通常，為了保持飲料的原始風(fēng)味以及滿足生產(chǎn)中PET瓶滅菌的需要，飲料在灌裝時(shí)必須避免過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的受熱以及包材輸送、灌裝等暴露作業(yè)時(shí)受到微生物污染的機(jī)會(huì)，企業(yè)一般會(huì)選擇適用范圍廣的無(wú)菌工藝進(jìn)行生產(chǎn)。然而無(wú)菌生產(chǎn)工藝引入的變量很多，諸如生產(chǎn)區(qū)的設(shè)計(jì)及其設(shè)備布局、生產(chǎn)時(shí)的環(huán)境狀況、所有與生產(chǎn)相關(guān)的設(shè)備及物料的污染狀況、人員操作和衛(wèi)生狀況等，每一個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)最終產(chǎn)品的質(zhì)量都至關(guān)重要。

為確保無(wú)菌生產(chǎn)工藝系統(tǒng)中無(wú)菌的可靠性和適應(yīng)性，各項(xiàng)國(guó)內(nèi)外法規(guī)及指導(dǎo)文件均要求通過(guò)一定的驗(yàn)證方法對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證。目前，多數(shù)廠家采用培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)來(lái)證明其無(wú)菌工藝的可靠性。培養(yǎng)基灌裝又稱無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)，使用培養(yǎng)基替代產(chǎn)品進(jìn)行無(wú)菌灌裝，從而對(duì)無(wú)菌工藝、設(shè)備、環(huán)境、操作、人員等進(jìn)行驗(yàn)證。培養(yǎng)基灌裝在某種意義上是一種挑戰(zhàn)性試驗(yàn)，甚至比最差情況下的挑戰(zhàn)還要嚴(yán)格，幾乎任何情況下微生物在培養(yǎng)基中的增殖都要比在實(shí)際產(chǎn)品中更加容易。

1?培養(yǎng)基灌裝測(cè)試的前提條件

1.1?管理方面

檢驗(yàn)室可以驗(yàn)證包括檢驗(yàn)室環(huán)境、儀器設(shè)備及人員操作等方面。生產(chǎn)線上所有的樣品最終都會(huì)送至檢驗(yàn)室檢驗(yàn)并進(jìn)行結(jié)果判定，如果檢驗(yàn)室給出的結(jié)果有誤，就會(huì)使整個(gè)驗(yàn)證進(jìn)度停滯不前，甚至走向錯(cuò)誤的檢查方向。

制定詳細(xì)的驗(yàn)證方案、操作要點(diǎn)。一份實(shí)施性強(qiáng)的驗(yàn)證計(jì)劃才能保證所有的人、事向既定方向邁進(jìn)，保證驗(yàn)證的最終結(jié)果。配置培養(yǎng)基的數(shù)量是否足以灌裝足夠的瓶數(shù)、灌裝頻率、測(cè)試過(guò)程中灌裝環(huán)境的殺菌周期、成品的培養(yǎng)條件及培養(yǎng)方式等均關(guān)系到培養(yǎng)基灌裝測(cè)試的結(jié)果。

提前制定并詳細(xì)列出有效的、切實(shí)可行的可接受標(biāo)準(zhǔn)。

品控、檢驗(yàn)及操作人員通過(guò)無(wú)菌工藝及無(wú)菌驗(yàn)證相關(guān)培訓(xùn)灌裝。

1.2?人員方面

具有資質(zhì)合格的無(wú)菌檢查、分析人員。檢驗(yàn)人員的無(wú)菌意識(shí)及操作技能需要通過(guò)考核，并且考慮一定的檢驗(yàn)誤差（一般要求考慮1%）。

單機(jī)操作人員能夠熟練操作單機(jī)，并能解決生產(chǎn)運(yùn)行過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題。

相關(guān)人員掌握無(wú)菌啟動(dòng)程序及步驟。

1.3?設(shè)備方面

生產(chǎn)線各單機(jī)工況正常。

生產(chǎn)線運(yùn)行流暢（吹瓶機(jī)、風(fēng)送道、灌裝機(jī)聯(lián)線運(yùn)行效率達(dá)到80%以上）。

各無(wú)菌線單機(jī)通過(guò)無(wú)菌檢測(cè)及驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。

聯(lián)線無(wú)菌水包測(cè)試通過(guò)。

2?培養(yǎng)基的選擇

PET瓶飲料無(wú)菌灌裝工藝驗(yàn)證選擇LG培養(yǎng)基（Linden?Grain?Medium），因?yàn)樗梢越o潛在的污染源，如酵母、霉菌、病毒等各種微生物提供一個(gè)敏感、養(yǎng)分充足的溫床;PH可調(diào)節(jié)至與生產(chǎn)線所產(chǎn)飲料的PH一致。LG培養(yǎng)基是澄清透明的淡黃色液體，很容易目視檢查;而且它反映迅速，變化程度高，幾乎所有微生物污染均可被發(fā)現(xiàn)。使用前，建議在檢驗(yàn)室進(jìn)行模擬測(cè)試，以檢查培養(yǎng)基的穩(wěn)定性。

3?培養(yǎng)基的滅菌

LG培養(yǎng)基在線滅菌條件需足夠安全以保證其無(wú)菌性。一般行業(yè)內(nèi)對(duì)中性LG培養(yǎng)基使用的殺菌溫度均為135℃～142℃，時(shí)間均不低于30s。

4?培養(yǎng)基的灌封操作

按照既定生產(chǎn)程序需獲得至少30000瓶培養(yǎng)基。這些瓶子將在30℃或環(huán)境溫度下儲(chǔ)存14天。然后，儲(chǔ)存的瓶子將在光源下作視覺(jué)檢驗(yàn)，以驗(yàn)證微生物影響（混濁、菌絲生長(zhǎng)）。灌封過(guò)程要求按照既定程序進(jìn)行，詳細(xì)記錄生產(chǎn)過(guò)程，完整進(jìn)行取樣及分析。

任何灌裝的產(chǎn)品都應(yīng)該在培養(yǎng)前進(jìn)行檢查，發(fā)現(xiàn)任何不合格品（如容器密封性存在問(wèn)題或完整性不好）時(shí)，都應(yīng)該被剔除并記錄（還包括檢查后被損壞的，如向培養(yǎng)箱中轉(zhuǎn)移的過(guò)程中出現(xiàn)的）。在下游輸送鏈上倒瓶或掉下輸送鏈的產(chǎn)品也應(yīng)被剔除。

儲(chǔ)存培養(yǎng)用的產(chǎn)品須完整裝箱，避免放在框內(nèi)嚴(yán)重?cái)D壓;瓶子須垂直擺放，最多堆放兩層;保溫室須臨近車間。結(jié)果檢查時(shí)，必須由有經(jīng)驗(yàn)的QC人員負(fù)責(zé)檢查每瓶培養(yǎng)基是否被污染。培養(yǎng)期間定期對(duì)灌裝培養(yǎng)基進(jìn)行目檢，記錄下每次檢出的污染瓶數(shù)及出現(xiàn)污染菌的相應(yīng)跺板號(hào)。培養(yǎng)結(jié)束，逐瓶檢查有無(wú)微生物生長(zhǎng)或變渾濁，記錄出現(xiàn)污染的瓶數(shù)和被檢查的總瓶數(shù)。檢查時(shí)將每瓶培養(yǎng)基在明亮光源下仔細(xì)目測(cè)，透明、澄清、無(wú)渾濁的培養(yǎng)基判為無(wú)微生物生長(zhǎng);如培養(yǎng)基渾濁或有懸浮的菌絲或菌落，則需作進(jìn)一步的微生物生長(zhǎng)檢查，以確定培養(yǎng)基是否正在染菌。

培養(yǎng)基灌裝測(cè)試指標(biāo)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于飲料生產(chǎn)要求，屬于絕對(duì)無(wú)菌的標(biāo)準(zhǔn)，而飲料生產(chǎn)只需達(dá)到商業(yè)無(wú)菌。培養(yǎng)基灌裝合格標(biāo)準(zhǔn)為通常約定的在95%的置信度下中性LG培養(yǎng)基實(shí)際污染率不高于萬(wàn)分之一。

5?破損產(chǎn)品的排除

瓶、蓋密封不良導(dǎo)致的污染最為普遍，這類培養(yǎng)基不列入污染瓶數(shù)。如何排除密封不良導(dǎo)致的污染是培養(yǎng)基灌裝測(cè)試成功的要素之一。目前普遍使用的是加壓法檢測(cè)（圖1所示）及導(dǎo)電法檢測(cè)（圖2所示）。導(dǎo)電法用燒杯配置濃鹽水并將樣品瓶半腰割開(kāi)，保留瓶子的上半部分，倒掉里面液體，裝入適量（不要過(guò)滿）鹽水，并將其倒置，使瓶口浸沒(méi)于鹽水中;萬(wàn)用表調(diào)到歐姆檔，將一個(gè)表頭置于樣品瓶的鹽水中，另一個(gè)置于燒杯的鹽水中讀數(shù);72h后再測(cè)一次;若密封不良，萬(wàn)用表即會(huì)測(cè)出電阻。由于加壓法為破壞性測(cè)試，一般先用導(dǎo)電法檢測(cè)后再用加壓法，且前者更為靈敏。

6?小結(jié)

培養(yǎng)基灌裝測(cè)試驗(yàn)證一個(gè)無(wú)菌工藝，全面反映整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程采用無(wú)菌工藝生產(chǎn)無(wú)菌產(chǎn)品的能力，包括對(duì)無(wú)菌工藝過(guò)程、無(wú)菌保證水平的綜合評(píng)估（設(shè)備、人員、操作、滅菌過(guò)程、環(huán)境等等），對(duì)無(wú)菌操作人員進(jìn)行資格確認(rèn)，確認(rèn)進(jìn)行重大變更后對(duì)無(wú)菌工藝的影響，作為問(wèn)題調(diào)查的手段。由于無(wú)菌工藝本身的多樣性和復(fù)雜性，很難對(duì)其中的每個(gè)細(xì)節(jié)面面俱到，文中僅對(duì)培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)中常見(jiàn)的共性問(wèn)題作了闡述，愿與同行們商榷，以達(dá)共識(shí)。