秦淑美鄒建香陳 華

(1.江蘇省金湖縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,江蘇金湖 211600; 2.江蘇省金湖縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,江蘇金湖 211600; 3.江蘇省金湖縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,江蘇金湖 211600)

小鵝瘟病毒抗原免疫雞對(duì)蛋黃抗體產(chǎn)生規(guī)律的研究

秦淑美1鄒建香2陳 華3

(1.江蘇省金湖縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,江蘇金湖 211600; 2.江蘇省金湖縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,江蘇金湖 211600; 3.江蘇省金湖縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,江蘇金湖 211600)

小鵝瘟病是3周齡以內(nèi)雛鵝的一種急性或亞急性的敗血性傳染病,傳播快、發(fā)病率和致死率高。本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)產(chǎn)蛋雞注射不同劑型小鵝瘟病毒的抗原,檢測(cè)抗體產(chǎn)生規(guī)律,找出制造高效率、高質(zhì)量抗小鵝瘟病毒蛋黃抗體的方法,為防治小鵝瘟病的發(fā)生和發(fā)展,降低養(yǎng)鵝的風(fēng)險(xiǎn)積累資料。

小鵝瘟抗原;免疫;抗體

小鵝瘟是由小鵝瘟病毒引起的雛鵝急性或亞急性的敗血性傳染病。本病主要侵害出殼后4～20日齡的雛鵝，具有傳播快，發(fā)病率和致死率高的特點(diǎn)。本病以消化道和中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂為特征。小鵝瘟病毒屬于細(xì)小病毒科，細(xì)小病毒屬，鵝細(xì)小病毒。病毒球形，無(wú)囊膜，二十面體對(duì)稱，單股DNA病毒。對(duì)不良環(huán)境的抵抗力強(qiáng)。本病毒存在于患病雛鵝的肝，脾，腎，胰，腦，血液，腸道和心肌等各臟器及組織中，病毒初次分離時(shí)，將病料制成懸液接種于12～14日齡易感鵝胚的絨尿腔或絨尿膜，鵝胚一般在接種后5～8d死亡，鵝胚分離病毒連續(xù)通過(guò)多次傳代后，對(duì)胚胎致死時(shí)間穩(wěn)定在3～5d。本試驗(yàn)通過(guò)收集接種了標(biāo)準(zhǔn)的小鵝瘟病毒株，48～120h死亡的鵝胚絨尿液，加入0.05%甲醛，置37℃24h滅活后，置4℃冰箱保存待用。

各種抗生素和磺胺藥對(duì)小鵝瘟病均無(wú)治療作用。本病的特異性防治依賴于被動(dòng)免疫。在本病流行區(qū)域，或已被本病毒污染的炕房，雛鵝出炕后立即皮下注射蛋黃抗體，可達(dá)到預(yù)防或控制本病的流行和發(fā)生。蛋黃抗體的瓊擴(kuò)效價(jià)必須在1：8以上，抗體用量與效價(jià)有密切關(guān)系。因此生產(chǎn)中非常需要蛋黃抗體預(yù)防和治療小鵝瘟。

本次試驗(yàn)通過(guò)給蛋雞注射小鵝瘟病毒的不同劑型免疫抗原，檢測(cè)雞蛋黃中小鵝瘟抗體的產(chǎn)生規(guī)律，為生產(chǎn)環(huán)保，科學(xué)，高效，特效，無(wú)毒副作用的小鵝瘟蛋黃抗體積累資料。

1 材料和試劑

（1）水劑抗原：滅活小鵝瘟病毒絨尿液加生理鹽水1：1稀釋。

油劑抗原：滅活小鵝瘟病毒絨尿液與礦物油1：1混勻。

（2）瓊擴(kuò)平板（8%氯化鈉溶液中加入1.0g優(yōu)質(zhì)瓊脂粉，加熱融化后，加入終濃度為0.01%硫柳貢防腐，澆制凝膠板，冷卻后置4℃保存。）

（3）標(biāo)準(zhǔn)小鵝瘟瓊擴(kuò)診斷抗原。（4）健康產(chǎn)蛋雞36只。

2 方法

（1）免疫方法：每只雞肌肉注射水劑抗原1.0ml。共注射12籠，每籠3只。從第6天開始，每3-5天取蛋檢測(cè)，至抗體下降接近（0-1）log2時(shí)進(jìn)行二次免疫。

再次免疫分二組：第一組6籠：每只雞肌肉注射1.0ml水劑抗原，第二組6籠：每只雞肌肉注射1.0ml油劑抗原。

（2）抗體檢測(cè)：免疫前后檢測(cè)雞蛋黃中抗小鵝瘟病毒的瓊擴(kuò)抗體。每組取同一天生的蛋分成若干組，每只蛋取等量蛋黃混合作1：1稀釋，離心棄脂肪后，取液作檢測(cè)。將瓊擴(kuò)凝膠板按中央1孔外圍6孔打孔，孔徑3mm，間距4mm，加樣量為25μl，同時(shí)做陰陽(yáng)性血清對(duì)照。加樣后置37℃濕盒孵育24h，再室溫放置24～48h，觀察判定結(jié)果：與標(biāo)準(zhǔn)抗原形成白色沉淀線的抗體最大稀釋倍數(shù)即為蛋黃抗體的效價(jià)。

3 試驗(yàn)經(jīng)過(guò)和結(jié)果

取小鵝瘟水劑抗原，翅下肌肉注射1.0ml小鵝瘟病毒抗原瓊擴(kuò)抗體為陰性的普通蛋雞36只，雞群未有應(yīng)激現(xiàn)象。雞只正?；顒?dòng)、產(chǎn)蛋。隨后定期集蛋并檢測(cè)其抗小鵝瘟病毒抗體水平。

第27d，測(cè)得雞蛋黃中抗小鵝瘟抗體滴度下降到（0～1）log2時(shí)，對(duì)雞群進(jìn)行分組。一組注射油劑抗原每只1.0ml。另一組注射水劑抗原1.0ml/只。

收集的雞蛋分組，1：1稀釋蛋黃離心棄脂肪后取液檢測(cè)，結(jié)果如下：

一免后蛋黃中抗體水平如下：

二免后蛋黃中抗體水平如下：

4 小結(jié)

（1）水劑型抗原首次免疫雞只，只要6d就能產(chǎn)生超過(guò)有效治療和預(yù)防小鵝瘟病毒感染的抗體效價(jià)3log2，平均抗體水平達(dá)到5.8log2。

（2）首次水劑型抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生的有效抵制小鵝瘟病毒感染的蛋黃抗體水平（高于5.8log2）維持的時(shí)間短，只能維持20d左右。20d以后，蛋黃抗體水平已低至3log2，抗體滴度已不能有效保護(hù)雛鵝抵抗外界強(qiáng)毒的感染，27d時(shí)，部分雞只的蛋黃抗體已檢測(cè)不到。

（3）第27d，分水劑和油劑兩種劑型再次接種免疫雞只，水劑型抗原再次加強(qiáng)免疫后12d，抗體水平上升到3.6log2，然后一直維持這樣的水平（3～6）log2。二次免疫后的2個(gè)月內(nèi)，蛋黃抗體最高只能達(dá)到6log2。二次免疫后54d時(shí)，蛋黃抗體降至3.4log2。油劑型再次加強(qiáng)免疫后，蛋黃抗體水平上升的很快很強(qiáng)，免疫后2個(gè)月最高可達(dá)到11.2log2。并且維持的時(shí)間更為持久，二次免疫54d時(shí)，機(jī)體產(chǎn)生的蛋黃抗體仍在7.4log2，比水劑抗原產(chǎn)生的滴度高出4log2。

5 分析和討論

本試驗(yàn)用小鵝瘟病毒抗原水劑和油劑兩種劑型免疫產(chǎn)蛋雞，第一次用水劑可以讓雞群在短時(shí)間內(nèi)快速產(chǎn)生抗小鵝瘟病毒的蛋黃抗體，當(dāng)抗體下降到一定值時(shí)用水劑和油劑進(jìn)行第二次免疫，產(chǎn)生的蛋黃抗體水平有明顯的區(qū)別，水劑型產(chǎn)生的蛋黃抗體無(wú)論在維持高滴度效價(jià)的時(shí)間和最高滴度效價(jià)都遠(yuǎn)不如油劑型好。因此，在相同劑量的前提下，二免用油劑型的抗原對(duì)蛋黃免疫抗體產(chǎn)生效果更好。

[1]刁有祥.簡(jiǎn)明水禽疾病診斷與防治原色圖譜[M].化學(xué)工業(yè)，2009.