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基于愈創(chuàng)木酚熒光減量準(zhǔn)確測定過氧化物酶活性的新方法

2015-07-30 07:27趙煬等
分析化學(xué) 2015年7期
關(guān)鍵詞:產(chǎn)物熒光活性

趙煬等

摘 要 利用H2O2/過氧化物酶(POD)/愈創(chuàng)木酚(GA)反應(yīng)體系的產(chǎn)物(470 nm)吸光度去定量POD活性是目前常用方法之一,但產(chǎn)物不穩(wěn)定且對比色皿有吸附現(xiàn)象是該反應(yīng)的主要缺點之一。為了解決此問題,本研究利用GA的熒光特性建立了一種能準(zhǔn)確測定POD活性的方法。用辣根過氧化物酶(HRP)作為測試樣品得到了以下優(yōu)化條件:0.5 mmol/L GA,0.5 mmol/L H2O2,0.05 mol/L PBS緩沖液(pH 6.0),反應(yīng)溫度20℃,樣品耗量20 μL;本方法的線性范圍為500~60000 U/L(r=0.9993),RSD≤2.4%(n=11),檢出限為385 U/L。在優(yōu)化條件下,用白蘿卜提取液作為測試樣品,用本方法((9714±132) U/L)與比色法((9926±352) U/L)和循環(huán)催化流動分析法((9608±456) U/L)進行了對比,結(jié)果表明, 3種方法相互一致性很好。endprint

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