段玲 韓銳 湃孜萊提·哈斯木

（新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 產(chǎn)前診斷室，新疆維吾爾自治區(qū) 烏魯木齊市 830054）

耳聾是影響人類健康和致殘的常見病，據(jù)各國統(tǒng)計平均每1000個新生兒中就有1個耳聾兒[1］。經(jīng)過全國耳聾分子流行病學(xué)調(diào)查研究顯示[2，3］，GJB2、SLC26A4、線粒體DNA 12SrRNA的1555和1494這3個基因的致病突變是造成遺傳性耳聾的主要病因。由于耳聾發(fā)病率較高，這讓很多耳聾患者家庭陷入兩難：一方面聾啞夫妻雙方生育聾兒風(fēng)險較正常人群高；另一方面聾啞夫妻比正常人更希望有一個健康的孩子。對于環(huán)境因素導(dǎo)致的耳聾，可以通過預(yù)防感染和加強(qiáng)孕期圍產(chǎn)期的保健，避免應(yīng)用耳聾性藥物等措施有效地預(yù)防。對于遺傳性耳聾的預(yù)防，明確耳聾致病基因是關(guān)鍵，同時對耳聾患者家庭的遺傳咨詢是十分重要的，關(guān)系到我國優(yōu)生優(yōu)育的人口政策執(zhí)行，關(guān)系到我國社會長遠(yuǎn)發(fā)展的戰(zhàn)略需求。

1 研究對象和方法

1.1 研究對象 2014年1月至2014年12月共有3個耳聾家庭來遺傳咨詢門診就診，3個家庭的夫婦均為聾啞人。測聽顯示受檢查均為重度到極重度耳聾個體，3個家庭均為首次生育需求，3個家庭的父母均聽力正常。

1.2 研究方法

1.2.1 DNA提取方法 采集受檢者外周血2～3ml，應(yīng)用試劑盒（北京天根生化科技有限公司）提取全血DNA，提取步驟參照試劑盒提供的使用說明進(jìn)行。取2μl基因組DNA經(jīng)紫外分光光度計進(jìn)行濃度和純度檢測，其余保存于－20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 耳聾基因芯片檢測 應(yīng)用遺傳性耳聾基因芯片檢測試劑盒（博奧生物有限公司的芯片（Microarray）技術(shù)對GJB2、SLC26A4、線粒體12SrRNA和GJB3四個耳聾相關(guān)基因的9個致聾突變位點進(jìn)行檢測。檢測的遺傳性耳聾基因突變熱點包括GJB2基因的35、176、235及299位點，SLC26A4基因的2168和IVS7－2位點，線粒體12SrRNA基因的1494和1555位點，以及GJB3基因的538位點。該試劑盒以基因組DNA為模板，采用帶有Tag標(biāo)簽序列的基因位點特異性引物對相關(guān)突變位點所在的基因片段進(jìn)行擴(kuò)增和熒光標(biāo)記，然后將擴(kuò)增產(chǎn)物與能夠識別相應(yīng)標(biāo)簽序列的基因芯片進(jìn)行雜交，通過微陣列芯片掃描儀對芯片進(jìn)行掃描，最后將掃描結(jié)果進(jìn)行判定和數(shù)據(jù)分析得到9個突變位點的檢測結(jié)果。

2 結(jié) 果

3個家庭耳聾基因檢測結(jié)果見表1。

表1 3個家庭耳聾基因檢測結(jié)果

3 討 論

通過我們耳聾家系的基因檢測及大量的研究表明，耳聾致病基因雖然具有較高的基因和位點異質(zhì)性，但大部分非綜合征性聾多由少數(shù)幾個熱點基因突變引起，包括 GJB2基因、GJB3基因、SLC26A4基因、線粒體12Sr RNA基因等，這使遺傳性聾的篩查成為可能，加上基因芯片技術(shù)的日益成熟，耳聾基因篩查在世界范圍內(nèi)得到關(guān)注[4－7］。以往多用限制性酶切、測序、斑點雜交或基因掃描技術(shù)進(jìn)行分子診斷，近年來耳聾芯片檢測作為新生技術(shù)正在遺傳性耳聾基因診斷中發(fā)揮重要作用，這幾種診斷技術(shù)都各有利弊。與傳統(tǒng)的檢測方法相比，它具有快速、高通量、高準(zhǔn)確性、低成本等特點。更重要的是它可以同時檢測多突變位點，這是傳統(tǒng)方法無法解決的問題。目前國內(nèi)有多家醫(yī)院陸續(xù)開展了這方面的應(yīng)用研究[8，9］。

如何向有遺傳咨詢要求的耳聾夫婦提供準(zhǔn)確的遺傳信息和指導(dǎo)，一直是遺傳學(xué)工作者面臨的難題。耳聾的致殘因素很多，不能確定病因的耳聾遺傳咨詢，很難確定遺傳模式以及預(yù)測再發(fā)風(fēng)險。本研究3對耳聾家庭，耳聾夫婦雙方雖然表型相同，但遺傳咨詢與指導(dǎo)的內(nèi)容應(yīng)根據(jù)病因的不同而有所差異。

3.1 1號家庭 夫婦雙方為聾啞人，夫婦二人的耳聾基因檢測結(jié)果顯示男方檢測出是SLC IVS 7－2A＞G雜合突變，女方檢測出是12SrRNA 1555A＞G均質(zhì)突變，男方為先天性耳聾，女方為藥物致聾。如果男方是單基因的遺傳性耳聾，那么他肯定攜帶SLC基因未檢測到的罕見位點突變，才會表現(xiàn)出耳聾的癥狀。由于檢測采用的是芯片篩查的方法，沒有獲得SLC基因的全長，因此對于該對夫婦的指導(dǎo)意見如下：

3.1.1 男方經(jīng)過測序確認(rèn)攜帶SLC基因其他芯片篩查位點以外的罕見位點突變，女方SLC基因測序無突變，則后代SLC基因?qū)е碌亩@發(fā)病率為0，攜帶率為1/4。

3.1.2 男方經(jīng)過測序確認(rèn)攜帶SLC基因其他芯片篩查位點以外的罕見位點突變，女方SLC基因測序也攜帶同樣的罕見位點雜合突變，則后代發(fā)病率1/4，正常率1/4，攜帶率1/2。

3.1.3 女方為12SrRNA 1555A＞G均質(zhì)突變，那么她的后代也為12SrRNA 1555A＞G均質(zhì)突變，后代因其遵循母子遺傳方式100%的可能為12SrRNA 1555A＞G均質(zhì)突變的攜帶者，男女?dāng)y帶均等，攜帶此突變個體對氨基糖苷類抗生素極為敏感。小劑量使用即可導(dǎo)致重度聽力損失，做好用藥指導(dǎo)，其后代應(yīng)終身絕對禁止使用氨基糖苷類抗生素，避免耳聾的發(fā)生。[10］

3.2 2號家庭 夫婦雙方為聾啞人，夫婦二人的耳聾基因檢測結(jié)果顯示男方檢測出是GJB2 35delG雜合突變，女方檢測出是GJB2 35delG、SLC IVS 7－2A＞G雜合突變，男女雙方均為先天性耳聾。如果確定男女雙方都是遺傳性耳聾的話，那么男方肯定攜帶有芯片檢測以外的GJB2罕見位點的突變才會導(dǎo)致耳聾，目前尚沒有文章報道同時攜帶GJB2 35delG、SLC IVS 7－2A＞G雜合突變會致病的的先例，因此如果女方為先天性遺傳性耳聾那么女方肯定攜帶有芯片檢測以外的GJB2罕見位點或者是SLC罕見位點的突變才會導(dǎo)致耳聾。因此針對這對夫妻遺傳指導(dǎo)意見比較復(fù)雜。

3.2.1 假如夫妻雙方都攜帶GJB2的罕見致病突變，那么后代發(fā)病率為100%。如果一個帶有罕見致病突變，另一個沒有，那么發(fā)病率為1/2，攜帶率1/2。如果兩人都不攜帶GJB2的罕見致病突變那么發(fā)病率為1/2，正常率1/4。

3.2.2 女方攜帶SLC突變，如果她是這個基因?qū)е碌亩@那么她很可能攜帶一個罕見位點突變，男方如果SLC基因全測序完全正常的話后代SLC致聾風(fēng)險為0，如果男方SLC測序有其他致病突變，則后代發(fā)病率1/4，攜帶率1/2，正常1/4。

3.3 3號家庭 夫婦雙方為聾啞人，夫婦二人的耳聾基因檢測結(jié)果顯示芯片篩查雙方均未檢測出突變。由于夫妻雙方均為后天性耳聾，夫婦二人的耳聾基因檢測結(jié)果顯示，均未攜帶GJB2、SLC26A4、12SrRNA、CJB3基因突變。此結(jié)果可排除中國人最常見的9個耳聾基因位點突變。但不能排除其他少見耳聾基因位點存在突變，建議夫婦雙方耳聾患者進(jìn)一步進(jìn)行SLC 26A4（PDS）基因全序列分析。另一方面也可能提示二人環(huán)境因素致聾可能性存在，如這樣其后代患遺傳性耳聾的風(fēng)險大大降低，即使存在較少但耳聾基因?qū)е露@的可能性。但父母同時成為少見致聾基因攜帶者的可能性非常低，對后代的風(fēng)險預(yù)值正常大于不正常。

通過本研究中的3個家庭，有2個聾啞夫婦家庭檢測出有常見耳聾致病基因的突變，一個家庭未檢測出常見的耳聾致病基因突變。針對目前的檢測結(jié)果我們只能給出可能的生育風(fēng)險分析，為聾啞夫婦家庭生育孩子提供一些初步的指導(dǎo)。本研究的不足之處在于未對基因芯片檢測結(jié)果進(jìn)行測序驗證突變檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此未能給出聾啞夫婦明確的耳聾原因。建議這些聾啞夫婦家庭在孕前一定要明確耳聾原因，避免聽力障礙孩子的出生。

我國聽力語言殘疾者甚眾，并以每年3萬耳聾的速度增長[11］，耳聾出生缺陷也是影響我國出生人口素質(zhì)的重要問題之一。隨著我國對遺傳性耳聾認(rèn)識的深入，耳聾基因篩查與遺傳咨詢逐漸成為明確耳聾病因，預(yù)防遺傳性耳聾的主要手段之一。

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