zhì)量濃度為50.0μg/L的混合內(nèi)標(biāo)溶液。

2.3.4 供試品溶液取樣品粗粉0.5 g，精密稱定，置于耐壓耐高溫聚四氟乙烯（PTFE）消解罐中，加入65%硝酸溶液5m L，加蓋密封，進(jìn)行消解；待消解完成后，開蓋，靜置過夜。翌日，將消解后的溶液轉(zhuǎn)移至50m L PTFE量瓶中，用少量水洗滌消解罐3次，合并洗滌液并定容，搖勻，即得。

2.3.5 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液取標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.5 g，按“2.3.4”項(xiàng)下方法制備標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液。

2.3.6 空白對照溶液按“2.3.4”項(xiàng)下“加入65%硝酸溶液5m L，……合并洗滌液并定容”操作，即得空白對照溶液。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密量取“2.3.1”項(xiàng)下系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，加入相同質(zhì)量濃度的混合內(nèi)標(biāo)溶液（測定時選取的同位素

為51V、52Cr、55M n、56Fe、58Ni、63Cu、64Zn、75As、98Mo、102Ru、103Rh、106Pd、114Cd、190Os、193Ir、195Pt、202Hg、208P b，其中51V、52Cr、55Mn、56Fe、58Ni、63Cu、64Zn以72Ge作為內(nèi)標(biāo)，98Mo、102Ru、103Rh、106Pd、114Cd以115In作為內(nèi)標(biāo)，190Os、193Ir、195Pt、202Hg、208Pb以209Bi作為內(nèi)標(biāo)），按“2.2”項(xiàng)下ICP-MS條件進(jìn)樣測定，記錄分析峰響應(yīng)值。以待測元素進(jìn)樣量（x，ppb）為橫坐標(biāo)、分析峰響應(yīng)值與內(nèi)標(biāo)元素參比響應(yīng)值之比（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程與線性范圍，詳見表2。

2.5 檢測限考察

精密量取“2.3.6”項(xiàng)下空白對照溶液適量，按“2.2”項(xiàng)下ICP-MS條件連續(xù)進(jìn)樣測定11次，以空白對照溶液測定值的3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差除以相應(yīng)元素標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率得出相應(yīng)檢測限，詳見表2。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取加味逍遙方提取物（批號：20150607）適量，按“2.3.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，共6份，按“2.1”項(xiàng)下條件消解，再按“2.2”項(xiàng)下ICP-MS條件進(jìn)樣測定，記錄分析峰響應(yīng)值。結(jié)果，各待測元素分析峰響應(yīng)值的RSD均＜5.0%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

表2 回歸方程、線性范圍與檢測限Tab 2 Regression equations，linear ranges and detection lim its

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的加味逍遙方提取物（批號：20150607）適量，共9份，按“2.1”項(xiàng)下條件消解，分別加入高、中、低質(zhì)量濃度的待測元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，再按“2.3.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2”項(xiàng)下ICP-MS條件進(jìn)樣測定，記錄分析峰響應(yīng)值并計算加樣回收率，結(jié)果見表3。

2.8 樣品中元素含量的測定與轉(zhuǎn)移率的計算

取樣品各適量，分別按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下條件消解，再按“2.2”項(xiàng)下ICP-MS條件進(jìn)樣測定，記錄元素分析峰響應(yīng)值，計算樣品含量，并計算轉(zhuǎn)移率結(jié)果見表4、表5。（轉(zhuǎn)移率＝提取物測定值× 25%/處方中10味藥材投藥量×各味藥材測定元素含量。加味逍遙方提取物為浸膏提取物，平均折干為25%。結(jié)果表明，各元素含量均符合2015年版《中國藥典》規(guī)定，且11種有毒害元素的轉(zhuǎn)移率均在1.50%～31.90%之間。

3 討論

按照歐洲藥典和EMA對原料藥及其提取物中可能含有的有毒害元素安全監(jiān)測的推薦標(biāo)準(zhǔn)，本試驗(yàn)對加味逍遙方中10味藥材及其提取物中18種有毒害元素進(jìn)行測定。結(jié)果表明，各元素的含量值均低于法規(guī)要求限度，表明藥材質(zhì)量整體較好；Ru、Rh、Pd、Os、Ir、Pt、Hg這7種合成過程中常見的金屬催化劑既未在藥材中含有，又未在提取過程中引入，表明在提取物制備過程中工藝控制較為嚴(yán)格。另外在提取物的制備過程中，考慮各味藥材含有的金屬元素在提取過程中可能存在工藝富集現(xiàn)象，藥物之間的相互作用亦可能導(dǎo)致最終提取物中有毒害元素含量的變化，故本試驗(yàn)對有毒害元素轉(zhuǎn)移率進(jìn)行民研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，提取物的制備工藝能夠保證提取物中有毒害元素的控制。

表3 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 3 Resultsof recovery tests（n＝9）

有毒害元素的危害早已引起人們的高度重視，而近年來中藥在該問題方面更受廣大患者關(guān)注[12-15]。根據(jù)有毒害元素的殘留對人體危害的程度，EMA將其分為三類：第一類包括Pt、Pd、Ir、Rh、Ru、Os、Mo、Ni、Cr和V，這類元素對人體可能有致癌作用，其在原料藥及提取物中的殘留量應(yīng)當(dāng)被嚴(yán)格控制；第二類包括Cu和Mn，這兩種元素通常被作為機(jī)體必需的營養(yǎng)元素，對人體危害較低，但其過量仍然會導(dǎo)致相關(guān)疾病的發(fā)生，故殘留量應(yīng)該留意觀察；第三類包括Fe和Zn，這類金屬廣泛存在于自然界，在機(jī)體生長發(fā)育過程中起著不可替代的作用，當(dāng)機(jī)體嚴(yán)重缺乏時很容易造成不同程度的損傷，故對其含量應(yīng)進(jìn)行有效監(jiān)控。絕大多數(shù)元素在中藥材中的含有量主要以不溶相、水溶相、脂溶相形態(tài)存在，并存在不同程度的含量遞減[16-17]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，4批加味逍遙提取物中11種元素轉(zhuǎn)移率排序依次為Cr＜Mo＜V＜Fe＜Cd＜Cu＜Pb＜Zn＜Mn＜Ni＜As，Cr的轉(zhuǎn)移率最低，僅為1.52%，其原因可能為原藥材中Cr的含量低，從原藥材到提取物轉(zhuǎn)移率保持在一個較低的水平。As的轉(zhuǎn)移率最高，其藥效和毒性依賴于自身化學(xué)形態(tài)，不同價態(tài)和形態(tài)的As毒性差別很大：亞砷酸鹽As（Ⅲ）＞砷酸鹽As（Ⅴ）＞一甲基砷（MMA）＞二甲基砷（DMA）＞砷甜菜（AsB）＞砷膽堿（AsC）。加味逍遙方提取物的提取溶劑為水，故檢測到的As含量主要為可溶性砷鹽，且大部分為無機(jī)砷，即便其轉(zhuǎn)移率在所有金屬中最高，最終也會隨排泄物排出體外。這說明，水提工藝能夠保證藥材到提取物過程中有毒害元素的控制，確保用藥安全，這可為今后相關(guān)工藝的制定提供參考依據(jù)。

表4 樣品中18種有毒害元素的含量測定結(jié)果（n＝6，m g/kg）Tab 4 Resultsof contentsdeterm ination of18 toxic elements in sam p les（n＝6，mg/kg）

表5 11種有毒害元素的轉(zhuǎn)移率計算結(jié)果（n＝3）Tab 5 Calculation of transfer ratesof11 toxicmetals（n＝3）

目前，中藥復(fù)方提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中對重金屬的檢測尚無國家法定標(biāo)準(zhǔn)，只能參考《中國藥典》對其相應(yīng)飲片的規(guī)定實(shí)施，這不僅無法真實(shí)反映復(fù)方提取物的質(zhì)量，而且檢測方法的合理性也存在問題。因此，本試驗(yàn)希望為中藥復(fù)方提取物國家標(biāo)準(zhǔn)的制訂以及提取工藝的確定提供一些參考依據(jù)。

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（編輯：張靜）

Study on Contents Determ ination and Transport Rates of 18 Toxic Elements from 10 Ingredients of M odified Xiaoyao Formula and Their Extracts

ZHANG Yali1，2，SUN W ei2，ZHANG Lei2，MAO M ingpeng2，YE Zhengliang3（1.School of TCM，Tianjin University of TCM，Tianjin 300193，China；2.Tasly Pharmaceutical Group Co.，Ltd.，Tianjin 300402，China；3.Tasly Holding Group Co.，Ltd.，Tianjin 300402，China）

OBJECTIVE：To establish amethod for simultaneousdeterm ination of 18 toxic elements from 10 ingredientsof Modified xiaoyao formula and their extracts，and to study transport ratesof above elements.METHODS：M icrowave digestion-inductively coupled plasmamass（ICP-MS）wasused to determine above elements.Radio-frequency power was 1.50 kW，atom ization pressurewas720 kPa，sampling depth was7mm，plasma gas flow ratewas15.0 L/min，carrier gas flow ratewas1.00 L/min，spray chamber temperature was 2℃，He flow rate was 4.5 m L/m in under collision mode，measurement points/peak was 3，data acquisition mode was jump mode.RESULTS：The linear rangesof As，Pb，Cu，Hg，Cd，Mo，V，Cr，Mn，F(xiàn)e，N i，Zn，Ru，Rh，Pd，Os，Ir，Pt was 0-500.17 ppb（r was 0.999 4-0999 9）；LOD was 0.000 4-5.341 0 ng/g；RSD of repeatability testswas all lower than 5.0%；average recoverieswere 82.0%-117.9%（RSD＝0.2%-5.7%，n＝9）.Ru，Rh，Pd，Os，Ir，Pt，Hg had not been detected. The transfer rates of 11 metals in the extracts ranged 1.46%-31.90%.CONCLUSIONS：Themethod is simple，precise，stable and repeatable，and can be used for simultaneous determ ination of 18 toxic elements in 10 ingredients of Modified xiaoyao formula and their extracts.The contents of toxic elements are decreased during the preparation of Modified xiaoyao formula extract to guarantee the safety of drug use to certain extent.

Modified xiaoyao formula；Transfer rates；ICP-MS；Medicinalmaterials；Extract

R 927

A

1001-0408（2017）18-2564-05

2016-03-28

2016-05-27）

＊碩士研究生。研究方向：中藥質(zhì)量評價。E-mail：dophiner5@sina.com

#通信作者：研究員。研究方向：中藥學(xué)和藥物分析。電話：022-86342066。E-mail：yezl@tasly.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.18.33